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指示剂 核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色.溴酚兰在碱性液体中 呈紫兰色,在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中,溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色,它在 1%和1.4%琼脂糖中电泳时,其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似. 指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液.载样缓冲液的作用有①增加样 品密度,使其比重增加,以确保DNA均匀沉入加样孔内.②在电泳中形成肉眼可见的指 示带,可预测核酸电泳的速度和位置.③使样品呈色,使加样操作更方便.染色剂 核酸电泳后,需经染色后才能显现出带型,最常用的是溴化乙锭染色法,其 次是银染色. 溴化乙锭(ethidium bromide,EB)是一种荧光染料,EB分子可嵌入核酸双链的碱基对 之间,在紫外线激发下,发出红色荧光.根据情况可在凝胶电泳液中加入终浓度为 0.5ug/ml的EB,有时亦可在电泳后,将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10~15min.琼脂 糖凝胶EB染色,肉眼可见核酸电泳带,其DNA量一般5ng,当溴化乙锭太多,凝胶染 色过深,核酸电泳带看不清时,可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察. 银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物,然后用还原剂如甲醛 使Ag+还原成银颗粒,可把核酸电泳带染色黑褐色.主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色. 也用于琼脂糖凝胶染色.其灵敏度比EB高200倍.但银染色后,DNA不宜回收.来源:生命经纬
一. 金属离子指示剂的作用原理 金属离子指示剂大多是一些能于金石离子形成配合物的显色剂: In + M = MIn A色 B色 (A色与B色不同)化学计量点时: MIn + EDTA == M-EDTA + In K’MY K’MY B 色 A色例:以EDTA滴定 Mg2+,用铬黑T(EBT)作指示剂时: 滴定开始前 Mg2+ + EBT == [color=#DC143C]Mg-EBT (红)[/color] 滴定过程中 Mg2+ + EDTA == Mg-EDTA 计量点时 EDTA +[color=#DC143C] Mg-EBT [/color]== Mg-EDTA + [color=#00008B]EBT[/color] 红 兰 根据酸效应曲线,滴定Mg2+适宜的pH 值为10(9.6~10),但指示剂也有自身适宜的 pH 范围: -H+ -H+ [color=#DC143C] H2In- [/color] == [color=#00008B]HIn2- [/color] == In3- 红 兰 橙 pH 12 此指示剂适宜的pH范围应为 pH 8~11,在此 pH 范围内,金属离子的游离态与配位态的颜色有明显的区别,也恰好与滴定 Mg2+ 的酸度 pH =10 符合。
生物指示剂是一类特殊的活微生物制品,可用于确认灭菌设备的性能,灭菌程序的验证,生产过程灭菌效果的监控等。定义:对特定灭菌处理有确定的抗力,并装在内层包装中可供使用的染菌载体。医学教育|网整理用于确认灭菌设备的性能,灭菌程序的验证,生产过程灭菌效果的监控等。分类:1、按结构分可分为片状生物指示剂和自含式生物指示剂;2、按监测灭菌工艺可分为环氧乙烷灭菌生物指示剂,湿热灭菌生物指示剂,辐照灭菌生物指示剂,干热灭菌生物指示剂,过氧化氢灭菌生物指示剂等;3、按培养时间可分为通用型生物指示剂和快速型生物指示剂。重量质量特性:1、芽孢含量;2、D值。