核酸酶来源于米曲霉

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  • 全能核酸酶SuperNucleaseFAQ详解：解开核酸酶的神秘面纱

    [font=宋体][font=宋体]全能核酸酶（[/font][font=Calibri]SuperNuclease[/font][font=宋体]）是一种来自于粘质沙雷氏菌（[/font][font=Calibri]Serratia marcescens[/font][font=宋体]），经基因工程改造的核酸内切酶。可降解双链、单链、线状、环状的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]，完全将核酸降解成[/font][font=Calibri]3~5[/font][font=宋体]个碱基长度的[/font][font=Calibri]5'-[/font][font=宋体]单磷酸寡核苷酸。义翘神州不仅可以提供研究级核酸酶，依托于[/font][font=Calibri]ISO 13485[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]体系，还可提供高效、高质量、应用广的[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级别全能核酸酶。同时我们提供核酸酶残留检测试剂盒，在解决生物制品核酸污染的同时，有效降低酶本身的残留风险。下面通过问答形式向大家详解全能核酸酶：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处理粘附细胞？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 用[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗涤后，向[/font][font=Calibri]100μL RIPA[/font][font=宋体]裂解物（或其他哺乳动物细胞裂解物）中加入[/font][font=Calibri]1-5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，在室温下孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解物，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处理悬浮细胞？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 离心收集悬浮细胞后，将[/font][font=Calibri]100μL RIPA[/font][font=宋体]裂解物（或其他哺乳动物细胞裂解物）加入含有[/font][font=Calibri]1-5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶的离心管中，在室温下孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解物，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何处组织样本呢？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 研磨[/font][font=Calibri]30[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]100mg[/font][font=宋体]动植物组织后，加入[/font][font=Calibri]100[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]200μL[/font][font=宋体]裂解液和[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，室温孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解液并离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 大肠杆菌或其他细菌呢？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 离心收集细菌后，裂解液或研磨破碎后，每[/font][font=Calibri]100μL[/font][font=宋体]加入[/font][font=Calibri]1~5μL[/font][font=宋体]全能核酸酶，室温孵育[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]，收集裂解液，离心上清液进行下游实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何稀释[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 正常推荐稀释比（终浓度）为[/font][font=Calibri]1:1000[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]1:20000[/font][font=宋体]，其中时间、温度和稀释比是影响反应的积极因素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 是否用[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]稀释[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 是[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 你能减少剂量吗[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 如果你想减少剂量，可以适当提高反应温度或延长反应时间[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 反应辅因子[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 必须向反应溶液中加入[/font][font=Calibri]2-5mM Mg2+[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 反应缓冲液[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 常用的生物缓冲液，如[/font][font=Calibri]TBS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]MOPS[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]pH6-8[/font][font=宋体]）等[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 稀释后每次使用多少？如何测试梯度？一开始多少钱？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 根据不同的实验要求，添加量可以在[/font][font=Calibri]1/100[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]1/10000[/font][font=宋体]之间。真核细胞所需的量高于原核细胞，因为真核细胞的核酸含量高，并且可以按照[/font][font=Calibri]1/1000[/font][font=宋体]的比例添加真核细胞初始添加量，可以按照[/font][font=Calibri]1/10000[/font][font=宋体]的比例添加原核细胞。由于全能核酸酶活性在室温下较高，因此在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃下消化的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]添加比例高于室温下。普通的[/font][font=Calibri]CoIP[/font][font=宋体]实验、蛋白质表达实验可以适当地略微增加，并且可以按照[/font][font=Calibri]1/100[/font][font=宋体]的比例添加对[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]残基要求高的实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 如何灭活全能核酸酶？如何移除？[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： [/font][font=Calibri]EDTA[/font][font=宋体]螯合金属离子的使用可以可逆地抑制全能核酸酶的活性，极端条件下可以引起不可逆的失活，如[/font][font=Calibri]100mM NaOH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]70[/font][font=宋体]℃处理[/font][font=Calibri]30min[/font][font=宋体]。可以通过阴离子交换柱或[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]法从目标产物中分离全能核酸酶。由于这种核酸内切酶的高稳定性，建议不要在最终产物需要排除核酸酶的应用中使用全能核酸内切酶。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 储存条件[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： 储存温度为[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]℃。储存缓冲液：[/font][font=Calibri]20mM Tris-HCl pH 8.0[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]50mM NaCl[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]2mM MgCl2[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]50%[/font][font=宋体]甘油。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Q[/font][font=宋体]： 全能核酸酶应用[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]A[/font][font=宋体]： [/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、蛋白质提取过程中核酸污染的去除：当重组蛋白质纯化或哺乳动物细胞裂解物下游需要低粘度时，全能核酸酶可用于降低样品粘度，以便于操作；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、有效减少储存的外周血单个细胞（[/font][font=Calibri]PBMC[/font][font=宋体]）的聚集；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、有利于不溶性蛋白在复性前的高质量包合体系制备；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、有效去除带负电荷核酸对双向[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]蛋白样品的影响；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、在宽范围的条件下（[/font][font=Calibri]6M[/font][font=宋体]尿素、[/font][font=Calibri]0.1M[/font][font=宋体]盐酸胍、[/font][font=Calibri]0.4%Triton X100[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]0.1%SDS[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1mM EDTA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]1mM PMSF[/font][font=宋体]），降解所有形式的（双链、单链、线性、环状）[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、根据美国食品药品监督管理局的核酸污染去除程序，去除蛋白质产品中的污染；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体]、本品可与多种细胞细菌裂解液配合使用，去除粗提液中的核酸，降低溶液粘度，提高蛋白质产量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供不同级别全能核酸酶，[/font][font=Calibri]GMP[/font][font=宋体]级条件下生产的[url=https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit][b]全能核酸酶[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit][b]SuperNuclease[/b][/url][/font][font=宋体]，无动物源性，可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]及[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]。超高活性，应用场景广泛且使用量低不易残留，质量、性能、供货能力可靠，并已完成在[/font][font=Calibri]FDA[/font][font=宋体]的药物主文件申报备案（[/font][font=Calibri]DMF Number#:35978[/font][font=宋体]），满足药物申报的规范。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/category/supernuclease-kit[/font][/font][font=Calibri] [/font]

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  • Nature | 基因编辑工具箱或再添神器——TnpB核酸内切酶
    转座在生物体基因重塑过程中具有关键性的作用。IS200/IS605 和 IS607 家族的插入序列（insertion sequences, ISs）是最简单的可移动遗传元素之一，仅包含其转座和调节所需的基因。2021年9月9日，张锋团队在Science杂志上发表了一篇题为 The widespread IS200/605 transposon family encodes diverse programmable RNA-guided endonucleases 的文章（详见BioArt报道：Science | 张锋团队再发文：源于IS200/605转座子家族的多种核酸酶或可成为基因编辑新工具）【1】，重建了CRISPR-Cas9系统的进化起源，发现了3种高度丰富但功能未知的转座子编码的可编程RNA引导核酸酶：IscB、IsrB和TnpB，并对IscB的蛋白功能进行了详细探究。该研究还发现TnpB可能是CRISPR-Cas9/Cas12核酸酶的祖先，推测TnpB也具备RNA引导的核酸酶活性。近日，来自立陶宛维尔纽斯大学的Virginijus Siksnys团队（CRISPR开创者之一，通过研究CRISPR-Cas9 生化性质，得出了Cas9酶可以定点切割DNA的结论，特别致敬CRISPR幕后的英雄们——最全的一份CRISPR英雄谱）在Nature杂志上在线发表了题为Transposon-associated TnpB is a programmable RNA-guided DNA endonuclease的研究论文。研究人员通过一系列生化实验证实CRISPR-cas核酸酶的祖先TnpB是可重编程的 RNA 引导的功能性核酸酶。TnpB通过reRNA（right element RNA，长非编码RNA，来源于ISDra2转座子中的RE元件）引导去切割靠近TTGAT转座相关模块（Transposon associated motif, TAM）5’端的DNA，并可以切割人类基因组DNA。如图1所示，IS200/IS605家族的Deinococcus radiodurans ISDra2中包含tnpA和tnpB基因，以及位于两侧的LE（Left element）和RE（Right element）。在纯化TnpB的过程中，作者发现有许多RNA也被一同纯化。对TnpB结合的RNA进行small RNA测序（sRNA-seq）分析，发现它们大多是长度约为150nt的长非编码RNA，来源于ISDra2中的RE序列，作者将这些RNA称为reRNAs（right element RNA）。reRNA 3’端的16nt来源于IS200/IS605转座子的侧翼DNA序列，其余序列与TnpB基因的3’端和RE序列匹配，说明TnpB可以与转座子3’端来源的reRNA形成RNP复合物。图1. D. radiodurans ISDra2位点PAM（protospacer adjacent motif）序列是Cas9或Cas12核酸酶启动DNA切割所必须的，那么TnpB发挥作用可能也需要类似的序列。通过PAM鉴定实验【2】，作者观察到在目标基因5’端上游富集了大量的TTGAT序列，并称之为Transposon Associated Motif (TAM)。体外DNA切割实验证实TnpB具备RNA引导的靶向dsDNA的核酸酶活性。进一步分析发现，将TnpB序列中的RuvC-like活性位点突变后，TnpB失去了切割能力，说明RuvC模块与TnpB的活性相关。研究人员发现实现TnpB的DNA切割功能需要同时满足两个条件：（1）TAM序列；（2）与靶基因匹配的位于reRNA 3’端的序列。随后，作者对切割产物进行了测序分析，结果显示，TnpB采取的是一种交错切割模式，在NTS（non-target strand）的多个位置和 TS (target strand) 的单个位置进行切割，最终产生5’-悬挂端（overhangs）（图2）。图2. TnpB-reRNA复合物切割双链DNA的实验设计及流程最后，作者探究了TnpB在细胞内切割目标dsDNA的能力。首先，在E.coli中进行的质粒干扰实验表明TnpB可以在原核生物体内切割dsDNA。紧接着，作者想知道TnpB是否可以应用于切割人类基因组。将编码TnpB和reRNA的工具质粒转染至HEK293T细胞中，72小时后，提取基因组DNA（gDNA）测序分析目标切割位点中的序列插入和删除（insertions and deletions，indels）情况（图3）。实验结果显示，TnpB在两个测试靶点（AGBL1-2和EMX1-1）中引入突变的频率为10%-20%，这与之前报道过的CRISPR-Cas9和Cas12的效率类似【3-7】。进一步分析发现，切割位点引入的删除突变占主导地位，与Cas12切割谱中观察到的现象类似【5,7】。这些结果说明RNA引导的TnpB核酸酶可以切割真核生物的基因组DNA。图3. 利用TnpB编辑人类基因组综上所述，该研究从ISDra2系统中鉴定了一个新的具有dsDNA切割功能的核酸酶TnpB，其在原核和真核细胞中均能有效切割dsDNA，具有编辑人类基因组的巨大潜力。在进化树上，虽然TnpB与微型 Cas12f核酸酶的关系最为紧密，但作者认为两者之间依旧存在重大区别：（1）TnpB与Cas12f使用的guide RNA不同；（2）TnpB是单体，仅需要一个reRNA；而Cas12f 核酸酶是二聚体，需要结合一个拷贝的crRNA-tracrRNA duplex；（3）TnpB需要TAM序列，Cas12f需要PAM序列，两种序列截然不同。原文链接:https://doi.org/10.1038/s41586-021-04058-1
    时间： 2021-11-01
    作者： dahua1981
  • 镉大米再现！镉，你到底来源于哪？
    云南销毁15万斤大米，镉大米再次引起大众关注！大米是中国大部分地区人民的主要食品，镉是一种环境污染物，通过ICPMS可快速的检测食品、环境等样品中的镉含量，借助高灵敏度的仪器希望通过溯源可以找到污染的源头，确保大米的质量安全。 近日，云南发现米线重金属超标，溯源发现镉大米并销毁15万斤。 大米含有稻米中近64%的营养物质和90%以上的人体所需的营养元素， 镉并不是人体必需元素，而且是一种环境污染物。 急性镉中毒症状主要表现为恶心、流涎、呕吐、腹痛、腹泻，继而引起中枢神经中毒症状，严重者可因虚脱而死亡 。 长期摄入含镉食品，镉可在生物体内富集，其生物半衰期为10~30年，且生物富集作用显著，即使停止接触，大部分以往蓄积的镉仍会继续停留在人体内，从而引起慢性中毒，使肾脏发生慢性中毒及软骨病。世界卫生组织将镉列为重点研究的食品污染物；国际癌症研究机构(IARC)将镉归类为人类致癌物，会对人类造成严重的健康损害；美国毒物和疾病登记署(ATSDR)将镉列为第7位危害人体健康的物质；我国也是将镉列为重点监控指标之一。 根据《GB 2762-2017 食品安全国家标准 食品中污染物限量》，谷物及其制品镉限量如下：根据《GB 5009.15-2014食品中镉的测定》及《GB 5009.268-2016食品中多元素的测定》，镉的测定可以采用原子吸收石墨炉法和电感耦合等离子体质谱法。 不管是大米检测还是其可能的来源土壤、大气等，岛津均可提供完备的解决方案。岛津ICPMS-2030系列 ICPMS-2030测定大米中多元素的含量 样品前处理方法称取0.4g（精确至0.0001g）试样于聚四氟乙烯微波消解罐中，加入4 mL HNO3，盖上消解罐盖，放入微波消解仪消解。消解结束后冷却至室温，打开密闭消解罐，将消解液转移至 50 mL容量瓶中，用超纯水定容至刻线，摇匀，待测。 仪器测定条件实验结果ICPMS-2030测定土壤中多种金属元素的含量 样品前处理方法称取0.1g（精确至0.0001g）试样于聚四氟乙烯微波消解罐中，加入6 mL王水，盖上消解罐盖，放入微波消解仪中按照下表程序消解。消解结束后冷却至室温，打开密闭消解罐，用慢速定量滤纸将提取液过滤至50 mL容量瓶中，待提取液滤尽后，用0.5 mol/L的硝酸清洗消解罐内壁至少3次，清洗液一并过滤至容量瓶中，用超纯水定容至刻线，摇匀，待测。实验结果
    时间： 2020-04-29
    作者： 岛津
  • 蒙牛称牛奶致癌物超标问题饲料来源已查明
    究竟是什么原因导致的蒙牛牛奶中含强致癌物质黄曲霉毒素M1?对此，蒙牛方面昨日(12月27日)表示，问题原因已查明，是因为牛吃了霉变的饲料所致。对于这批问题饲料的来源也已经查明，但结果有待公布。 　　蒙牛内部已查出结果 　　12月24日，国家质量监督检验检疫总局公布了近期对全国液体乳产品进行抽检结果公告，蒙牛乳业(眉山)有限公司生产的一批次产品被检出黄曲霉毒素M1超标140%。 　　在黄曲霉毒素M1超标事件曝光之后的第三天，蒙牛乳业前日回应表示，事件原因已经查明，是奶牛食用霉变饲料引发的。但当时称对于这批饲料及奶源来源于哪里，暂时无法追查。 　　昨日，蒙牛集团发言人卢建军在接受本报记者采访时表示，这个问题已经查明，但结果有待公布。“从专家的判断以及蒙牛内部的判断，问题肯定是出在饲料的霉变这个问题上，这点已经毋庸置疑。”卢建军昨日表示，“目前内部对此已经有一个查出的结果了，但是目前这个信息还没有到我手上。” 　　“这是个别问题” 　　卢建军强调，这是个别问题，饲料的霉变是因为饲料的储存不当造成的，并不是普遍现象。 　　蒙牛眉山的奶源构成是怎样的?卢建军并未向记者介绍。他只是表示，蒙牛整个奶源供给的构成是80%来自牧场，20%来自农户奶站。 　　公开资料显示，眉山基地是蒙牛的第24个基地，也是蒙牛在西南地区的首个生产基地，设计日处理鲜奶800吨。2009年，现代牧业洪雅牧场与眉山基地同日竣工，为后者提供奶源。 　　质监部门已立案调查 　　另据成都商报报道，眉山市质监局副局长袁勤前日称，已对蒙牛乳业眉山分公司下发整改通知。此事经初查，蒙牛纯牛奶一批次产品被检出黄曲霉毒素M1超标不存在人为添加，只是一个偶发事件。目前，质监部门已立案调查，查实后将按规定给予高额处罚。
    时间： 2011-12-28
    作者： sunny
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  • CHOZN® 锌指核酸酶修饰GS-/-CHO细胞株 400-622-8982
    CHOZN GS-/-是采用Sigma独有的CompoZr锌指核酸酶（ZFN）技术建立的细胞株。ZFNs是一类工程DNA结合蛋白，它通过结合用户指定的位点并造成双链断裂（DSB），从而实现靶向基因的编辑。其后，细胞可采用内源性DNA修复过程，非同源性末端接合（NHEJ），或同源介导的双链修复来修复目标双链断裂处。这些修复过程可以被引导以产生精确的靶向基因编辑，从而形成特定基因缺陷（敲除），整合或修饰的生物体或细胞株。谷氨酰胺合成酶（GS）是生物制药行业中最常用的筛选标签之一。通过将重组蛋白的编码基因的表达与外源GS基因的表达偶联，生产重组蛋白的细胞株可以被筛选出来。在GS缺陷宿主细胞之中，只有那些成功转染外源GS基因的细胞在缺乏谷氨酰胺条件下培养才能存活。在具有内源性GS基因的宿主细胞中，可以使用MSX（甲硫氨酸砜亚胺）来抑制内源GS活性，使得这些细胞系可以使用GS筛选。然而在生物制药行业中，无MSX工艺更具优势。为了实现无MSX GS筛选，我们需要一种GS敲除的宿主细胞株。利用ZFN技术，SAFC设计了一种新的CHO K1 GS-/-细胞株。这种CHOZN GS-/-细胞株适合在化学成分限定EX-CELL CD CHO Fusion培养基中悬浮培养，并保持了野生型CHO K1的稳健特性。特点与优点：- 首个商业化的GS-/-CHO细胞株- CHOZN GS-/-是使用ZFN技术靶向突变开发的细胞株- 适合在化学限定，无动物源成分的培养基中悬浮培养的细胞系- 细胞源自于ECACC CHO K1- cGMP标准生产，完善的病毒检测，完整的可追溯资料- 全面的实验方案，为您详细说明筛选策略- 技术专家随时为您排除问题了解更多，可参见本页面核心参数 – 样本下载中的资料手册。
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    厂商： 默克工艺解决方案
    品牌： 默克/Merck
    型号： CHO细胞平台 - 细胞株
    价格： 面议
  • 人脱氧核糖核酸酶Ⅰ（DNase-Ⅰ）ELISA试剂盒 400-860-5168转3826
    人脱氧核糖核酸酶Ⅰ（DNase-Ⅰ）ELISA试剂盒用于体外定量检测血清，血浆，细胞培养上清液，组织匀浆,心房水样本等中的人脱氧核糖核酸酶Ⅰ
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    厂商： 量准（上海）医疗科技有限公司
    品牌： 量准/ELement
    型号： E11001-96T
    价格： 1800元
  • ELISA 黄曲霉毒素B1试剂盒（婴幼儿米粉辅食） 400-860-5168转1522
    黄曲霉毒素B1 （Aflatoxins B1）ELISA检测试剂盒 产品名称：黄曲霉毒素B1试剂盒 产品概述：黄曲霉毒素是曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉的二次代谢产物。这些霉菌来源于潮湿的热带地区，大面积种植的粮食作物会被其污染。黄曲霉毒素是自然界最危险的致癌物质。黄曲霉毒素中毒性最强的是黄曲霉毒素B1，其几乎一直和黄曲霉毒素B2、G1 和 G2共存。他们主要存在于玉米、花生、巴西坚果、棉籽和开心果中。美国食品和药品监督管理局（FDA）已对食品和饲料中的黄曲霉毒素最高允许水平作了规定，因此，准确测定黄曲霉毒素含量对于食品和饲料的品质监控具有重要意义。 适用范围黄曲霉B1试剂盒可定性、定量检测玉米、大米、麦类、豆类、花生、饲料、食用油等样本中的黄曲霉毒素B1。检测限：0.1ppb 试验原理采用竞争ELISA，在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1抗原，加入样本（或黄曲霉毒素B1标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素B1与预包被在板孔上的黄曲霉毒素B1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素B1抗体。与样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素B1结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素B1抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素B1的含量。 试剂配制1、样品稀释液：用去离子水将浓缩样品稀释液按1:9体积比进行稀释（1份浓缩样品稀释液+9份去离子水）。2、洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤液按1:9体积比进行稀释。3、50％甲醇/水：取无水甲醇，用去离子水以1：1倍稀释（1份无水甲醇＋1份水） 操作步骤1. 将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。2. 取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷冻。3. 洗涤工作液在使用前也需回温。4. 将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。5. 加标准品/样本50ml到对应的微孔中，加入酶标物50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应15min。6. 小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干。7. 加入显色液100ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15min。8. 加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处测定每孔OD值。 注意事项1. 室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。2. 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。3. 每加一种试剂前需将其摇匀。4. 反应终止液为2M盐酸，避免接触皮肤。5. 不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。6. 储存条件：保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。7. 试剂变质的迹象：发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm0.5）时，表示试剂可能变质。8. 在加入底物液A液和底物液B液后，一般显色时间为20～30min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到35min（或更长），但不得超过40min。反之，则减短反应时间。9. 该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。 试剂盒组成1. 96孔酶标板 … … … … … … … … … … … … … … … 1块 2. 标准液（1ml/瓶） … … … … … … … … … … … … 6瓶 0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb, 8.1ppb3. 酶标物 1瓶 … … … … … … … … … … … … … … … 6ml4. 底物液1瓶 … … … … … … … … … … … … … … 12ml5. 终止液1瓶 … … … … … … … … … … … … … … … 6ml6. 浓缩洗涤液 （10×）… … … … … … … … … … … … 40ml7. 样品稀释液（10×） … … … … … … … … … … … … … 20ml8. 操作说明书一份 注意：标准品含有低浓度黄曲霉毒素、终止液含2M HCl，需小心取用。勿在有效期外使用本试剂盒。 贮藏条件及保存期 贮藏条件：保存试剂盒于2～8℃。保存期：黄曲霉B1试剂盒有效期为12个月。 如果您有技术上的问题也可以打电话咨询我们，我们有自己独立的先进的实验室，届时将竭诚为您服务。
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