长期稳定性

ICP-MS 是目前测定海水中痕量元素常用方法之一。但是由于海水基体复杂，氯化钠等盐分含量非常高，TDS 含量接近 3%。因此传统的 ICP-MS 测试过程中经常会遇到采样锥积盐严重，内标回收率大幅下降，质谱干扰严重等问题。使得用户无法 ICP-MS 长期准确地进行测试。超稳健进样系统（Ultral Robust Kit URK）包括小内径蠕动泵管、Mira Mist 雾化器、UHMI 雾室及氩气加湿器，与镀镍采样锥一同使用可进一步提升 ICP-MS 耐高基质性能。该组件包可用于安捷伦 7850/7900/8900 系列 ICP-MS。等离子体是高基质样品于 ICP-MS 长期稳定运行的重要载体，处于核心位置。传统 ICP-MS 直接分析样品中总溶解固体（TDS）含量最高可达 2000 ppm (0.2%)。若高于该限值，等离子体就无法完全分解基质，未解离的基质便会沉积在接口锥和离子透镜上。这些沉积物会导致信号漂移并使维护更加频繁。不完全的基质分解也会增加质谱干扰。众所周知，更高的射频功率、更长的采样深度和更少的样品引入量，是维系等离子体强健性的三个关键参数。样品引入量与 ICP-MS 进样部件密切相关，选择适合的雾化器类型、在线内标和气体稀释等手段应对高基质样品分析往往能取得事半功倍的效果。选择合适的超稳健进样系统轻松应对高盐样品分析在线内标稀释建议样品引入通道与内标引入通道使用相同尺寸内径蠕动泵管（ID 0.76mm），可实现在线1:1溶液稀释，直接降低高基质样品引入量。Mira Mist 雾化器雾化器作为 ICP-MS 最先接触样品的部件，其耐高基质的能力强弱直接影响到后续样品长期稳定测试的可行性。TDS 含量较高的样品在载气流中高速运行的溶解态固体，在通过雾化器的喷嘴时可能会发生脱溶剂。随着时间的推移，不同类型的样品中的微粒会发生不同程度的堆积，阻碍气体流动，导致雾化效率不稳定，并最终堵塞雾化器。为此 URK 专门选择了 Mira Mist 雾化器，其优势在于其采用独立双通道（样品和气体）设计，极大提升耐堵塞能力。UHMI 雾室氧化物产率是评价等离子体强健与否的关键指标。氧化物产率越低意味着等离子体温度越高，解离样品的能力越强。ICP-MS 的强健性由 CeO+/Ce+ 表征。这一比值显示了等离子体有效分解强结合 Ce-O 分子的能力。UHMI 通过添加精确控制与经过校准的氩气流对气溶胶流进行稀释。雾化气与稀释气的比例可自动调节，以确定气溶胶稀释的程度，对于超高基质可高达百倍稀释。该稀释气可有效降低气溶胶的密度并打碎液滴，从而获得更高的等离子体温度、更出色的基质分解、更低的氧化物和其他干扰，以及更低的维护频率。氩气加湿器氩气加湿器通过加湿雾化气以减少雾化器和喷嘴中的沉积物，进一步提高基质样品的信号稳定性。镀镍采样锥镀镍设计比传统的采样锥更好地耐受高盐基质，如高氯基体，以最大限度地延长锥寿命，减少清洗频率，提高生产力。仪器参数和实验结果仪器参数：表 1. 优化后的仪器参数测试结果：在表 1. 的参数下，对实际海水样品连续测试 5.8h。以 Ge，Rh，In 为内标。从图 1 可以看到，在高灵敏度模式下等离子体成橘红色，即使只测试 1h 采样锥的锥孔积盐就非常严重了。而在表 1. 参数下，等离子体只有中心样品通道呈少许橘红色，连续测试 5.8h，采样锥锥孔积盐并不严重。表明表 1. 的参数能有效降低样品基体效应。从图 2. 可以看到，采用高盐进样系统分析 TDS3% 海水，5.8 小时后内标回收率仍旧在 80% 以上。图 1. 等离子体和锥孔积盐情况a. 高灵敏度模式下的等离子体 b. 高灵敏度模式下测试 1h 后的采样锥锥孔c. 表一参数下的等离子体，d. 表1 参数下，测试 5.8h 后的采样锥锥孔图 2. 海水 5.8 小时内标稳定性ICP-MS 超稳健进样系统产品信息

话题介绍如何预测稳定性实验？对于ADC研发人员来讲，通过进行一系列蛋白质评估将有助于降低早期开发过程中最终产物不稳定的风险，特别是在优化偶联过程中，这些评估策略显得尤为重要。在本期文章中，我们来重点讲讲如何进行预测稳定性实验。借助PR Panta蛋白稳定性分析仪来推断低浓度样本在提高剂量, 并在更高浓度下用于临床给药后的表现。因为，这对于降低筛选过程的风险和确保筛选过程中获得最稳定的候选分子至关重要。一起看看PR Panta提供的真实数据示例，它们比较了裸抗--Trastuzumab（或称Herceptin），与ADC药物分子Kadcyla，和另一种来源于同类裸抗的ADC药物分子 RC48之间的多个维度预测信息。实验热稳定性实验背景 首先，很重要的第一步，我们要先了解标准的热稳定性实验。在PR Panta上进行这些实验很简单，使用相同的样本收集信息，根据候选分子的热稳定性（如Tm和Ton）以及通过PDI、Tsize和Tagg 的胶体稳定性参数对其进行排名。简单地说，首先比较每种的热变性曲线。Herceptin，裸抗，具有最高的热稳定性，与ADC药物分子Kadcyla相比具有更高的Tm1和更清晰的变性展开转变Kadcyla和RC48都表现出Tm1的峰增宽，表明大多数药物与该展开转变相关的结构域缀合--这是个好现象，因为Tm1对应CH2结构域，而Tm2和Tm3分别是Fab结构域和CH3--尽管它们通常很接近，仅显示单个Tm2RC48是一种由另一个母版裸抗构建的ADC药物，与Kadcyla相比，Tm1略有进一步降低。此外，可以判断它是一种与Herceptin不同的裸抗，因为变性展开的曲线轮廓有很大的变化，包括分别展现出的Tm2和Tm3PR Panta高分辨率的热变性展开数据，对每个ADC或mAb的变性结构展开提供了高度精细的分辨率，使其能够在结构域水平上体现出低至0.2°C的差异。这三种药物都经过了优化，可用于临床，因此稳定性的变化是最佳的，不像在开发过程的早期，需要比较候选药物分子--比如，需要筛选不同的偶联策略。因此，这些数据是了解偶联过程如何影响ADC稳定性的好方法。实验预测数据:3个实验了解ADC当我们已经了解了热变性曲线的数据，接下来是时候看看PR Panta可以解锁的预测参数了。1自缔合自缔合参数kD和第二维里系数B22都是告知生物在高浓度下可能如何表现的参数。其中任何正值都表明药物分子不太可能自我缔合--这是一个理想的结果。自缔合会导致聚集和高粘度，由于许多治疗方法在临床上是以高浓度给药，因此，最好在开发过程的早期就了解ADC是否容易发生自缔合。 自缔合参数kD自缔合参数kD是利用PR Panta的DLS检测模块导出的关于扩散常数的信息，来评估分子与自身相互作用的可能性。正kD表示排斥力（这是好的）；负kD是有吸引力的（要避免）。数据显示：裸抗（mAb）具有高度自排斥性，表现出具有强趋势线的正kD。这意味着它不太可能在高浓度下的发生自缔合。在PR Panta中表征的数据结果与其他已发表的数据结果一致Kadcyla也有正kD，尽管它没有那么强的自我排斥。然而，它仍然被认为是一个“好”的结果，kD为正RC48表现出自缔合的倾向，kD为负第二维里系数B22第二维里系数B22是利用PR Panta的SLS检测模块得出的，是着眼于整体情况下自身相互作用的强度。尽管B22和kD之间存在关系，但它们是相互独立的进行判断，因此并不总是完美地一致。SLS的散射数据在用于低浓度样本下更容易出错。然而，一些研究人员更喜欢B22而不是kD，因为B22的数据被认为是对样本内相互作用的更“全局”的测量。如下图所示， B22的趋势看起来与kD的趋势非常相似。PR Panta数据计算出的Herceptin自缔合数值较好地反映了文献值，所提供的自缔合数值为您的分子，在放大工艺生产之前，提供了更宝贵的预测信息。2动力学稳定性动力学稳定性实验，着眼于表征以不同的升温速率设置热变性展开实验时，候选分子的热稳定性行为。通过测量蛋白质随着热升温速率的变化而展开的速度，可以计算出展开的活化能。只需以不同的速率设置一系列热变性曲线，然后比较熔化展开温度如何随速率变化即可。之后，使用Arrhenius方程，将这些信息用于预测构建的分子在不同储存温度下的半衰期。 这三位候选分子的比较情况：&bull 显示动力学稳定性Herceptin Kadcyla RC48，这与自缔合行为趋势相呼应&bull 与Herceptin相比，Kadcyla的半衰期显著缩短，但仍在两个月左右&bull RC48的半衰期非常低，表明偶联方法极不稳定362°C下的等温稳定性等温稳定性是进行加速稳定性研究的另一种方法。与动力学稳定性实验类似，可以使用高温下较短时间的稳定性来推断-20°C、4°C或RT（室温）下的长期稳定性。我们可以看到候选分子的变化趋势：&bull 根据累积半径（Cumulant radius，即纵坐标），可以明显检测到轻微的去折叠展开的变化&bull 在62°C下800分钟（13小时以上）后，Herceptin没有明显的大小变化&bull 两个ADC有着显著尺寸变化，RC48有着更明显的大小变化，再次表明它是所有候选分子中最不稳定的实验总结以上结果展示了除热变性试验参数外，PR Panta提供的其他多维度参数，对于预测长期稳定性是极有价值的。在早期开发和风险评估期间， PR Panta提供了关于如何选择的最佳候选药物的额外预测信息，可以用于进一步推进药物开发。并且与许多其他下游分析技术相比，PR Panta所需的样本更少，因此，从预测分析进而深入了解偶联过程对ADC的影响，PR Panta将会是研究者优先考量的选择。PR Panta蛋白稳定性分析仪（仪器价格咨询）欢迎联系我们，进一步了解PR Panta如何为您的ADC和其他生物制品提供高分辨率、高质量的数据。

关于征求《保健食品稳定性试验指导原则》意见的函 　　各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局(药品管理局)： 　　为加强保健食品注册管理，进一步规范保健食品稳定性试验，我司组织起草了《保健食品稳定性试验指导原则》(征求意见稿)。现公开征求意见，请于2013年8月19日前将意见和建议反馈我司。 　　联系人：李莉 　　电　话：(010)88330505 　　邮　箱：wangtz@sfda.gov.cn 　　传　真：(010)88374394 　　附件：《保健食品稳定性试验指导原则》(征求意见稿) 　　国家食品药品监督管理总局食品安全监管三司 　　2013年7月29日 　　(公开属性：主动公开) 　　附件： 保健食品稳定性试验指导原则(征求意见稿) 　　稳定性试验研究是保健食品质量控制研究的重要内容之一，也是保健食品注册、监管工作的重要依据之一。保健食品注册申请人应按照法律、法规、规章及国家相关标准等的有关要求，应根据产品具体情况，合理地进行稳定性试验设计和研究。 　　一、基本原则 　　(一)保健食品稳定性试验是指保健食品通过一定程序和方法的试验，考察产品的感官、化学、物理及生物学的变化情况。 　　(二)保健食品稳定性试验目的是通过稳定性试验，考察产品在不同环境条件下(如温度、相对湿度等)的感官、化学、物理及生物学随时间增加其变化程度和规律，从而判断申报产品包装、贮存条件和保质期内的稳定性。 　　(三)根据产品特性不同，稳定性试验可分为加速试验、长期试验和短期试验。 　　1.加速试验：该类产品一般保质期为2年，为了缩短考察时间，可在加速条件下进行稳定性试验，在加速条件下考察产品的感官、化学、物理及生物学方面的变化。 　　2. 长期试验：该类产品一般保质期为1至2年，在常温或说明书规定的条件下考察其稳定性。 　　3.短期试验：该类产品保质期一般在3至6个月内，在常温或说明书规定的贮存条件下考察其稳定性。 　　二、稳定性试验要求 　　(一)产品类别：不同的产品，其剂型、原辅料、成分等不同，对稳定性试验的要求、方法、判定标准也不同。 　　1.一般产品：对贮存条件没有特殊要求的一般产品，可在常温条件下贮存，如固体类产品(片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂等) 液体类产品(口服液、饮料、酒剂等)。 　　2.特殊产品：对贮存条件有特殊要求的产品，如：益生菌类、鲜蜂王浆类等。 　　(二)样品批次、取样和用量：应符合现行法规的要求，满足稳定性试验的要求。 　　(三)样品包装及试验放置条件 　　稳定性试验的产品所用包装材料、规格和封装条件应与产品质量标准、说明书中的包装要求完全一致。 　　1.普通样品 　　加速试验应置于温度37±2℃、相对湿度RH75±5%、避免光线直射的条件下贮存三个月。 　　长期试验、短期试验应在说明书规定的储存条件下贮存，贮存时间根据产品质量标准及说明书声称的保质期而定。 　　2.特殊样品 　　在说明书规定的贮存条件下贮存。 　　(四)试验时间 　　稳定性试验中应设置多个考察时间点，其考察时间点应根据对产品的性质(感官、理化、生物学)了解及其变化的趋势而设定。 　　1.普通产品 　　加速试验一般考察时间为三个月，即对放置0月、1月、2月、3月样品进行考察。0月数据可以用同批次产品卫生学试验结果代替。 　　长期试验一般考察时间应与产品保质期一致，如保质期定为二年的产品，则应对0、3、6、9、12、18、24个月产品进行检验。0月数据可以用同批次产品卫生学试验结果代替。 　　2.特殊产品 　　在说明书规定的贮存条件下进行考察。保质期在三个月之内的，应在贮存0、终月(天)进行检测 保质期大于三个月的，应按每3个月检测一次(包括贮存0、终月)的原则进行考察。 　　(五)考察指标 　　应按照国家有关部门颁布的或者企业提供的检验方法，对申请人送检样品的卫生学及其与产品质量有关的指标在保质期内的变化情况进行的检测。 　　(六)所用方法 　　应按产品质量标准规定的检验方法进行稳定性试验考察指标的检测。 　　三、稳定性试验结果评价 　　保健食品稳定性试验结果评价是对试验结果进行系统分析和判断，稳定性试验检测结果应符合产品质量标准规定。 　　(一)贮存条件的确定 　　应参照稳定性试验研究结果，并结合产品在生产、流通过程中可能遇到的情况，同时参考同类已上市产品的贮存条件，进行综合分析，确定适宜的产品贮存条件。 　　(二)直接接触产品的包装材料、容器等的确定 　　一般应根据产品具体情况，结合稳定性研究结果，确定适宜的包装材料。 　　(三)有效期的确定 　　保健食品有效期应根据产品具体情况和稳定性考察结果综合确定。采用加速试验考察产品质量稳定性的产品，根据加速试验结果，产品保质期一般可定为2年 采用长期试验或短期试验考察产品质量稳定性的产品，总体考察时间应涵盖所预期的保质期，应以与0月数据相比无明显改变的最长时间点为参考，根据试验结果及产品具体情况，综合确定产品保质期 同时进行了加速试验和长期试验的产品，其保质期一般主要参考长期试验结果确定。