血清多肽组表达模式

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  • 【洛科】抽气血清瓶盖组
    【洛科】抽气血清瓶盖组抽气血清瓶盖组 : 产品特色◆ 轻松将血清瓶转接为废液接收之用 抽气血清瓶盖组为一兼容于GL45规格血清瓶之盖体，可将实验室常用之血清瓶转接作为废液接收之用，组装简单且可高温灭菌重复使用，耐温达130℃，但请勿以明火直接烧烤。适合一般实验室废液抽吸使用。◆ PP材质，可直接蒸气灭菌 抽气血清瓶盖组采用PP材质制作，可直接蒸气灭菌 抽气血清瓶盖组 : 订购信息◆ 197000-60　 抽气血清瓶盖组 ◆ 197000-63　 血清瓶盖硅胶垫环 ◆ 199100-68-5　 硅胶管 (Ф4.2xФ8mm ), 5公分 ◆ 197000-60-500　 500ml抽气血清瓶组 此产品资讯页面下载 :
    供应商： 洛科仪器股份有限公司
    品牌： 洛科仪器
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  • 抽气血清瓶盖组
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    供应商： 北京卓信宏业仪器设备有限公司
    品牌： 洛科仪器
    价格： 面议
  • Aurorasil (曙光) 混合模式液相色谱柱
    AurorasilTM混合模式色谱柱随着色谱技术的发展，混合模式色谱 (Mixed-mode Chromatography, MMC) 作为一种新型的液相色谱可以与溶质产生多种形式的相互作用。混合模式色谱是在一根色谱柱上应用多种作用力或多种分离机理共同主导下使溶质和固定相进行保留和分离的色谱方法，并且其功能往往具有互补性或协同性。混合模式色谱相对于常规的单模式色谱的主要优势在于可以在单个色谱柱上实现多种类型的分离，由于多种作用力的存在，混合模式色谱可以显著地提高分离选择性和色谱峰形，达到传统单一色谱模式所不能达到的效果。混合模式色谱的另一个优势是可以通过改变流动相中缓冲液的pH、盐浓度或有机溶剂浓度便可灵活地调节分析物的保留和选择性，实现更快、更好的分离。同时混合模式色谱一般不需要使用离子对试剂，同目前广泛使用的电喷雾质谱 (ESI-MS) 具有很好的兼容性。与传统的反相、亲水作用和离子交换色谱柱的单一保留模式相比，迪马科技的AurorasilTM系列混合模式色谱柱具有独特的表面化学结构，能够在单一键合相上提供多重保留机理，最大限度地优化选择性。通过调节缓冲盐浓度、pH值及有机相比例，可在AurorasilTM系列混合模式色谱柱上同时实现强极性、中等级性和弱极性化合物的保留，也可以同时分离极性、非极性、酸性、碱性和中性化合物。AurorasilTM系列混合模式色谱柱的特点在单一色谱柱上可保留多种类型样品多重保留机理极大地改善分离选择性和色谱峰形优异的性能：选择性、分离度和保留可同时实现快速、高分离度的分离分析优异的批次重现性和稳定性适合于药物分子、活性药物成分(API)、位置和几何异构体、代谢产物、强亲水性和极性化合物、天然产物、酸性和碱性化合物、氨基酸、多肽、蛋白质、蛋白质组学和代谢组学等复杂组分混合物的分离分析AurorasilTM系列色谱柱以高纯硅胶为基质，采用迪马科技自主设计研发的多功能配体硅烷、独特的固定相交联和多重键合技术以及先进的封端技术，在保留固定相疏水性的基础上，利用新型多功能配体硅烷为固定相与分析物间提供多种形式的相互作用，使该系列色谱柱具有多重保留机理，从而使固定相在极宽的洗脱范围内具有独特的选择性，对极性化合物、酸性和碱性化合物、异构体等多种复杂体系具有良好的分离效果，使方法开发更加简单易行。AurorasilTM系列色谱柱目前提供MMP-G, MMP-H, MMP-L, MMP-M, MMP-Q, MMP-Y, MMP-Z多种固定相，最大限度地满足各种分离要求，是分析方法开发和复杂样品分离的最佳选择。同时分析不同类型化合物 – 极性、非极性、酸、碱和中性化合物面对分析样品越来越复杂，传统单一分离机理的色谱柱已经难以满足复杂样品的分离分析要求。混合模式色谱柱因其两种或多种分离机理的混合使用，可以很好地提高分离选择性和色谱峰形，达到传统单一色谱分离模式所不能达到的效果。当遇到多组分混合样品（特别是包含酸、碱、极性和非极性组分的复杂样品）时，要想在一根色谱柱上同时分析多种类物质的混合物，通常需要使用复杂的流动相条件和较长的分析时间，但也很难得到理想的色谱峰形和分离度。AurorasilTM系列混合模式色谱柱具有独特的表面化学结构，能够在单一固定相上提供多重保留机理，最大限度地优化选择性，从而可以使用简单的色谱分离条件，对多种类型化合物进行同时分析。下图是使用AurorasilTM柱和其他品牌色谱柱对16种不同类型化合物的分离对比，结果表明，AurorasilTM色谱柱相比于其他品牌色谱柱具有优异的选择性和分离能力，并且具有流动相简单，分离度好，峰形完美，检测效率高等优点。
    供应商： 迪马科技
    品牌： 迪马科技
    价格： 面议
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血清多肽组表达模式相关的仪器

  • 固相合成多肽微阵列工作站 血清病毒的抗体应用 400-860-5168转1372
    固相合成多肽微阵列工作站 血清病毒的抗体应用复杂的实验，简单的仪器无法满足？定制高通量液体处理工作站，按照您的实验需求配套定制！ Aurora多肽微阵列点样仪简介 **生物微阵列喷印技术，为基因组、蛋白质组、药物筛选、靶标确认、表位定位、疫苗开发等基础科学研究领域提供革新性的研究技术。**基于自身液体处理平台，VERSA110多肽微阵列点样仪，可实现自动化纳升级到微升级的液体接触时印迹。可以高重复性地在玻片、膜、微孔板平台和其他适合基质表面建造微阵列。**为蛋白质组学、基因组学提供快速、高通量且相容性高的研究方法。欧罗拉生物科技有限公司始于1990年，是生命科学、环境科学、药物研发/安全和化学分析研究等实验室自动化方案设计与研发的全球性领 导者。我们提供的技术与服务可以在提高质量、准确度和精确度的同时提高样品处理量。产品包括：自动化液体处理工作站、原子吸收光谱仪、原子荧光光谱仪、离子通道筛选技术-离子通道阅读器和微波消解系统，它们可以在水质检测、学术研究、农业检测、分子检测、环境检测、食品安全、法医法证、公共卫生、畜牧兽医、药物开发等应用领域中提供高销量的样品处理。我们的总部设在加拿大，2007年，Aurora Biomed开设了其亚洲销售和服务中心，以促进向快速增长的亚洲市场的扩张。为了进一步扩大Aurora的市场范围，我们在全球80多个国家建立了积极的经销商网络，为客户提供销售和服务支持。自2003年起，Aurora是每年精密医疗和离子通道年会的主办方。会议旨在将业界和领 先的学术研究人员聚集在一起，分享知识、交流想法，并建立富有成效的合作伙伴关系。该会议每年在加拿大和中国之间轮流召开，吸引世界各地的顶 尖科学家就药物研发和个性化医学展开发人深省的讨论。它使Aurora和社会能够掌握尖 端技术和创新研究的脉搏。欧罗拉生物科技有限公司是生命科学、环境科学、药物研发/安全和化学分析研究等实验室自动化方案设计与研发的全球性厂家。我们提供的技术与服务可以在提高质量、准确度和精确度的同时提高样品处理量，我们致力于提高人类生活质量及环境的可持续性。欧罗拉致力于为各种研究领域的科学家提供自动化液体处理系统，包括：医药、生物技术、农业、食品科学和法医。VERSA系列作为液体处理系统，可以提高处理效率和数据质量，降低重复烦琐工作带来的不稳定性和减少试剂成本。 Aurora多肽微阵列点样仪应用领域 多肽微阵列应用领域：**癌症早期诊断**蛋白相互作用研究**蛋白修饰研究**疫苗与药物开发Aurora微阵列点样仪应用方向：**微定量喷点**基因芯片**细胞培养**研发或生产应用**基因表达，DNA筛查**多肽合成**细胞点样，药物筛选 Aurora多肽微阵列点样仪特点 可实现自动化纳升级到微升级的液体接触式印迹。高的密度高地在玻璃、纤维素膜、滤纸、微孔板以及其他特殊处理的载体矩阵上，建立多肽、核酸肽、基因等微阵列，为蛋白组学、基因组学提供快速、高通量且相容性高的研究方法接触式点印，在各种合适的基质上制备各种样品的微阵列，点与点少于1mm，定位校正，可在每个点点上多个样品点样针高效清洗，内外都彻底冲洗，管路可耐受各种有机溶剂软件功能强大，方便易学，支持点印序列导入导出，自动生成阵列排布高效过滤安全封闭外罩，具备消毒照明功能，确保步骤外部环境污染微阵列工作站特色功能：**高通量，可同时制备多张玻片、尼龙膜等**专门配置清洗站、干燥站、高效过滤安全罩等**定制化功能，例如容易结晶可定制保湿功能，细胞培养可定制温度控制功能和二氧化碳浓度控制功能，细胞形态分析下游实验可定制细胞成型功能等， Aurora多肽微阵列点样仪产品规格 盘面容量4个盘面，液体处理模块单通道，双注射泵。4通道+试剂喷加器吸液范围自40nL-100μL可调。CV值，1μL≤5%开放性基片不受限制，可在玻片、尼龙膜、试剂、硅片、不锈钢板上点样（点样矩阵通过软件自行设计）。移盘系统移盘架适配耗材24/48个试管/小瓶，96深孔盘特色模块氮吹模块。加热振荡器（2400rpm，RT-90℃）。液面探测。高效过滤安全罩。试剂槽/冷却板相关模块点样钢针复杂的实验，简单的仪器无法满足？定制高通量液体处理工作站，按照您的实验需求配套定制！更多仪器模块配置根据你的实验项目需求推荐，欢迎点击【一键咨询】，【发送留言】后我们会马上联系您 Aurora多肽微阵列点样仪原理 自动化解决方案将会大幅度提高实验通量和效率，同时也降低实验成本，实现高通量、微型化、快速化。 Aurora多肽微阵列点样仪应用案例 喷印示例：多种基质、密度、形状:Aurora微阵列点样仪用户案例: Aurora产品应用报告列表（部分），更多更新欢迎查阅Aurora官网~ Applications Genomics &bull Automated Isolation of Genomic DNA using the MACHEREY- NAGEL NucleoMag Plant kit by Aurora Biomed’s VERSA 1100 &bull Automated Isolation of Genomic DNA using the MACHEREY-NAGEL NucleoMag Blood 200μL kit by Aurora Biomed’s VERSA 1100 &bull 采用性犯罪试剂盒差异消化方法在VERSA 1100自动化应用 &bull VERSA&trade 1100 GENE在下一代测序（NGS）文库制备自动化的可行性验证 &bull 全血样品中核酸提取应用报告 &bull 植物样品中核酸提取应用报告 &bull Automation of DNA Extraction &bull PCR Setup &bull Automation of Reverse Transcriptase PCR &bull Automation of Real time PCR &bull Automation of RNA Sequencing &bull Automation of Next Generation Sequencing &bull Automation of DNA Microarray &bull Automation of Miniprep &bull Automation of Sanger Sequencing &bull Automation of On-Slide (Amplislide) PCR Setup using VERSA&trade 110 PCR Setup Workstation &bull Food Safety Monitoring using VERSA&trade 110 NAP Workstation &bull Hot-Start PCR using VERSA&trade 110 PCR Workstation &bull DNA Isolation from Saliva (Invitek Forensic DNA Isolation Kit) &bull Nucleic Acid Prep for Avian Flu Viral RNA &bull β-Actin and Whole Genome Amplification (Sigma & Promega kits) &bull Genomic DNA Isolation from Blood (Promega) &bull Automation of Molecular Pathology Applications on the VERSA&trade 10 PCR Setup Workstation &bull Automated System for High Throughput PCR SetupExtraction &bull 高通量固相萃取&气相色谱-质谱联用方法定量检测吸毒者尿液中甲基苯丙胺和苯丙胺 &bull HTS Flux Assay Automation &bull Validation of Automated Liquid Liquid Extraction of 25-hydroxy vitamin D &bull Automation of Sample Preparation and Introduction into NMR Tubes &bull Liquid Liquid Extraction of β-carotene &bull Automation of Protein PurificationGeneral Liquid Handling &bull High-Density Peptide Array Printing &bull Specimen Staining for TEM (Array printing) &bull Automated Slide-Based Assay Setup using VERSA&trade 110 Workstation欢迎点击【一键咨询】，【发送留言】后我们会马上联系您，为您的实验或应用需求推荐合适的仪器配置
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    厂商： 加拿大欧罗拉生物科技有限公司
    品牌： 欧罗拉/Aurora
    型号： VERSA1100(生物多肽合成)
    价格： 95万元
  • Visium 空间基因表达
    细胞在组织样本中相对的位置关系对于理解疾病病理学至关重要。Visium空间基因表达解决方案不仅可以检测带有空间分辨的全转录组表达，同时还可以通过HE染色捕获相同组织切片中的组织学信息，并且可以将基因表达谱映射回组织原始的位置。此外，结合免疫荧光染色，还可以同时对蛋白组和基因表达进行可视化分析。目前该方案支持冰冻切片，石蜡切片。该解决方案为癌症，免疫学，神经科学，发育生物学等领域的研究提供组织和基因表达复杂性的新视角。10x Genomics于2019年推出了Visium空间基因表达解决方案,可以实现新鲜冰冻样本和石蜡包埋样本的空间转录组分析。接着在2022年推出了Visium CytAssist组织多组学分析物转移系统,目前可以将新鲜冰冻或者FFPE切片上的转录组分析物从普通的载玻片转移到VIsium玻片上。这样就使得我们可以对已经存到玻片上的病理样本进行空间转录组分析。或者,您可以在普通载玻片上对组织切片进行HE或者免疫荧光染色,选取感兴趣的切片,再将其转录组分析物转移到Visium玻片上。关于北京易研科技有限公司易研科技专注于为生命科学研究、基础医学研究等领域提供先进的产品及科技服务。作为10x Genomics、bioGenous等知名品牌的官方合作代理商，易研科技为客户提供Chromium单细胞平台、Visium空间平台、Xenium原位检测平台及bioGenous类器官研究相关的仪器和试剂。同时，易研科技也提供单细胞/空间转录组测序、蛋白多因子检测、多色荧光免疫组化、流式细胞分析与分选、细胞成像（激光共聚焦成像、高分辨率活细胞成像、高内涵成像以及超高分辨活细胞成像）以及组织样本病理检测等科研科技服务。电话：4009-215-415
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    厂商： 北京易研科技有限公司
    品牌： 10x Genomics
    型号： Visium 空间基因表达
    价格： 面议
  • IOS过表达稳转细胞系构建服务
    IOS过表达稳转细胞系构建服务 卡梅德生物在稳定细胞株构建方面拥有丰富的经验，熟悉实验环节中的每一步操作，尤其对关键步骤具有经验。成熟的构建稳定细胞系的经验，助力您成功筛选到靶基因稳定表达的单克隆细胞系。 IOS过表达稳转细胞系构建服务 外源质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的蛋白，称为稳定细胞系。高质量的稳定细胞系在生物学研究中扮演着非常重要的角色，包括药物开发、基因功能研究、重组抗体等。然而构建一个有效的细胞系是一件复杂而费时的工作，但凭借独到的技术经验，目前我司已成功为众多科研客户构建获得大量目的细胞株。基于卡梅德生物IOS（Integration Operating System)重组技术，我们可为您提供目的基因的过表达稳定株系构建服务。利用IOS技术，将目的基因定点整合到经过筛选验证过的基因组高表达活性位点中，这些位点不仅安全（无基因），而且基因表达量更高（活跃表达位点），因此可以实现目的基因过表达，并能长期稳定遗传。实验周期短，整合效率高。并且基因整合不限长度，可同时整合多个基因，实现多基因共表达。卡梅德生物依托先进的技术和专业的科研团队，可为您提供：*CRISPR/Cas9敲除细胞系构建服务 *IOS过表达稳转细胞系构建服务 *IOS沉默稳转细胞系构建服务 *精确定点整合细胞系构建服务 服务优势：*实验周期短，整合效率高。*对于不同长度基因的整合，能达到一致的整合效率，并可同时整合多个基因。*定点整合的位点为高表达位点，基因的表达量高。*稳定遗传，传代过程中，基因不会丢失。卡梅德生物科技（天津）有限公司真诚期待与您的合作！
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    厂商： 卡梅德生物科技（天津）有限公司
    品牌： 未知
    型号： 7
    价格： 面议
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血清多肽组表达模式相关的方案

  • 布鲁克道尔顿：不同的胞外蛋白酶活性造成肿瘤特异的血清多肽组表达模式
    新近研究表明，通过质谱法已建立了多种独特的血清多肽组表达模式库，而血清多肽组表达模式与临床症状密切相关。阐明血清中多肽组成的序列特征及其产生机制，将有助于将血清多肽组表达模式作为可靠的疾病标识而更加广为接受。我们采用一种高度优化的多肽提取方法和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术进行的研究表明，仅靠一套有限的血清多肽表达模式（一个特征），即可将3 种类型的实体肿瘤患者和未患癌的对照受试者准确地区分开来。61 个特征肽段的靶序列识别结果显示，这些肽又可分为密切相关的几个簇，大多数是由于造成肿瘤类型特异性差异的胞外蛋白酶活性影响了体内结合蛋白质的水解过程和补体的降解过程而产生的。这一特征肽段家族成员虽少、但功能极为强大，可精确预测前列腺癌样本的分级，其准确度与其他标准方法可比。总之，本研究表面，疾病的肽段标记物表达谱和蛋白酶活性的差异之间存在直接的相互关联，而且，本文中所描述的几种肽段表达模式在临床上有望用作癌症检出和分级的标记物，同时我们的发现对未来的肽段生物标记物的研究也具有重要的提示意义。
  • 通过Western Blot和免疫荧光及免疫组化的方式检测蛋白表达量
    EMT即上皮间质转化，在此过程中，上皮细胞的极性丧失，迁移和运动能力增强，同时上皮表型丢失而逐渐获得间质表型。伴随表型变化，许多基因的表达发生了改变，上皮表型相关蛋白，如角蛋白、E-钙粘蛋白、紧密连接蛋白-1、闭锁小带蛋白等含量下降，间质表型相关蛋白，如波形蛋白、N-钙粘蛋白、α -平滑肌肌动蛋白、纤维连接蛋白等含量上升，同时一系列转录因子的表达也发生了变化。蛋白表达量的变化多通过Western Blot和免疫荧光及免疫组化的方式来检测，其中Western Blot可以使用组织和细胞实现蛋白的定性和半定量，免疫荧光可以使用细胞爬片检测细胞中蛋白的定位以及定性分析，免疫组化可以使用组织切片检测细胞中蛋白的定位以及定性分析，针对不同的样品类型，可以采用不同方式来检测EMT导致的蛋白表达变化。
  • 大肠杆菌表达体系出现无或低蛋白表达结果因素
    大肠杆菌表达体系为什么会出现无或低蛋白表达的结果？诱导前后蛋白存在毒性或者表达过程中密码子有偏向性，都可能造成蛋白不表达或低表达的结果。
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  • 【金秋计划】远志bZIP基因家族的鉴定及表达分析

    远志系陕西道地药材，是“秦药”大宗道地药材品种之一[1]。《中国药典》2020年版所收载的远志为远志科（Polygalaceae）植物远志Polygala tenuifolia Willd.或卵叶远志P. sbirica L.的干燥根[2]，具有镇静安神、祛痰开窍、解毒消肿等功效[3]。现代研究表明，远志的主要活性成分有皂苷类、寡糖酯类、酮类等，具有抗记忆障碍、保护中枢神经系统、抗抑郁、抗心肌缺血和抗肿瘤等作用[4]。目前，关于远志的研究多集中于含量研究[5]、活性测定[6]、遗传多样性分析等[7]。随着分子生药学的发展，对药用植物相关活性成分生物合成途径相关调控基因、转录因子的挖掘已成为研究热点，基因组学、转录组学等技术在远志上的成功应用，也为远志基因家族的筛选、鉴定与分析提供了技术支撑和数据基础[8]。 碱性亮氨酸拉链（bZIP）基因家族作为真核生物中转录网络的重要开关，是植物中最大的转录因子家族之一。bZIP结构域由两个区域组成，即DNA结合基本区和亮氨酸拉链区[9]。bZIP基因家族成员通过差异基因网络或生物过程，在调节植物发育、生长以及盐胁迫响应等方面发挥着重要作用[10]。研究表明，拟南芥Arabidopsis thaliana L.、番茄Solanum lycopersicum L.、黄瓜Cucumis sativus L.、李子Prunus salicina L.和蓖麻Ricinus communisL.等多种植物中的bZIP参与调控组织分化、细胞生长、糖代谢、生物和非生物胁迫等多个生物学过程[11-12]。bZIP基因家族成员还参与多种药用植物次生代谢产物合成调控，如丹参Salvia miltiorrhiza Bunge.的SmbZIP1基因可抑制丹参酮的积累，大豆Glycine max (Linn.) Merr.的GmbZIP123基因则参与大豆种子脂质积累的调控[13]。同时，bZIP表达受外源激素和胁迫诱导，壳聚糖处理葡萄Vitis vinifera L.12 h下，其VvLysM8和VvLysM9基因表达量显著提高[14]，糜子Panicum miliaceum L.中的PmbZIP97不仅受到脱落酸（abscisic acid，ABA）、盐和干旱胁迫强烈诱导且参与调控萌发后的根系生长[15]。 本实验利用远志三代转录组数据，以bZIP基因家族为研究对象，对其基因家族进行成员鉴定和生物信息学分析，并确定其在远志中的结构特点与进化特征，进一步通过实时荧光定量分析其在不同组织、不同处理条件下的表达模式，为后续深入研究bZIP的生物学功能奠定基础，同时为bZIP家族可能参与远志次生代谢成分生物合成途径研究提供思路。 1 材料及仪器1.1 材料2021年10月于陕西中医药大学药用植物园（陕西咸阳）采集3年生远志Polygala tenuifolia Willd.及其成熟种子，经陕西中医药大学杨新杰副教授鉴定。选取5株三年生长势均匀的远志植株，将根、茎、叶等量混合后进行全长转录组测序分析。1.2 试剂及仪器ABA、壳聚糖（chitosan，CHT）均购自上海源叶生物科技有限公司，Trizol总RNA提取试剂盒、dd H2O均购自生工生物工程（上海）股份有限公司，TB Green® Premix ExTaqTM Ⅱ （TliRNaseH Plus）、PrimeScriptTM Ⅱ 1st strand cDNA Synthesis Kit购自TaKaRa公司（日本），所用引物由武汉金开瑞生物公司合成。StepOnePlusTM Real-Time PCR（qPCR）仪（美国Applied Biosystems公司），NanoDropTM 2000分光光度计（美国Thermo-fisher公司），K5800自动检测超微量分光光度计（凯奥公司），?80 ℃超低温冰箱（中科美菱公司）。 2 方法2.1 样品的处理选择大小均一，颗粒饱满的远志种子，用自来水冲洗1 d，10%双氧水消毒，播种于装有泥炭土的花盆中，在光周期16/8 h，光照强度9 000 Lx条件培养[16]。选取长势均一的2月幼苗，喷200 μmol/L ABA、200 μmol/L CTS，干旱（10% PEG 6000）、盐（100 mmol/L NaCl）20 mL，以无菌水作为对照组；以0 h为空白对照，重复3次，6、12、24和48 h取样处理（3株），于?80 ℃冰箱储存，采用PacBio Seque Ⅲ进行上机测序，获得远志全长转录组学文库[17]。2.2 远志bZIP家族基因鉴定及理化性质分析基于远志转录组数据库，筛选出注释结果为bZIP的序列，将序列gene id对应的fasta结果输入editseq软件，进一步获得具有完整开放阅读框（open reading frame，ORF）的基因，通过NCBI中的BlastX进行比对与鉴定。Protparam分析目标蛋白的理化性质，ProtScale预测不同氨基酸中的蛋白亲疏水性[18]。2.3 远志bZIP家族基因二级结构、信号肽、跨膜结构及亚细胞定位分析用ExPASy分析基因编码蛋白质的结构域，CDD验证；ProtParam和SOPMA分析远志bZIP转录因子的二级结构；SignalP-5.0和TMHMM预测信号肽和跨膜区域；WoLF PSORT预测亚细胞定位[19]。2.4 远志bZIP家族基因进化树构建从Tair网站下载拟南芥蛋白序列，通过MEGA软件对远志、拟南芥bZIP氨基酸序列进行多序列比对，利用MEGA的最大自然法构建系统发育树，重复次数设置为1 000次[20]。2.5 远志bZIP家族基因密码子偏好性分析及蛋白互作预测分析采用CodonW、CUSP和Chips分析密码子偏好性。蛋白互作预测分析利用STRING进行，并以拟南芥筛选其同源基因后，通过Cytoscape 3.9.0软件作图。2.6 远志bZIP家族基因蛋白特征、保守基序分析及不同组织表达量热图通过chiplot分析bZIP蛋白的结构域，MEME获得bZIP蛋白的保守氨基酸基序，并用TBtools进行可视化，Weblogo分析蛋白序列位点。利用诺禾云平台将转录组数据库中27个PtbZIP基因在远志根、茎、叶3个部位的差异表达数据进行层级聚类分析。2.7 远志bZIP家族基因表达模式验证与分析Trizol法提取各样品总RNA，凝胶电泳检测后测定总RNA浓度。使用Prime Script TM II 1st strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA，检测浓度后于?20 ℃保存备用。设计荧光定量引物，并送生工生物工程（上海）股份有限公司合成。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（F：5’-ACAGCAACGTGCTTCTCACC-3’，R：5’-CCCTTCATCCACCACCGACTA-3’）为内参基因，验证PtbZIP26（F：5’-GCACTGATGG- GAAGGCTGAA-3’，R：5’-GATTGCCCAACAC- TTGAGGG-3’）、PtbZIP27（F：5’-GTCGGATGGT- AGTGAACGGG-3’，R：5’-CACCATTTCCCGAAC- CCTGA-3’）在不同部位样本中的表达量。选择表达量较高的PtbZIP26进行不同激素、胁迫处理下的表达量分析。qRT-PCR反应体系为TB Green Premix Ex Taq Ⅱ（2×）5.0 μL；上下游引物各0.4 μL；50×ROX Reference Dye 0.2 μL，cDNA 1.0 μL；ddH2O 3.0 μL。PCR反应程序参照TB Green Premix Ex Taq Ⅱ试剂说明书进行，每个反应重复3次。基因相对表达量采用2?ΔΔCt法计算，SPSS 27.0统计分析。 3 结果与分析3.1 远志bZIP基因家族成员的鉴定和蛋白理化性质分析基于远志全长转录组数据库，共筛选得到63个注释为bZIP基因的序列ID，进一步分析后获得39个包含完整ORF的序列。整理ORF差异位点并合并重复，最终得到27个全长bZIP转录因子，编号PtbZIP1～PtbZIP27（表1）。该转录因子的氨基酸个数143～846，相对分子质量介于16 201.52～92 932.3，等电点4.59～9.69。除PtbZIP1和PtbZIP22的不稳定指数小于40，系稳定蛋白质外，其余PtbZIP均为不稳定蛋白。bZIP基因家族脂肪系数介于48.31～92.66，所有bZIP蛋白的平均亲水性数值是负值，为亲水性蛋白。图片3.2 远志bZIP基因家族成员的二级结构、信号肽、跨膜结构及亚细胞定位分析二级结构分析结果（表2）表明，远志bZIP家族蛋白均具有α螺旋、延伸链、β转角和无规卷曲，主要由α螺旋和无规卷曲构成，延伸链和β-折叠所占比例较小，散布于整个蛋白中。SignalP-5.0和TMHMM在线分析结果一致，所有远志bZIP蛋白信号肽分值都低于0.5，说明其均无信号肽，不属于分泌蛋白。跨膜结构域分析则显示，仅PtbZIP9和PtbZIP13有跨膜结构域。亚细胞定位结果表明，远志bZIP家族成员主要定位在细胞核。图片3.3 远志bZIP基因家族成员系统进化分析利用MEGA7.0构建远志与拟南芥bZIP转录因子家族系统进化树。结果表明，27个PtbZIP蛋白分为A、B、C、D、F、G、I、S 8个组，没有bZIP蛋白分到E和K组中。其中G是最大的1个亚组，含有PtbZIP家族成员共8个，占总数的29.63%；A、F、I和S组均含3个PtbZIP家族成员，B组含2个PtbZIP家族成员，C组含1个PtbZIP家族成员，D组含4个PtbZIP家族成员（图1）。图片3.4 远志bZIP基因家族成员蛋白结构域分析BRLZ、MFMR和DOG1为bZIP蛋白中的常见结构域，BRLZ参与调控果生炭疽菌的营养生长，MFMR涉及蛋白与蛋白之间的相互作用，DOG1则与种子休眠相关[21-22]。远志bZIP的结构域分析结果表明：10个蛋白存在BRLZ结构域，9个蛋白存在MFMR结构，6个蛋白存在DOG1结构域（图2）。PtbZIP3和PtbZIP13含有大小相近的CCDC 158 superfamily，PtbZIP26、PtbZIP21和PtbZIP5则均含有BRLZ、MFMR及homeobox结构，结合进化树结果可知PtbZIP3和PtbZIP13聚在一起，PtbZIP26、PtbZIP21和PtbZIP5三者亲缘关系较近。图片3.5 远志bZIP基因家族成员保守基序分析利用MEME对远志27个bZIP蛋白序列进行保守基序分析的结果显示，不同bZIP转录因子基因包含的保守元件数量及种类存在差异，其中bZIP14基因包含的保守元件数量最少（2个），bZIP18/25基因包含的保守元件数量最多（11个），说明bZIP成员具有功能冗余现象，也具有功能差异性（图3）。图片bZIP蛋白结合位点序列分析结果表明，bZIP转录因子的每个重复结构域约为65 aa，均含有1个保守的bZIP结构域，其中N端一般具有高度保守的N-X7-R蛋白基序和碱性亮氨酸区域（图4）。图片3.6 远志bZIP基因家族成员密码子偏好性分析密码子可用来推断基因组内部或基因组之间的进化关系，而不同种类或同一种类的基因对密码子使用有不同的偏好模式[23]。由bZIP基因家族中的27条核苷酸序列中密码子GC的总含量（GC）以及同义密码子第1位（GC1s）、第2位（GC2s）、第3位的（GC3s）的GC含量分析结果可知：27条PtbZIP基因序列的GC1s、GC2s和GC3s的均值分别为52.24%、44.90%和40.93%，不同位置的GC含量存在差异；它们的GC平均值为46.11%，小于50%，表明其更偏向于A或U结尾的密码子[24]（表3）。图片有效密码子（effective number of codon，ENC）反映了密码子偏离随机选择的结果，它是对同义密码子非均衡使用偏好程度的一个重要指标[25]，ENC数值一般在20～61范围内，当ENC＞35则表示密码子偏好性较弱。密码子适应指数（codon adaption index，CAI）是指编码该蛋白的所有密码子相对于这条基因都使用最优密码子的情况下的适应系数[24]。由表3可知，远志bZIP家族成员的ENC数值为43.088～57.195个，平均值为51.13个，密码子偏好性较弱。CBI值较低说明其外源基因在目的宿主中表达较弱。CAI值较低，则说明其适应性较弱。3.7 远志bZIP基因家族成员蛋白互作网络分析为深入了解远志bZIP蛋白的潜在功能和家族成员之间的相互作用，利用STRING软件，基于拟南芥数据库，对远志的27个bZIPs蛋白进行了互作网络分析。由图5可知，调控网络中共有27个节点（代表bZIPs蛋白），104条边（代表蛋白质之间的相互作用），表明远志的bZIPs蛋白存在多种互作现象，且26个bZIPs成员之间存在潜在的互作关系，为进一步验证远志bZIP的功能提供了重要依据。图片3.8 远志bZIP基因家族成员不同组织表达量热图和验证根据远志转录组数据，对27个PtbZIP基因在远志根、茎、叶中的FPKM差异表达数据进行了双向聚类分析。通过表达量热图分析可知，绝大部分基因的表达不恒定，在不同组织具有相对较高的表达量，根、茎和叶中表达量较高的基因数分别为23、2和2。PtbZIP4/15在叶中的表达量最高，茎和根次之；PtbZIP8/24在茎中的表达量最高，叶和根次之；剩下23个除PtbZIP1/17的表达量为根＞叶＞茎，其余表达模式为根＞茎＞叶（图6-A）。基于RT-qPCR验证转录组数据结果显示，PtbZIP26、PtbZIP27在根中的表达量最高，茎、叶次之，与转录组结果一致（图6-B）。图片3.9 PtbZIP26不同处理下的表达模式为了探究bZIP家族基因在远志不同处理条件下的表达模式，以PtbZIP26为代表，对其进行了激素和干旱、盐胁迫处理条件下的表达模式分析。结果发现，以0 h为空白对照（CK），PtbZIP26的表达量在ABA处理6 h内迅速上升，在24 h达到峰值；CTS处理分别持续上调至峰值为CK的5.3倍（24 h）后逐渐下调（图7-A）。PEG处理6 h迅速下降后又随着处理时间增加缓慢恢复上调，NaCl处理6 h后上调明显（图7-B）。 图片4 讨论bZIP基因家族在植物中广泛分布，参与植物的多个生长过程，如生长发育、应激反应以及次生代谢物的生物合成[26]。现阶段，bZIP基因家族已在多个物种有过相关的鉴定和研究，使得对bZIP的生物功能了解更透彻。本实验基于远志三代全长转录组数据库，找到39个bZIP isoforms，通过完整开放阅读框与BlastX分析找出具有完整ORF的基因，去除重复的isoforms，筛选并鉴定得到27个PtbZIP基因家族成员。理化性质分析显示，27个成员均为亲水性蛋白，且除PtbZIP1和PtbZIP22外均为不稳定蛋白；理论等电点小于7的蛋白有16个，属酸性蛋白，其余均为碱性蛋白。PtbZIP蛋白信号肽分值都低于0.5，说明其均无信号肽，信号肽是分泌蛋白的决定因子，推测PtbZIP蛋白不属于分泌蛋白。亚细胞定位结果显示，远志bZIP蛋白主要定位于细胞核，这与转录因子主要在细胞核中发挥作用一致。PtbZIP家族成员的蛋白二级结构也有明显的特点，主要有α-螺旋、无规卷曲。系统进化分析显示，27个PtbZIP蛋白分为A、B、C、D、F、G、I、S 8个组，其中含有8个PtbZIP家族成员的G亚组系最大亚组。PtbZIP11/18/25与拟南芥At1g32150.1、At2g35530.1高度同源，且包含的保守元件数量最多，推测PtbZIP11/18/25可能在远志干旱应答的分子机制中起重要作用[27]。研究表明，A类别的大多数功能信息提示在ABA或应激信号中的作用，PtbZIP6/12/16被分在A组，推测该基因可能参与到远志ABA信号转导途径[28]。S类别是拟南芥最大的bZIP类别之一，在胁迫处理后也被转录激活或在花的特定部分特异表达。研究证实，拟南芥bZIP家族中的S类别的基因在响应干旱有重要作用，本研究中共有3个PtbZIP基因被分到S类别下，其中PtbZIP15在叶中表达量高，PtbZIP24在茎中表达量高，可能参与调控远志对干旱的响应。同时，27个PtbZIP基因家族成员的蛋白二级结构预测结果十分相似，但序列间同源性相对较低，表明PtbZIP基因可能在远志生长发育方面发挥广泛的生物功能。表达模式分析发现，大部分PtbZIP在根中表达最高，qPCR结果验证与转录组数据一致，推测它们主要在远志地下部分发挥作用。植物中转录因子的表达与激素密切相关，研究发现葡萄VvLysM8和VvLysM9在壳聚糖处理12 h、脱落酸处理3 h时相对表达量最高[14]。马铃薯StHXK家族基因在ABA诱导下表达均显著上调，且在10%PEG胁迫处理下也呈不同程度的上调表达[29]。陆地棉GhKIN基因家族的鉴定和分析发现，干旱和盐胁迫处理后GhKIN14和GhKIN27表达出现下调，而GhKIN18等在一定时间点表现为表达上调[30]。本研究选择一个在根中高表达的PtbZIP26基因，通过不同激素、胁迫处理探讨了其是否受到相关激素和胁迫调控，结表明激素处理（ABA和CTS）远志幼苗后，PtbZIP26表达水平显著提高；同时，盐胁迫和干旱胁迫处理也可诱导PtbZIP26基因的表达发生改变且随胁迫时间的变化呈现出差异性，说明PtbZIP26可能通过不同信号通路参与远志应对逆境胁迫的表达，具体作用机制有待深入研究。本实验基于远志三代转录组数据，以远志bZIP基因家族为研究对象，对其家族成员进行鉴定和生物信息学预测分析，明确了相关结构特点与进化特征，进一步通过qPCR分析其在不同组织、不同处理下的表达模式，为探究PtbZIP参与生长发育、代谢过程及非生物胁迫的调控机制提供参考依据，为后期的基因功能研究奠定了基础。

  • 杆状病毒-昆虫细胞表达系统的优势与局限性

    [b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]杆状病毒载体表达系统（[/font][font=Calibri]Baculovirus [/font][font=宋体][font=Calibri]e[/font][/font][font=Calibri]xpression [/font][font=宋体][font=Calibri]vector system, BEVS[/font][font=宋体]）自[/font][font=Calibri]1983[/font][font=宋体]年问世以来，已广泛应用于疫苗生产、基因治疗等领域。目前已有多种[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]衍生产品获批使用，如[/font][font=Calibri]HPV[/font][font=宋体]疫苗、流感疫苗和几款兽用疫苗等。[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]具有安全性高、操作简单、可以无血清培养等优点，但同时也面临表达不稳定和蛋白质糖基化水平低等挑战。本文总结了[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]的优势和局限性。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]杆状病毒载体表达系统的优势[/font][font=Calibri] [/font][/b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、安全性高：杆状病毒仅感染昆虫细胞，不感染其他脊椎动物，对人类健康没有不良影响。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、高效的蛋白质表达：[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]能够表达复杂或难以表达的蛋白质，例如各种酶类、寄生虫蛋白、糖蛋白等，并且能进行正确的蛋白质折叠和翻译后修饰。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、易于大规模生产：昆虫细胞可以在无血清的培养基中生长，并且易于扩大生产规模。此外，[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]不需要处理活病毒或潜在危险的病原体，降低了生产成本。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、应用广泛：广泛用于功能、晶体学和药物发现研究。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]杆状病毒载体表达系统的局限性：[/font][/b][font=Calibri] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、表达不稳定：由于病毒的细胞毒性作用导致宿主细胞裂解，这可能影响最终的产物产量和蛋白质的稳定性。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、糖基化水平较低：昆虫细胞所产生的异源蛋白质的[/font][font=Calibri]N-[/font][font=宋体]糖基化图谱与哺乳动物细胞产生的不同，这可能影响蛋白质的稳定性、生物活性或免疫原性。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、潜在的免疫反应：[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]诱导的免疫反应可能产生炎症细胞因子和趋化因子，并激活补体途径，这也可能对蛋白质表达产生负面影响。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、基因组不稳定性：杆状病毒基因组可能存在不稳定性，影响长期表达和生产稳定性。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体][font=宋体]尽管存在一些挑战，但[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]平台近年来已经得到了显著改进，包括病毒载体的优化、病毒基因组的修饰和宿主细胞的广泛应用，这些分子进步有助于增强[/font][font=Calibri]BEVS[/font][font=宋体]平台的多样性和应用潜力。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]义翘神州提供[/font][url=https://www.sinobiological.com/services/baculovirus-insect-protein-expression-service][u][font=宋体][color=#0026e5][font=宋体]杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫蛋白表达的一站式服务[/font][/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]。凭借优化的表达载体和更高滴度的病毒包装技术，义翘神州在杆状病毒[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]昆虫细胞蛋白表达方面具有丰富的经验，特别是针对序列较长的蛋白、病毒类蛋白、激酶、胞内蛋白以及膜蛋白等。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献：[/font][font=Calibri]Hong M, Li T, Xue W, et al. Genetic engineering of baculovirus-insect cell system to improve protein production. Front Bioeng Biotechnol. 2022 10:994743. Published 2022 Sep 20. doi:10.3389/fbioe.2022.994743[/font][font=Calibri] [/font]

  • 大肠杆菌表达系统和酵母表达系统：各自的优缺点

    [font=宋体]蛋白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系，通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同，适合表达蛋白的种类也不相同。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、载体。载体的种类与宿主相匹配。根据宿主不同，分为原核（细菌）表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中含有外源基因片段。通过载体介导，外源基因可以在宿主中表达。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、辅助成分。有的表达系统中还包括了协助载体进入宿主的辅助成分。比如昆虫[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]杆状病毒表达体系中的杆状病毒。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]一、大肠杆菌表达系统[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在各种表达系统中，最早被采用进行研究的是大肠杆菌表达系统，也是目前掌握最为成熟的表达系统。大肠杆菌表达系统以其细胞繁殖快速产量高、[/font][font=Calibri]IPTG[/font][font=宋体]诱导表达相对简便等优点成为生产重组蛋白的最常用的系统。目前最常用的大肠杆菌表达系统为[/font][font=Calibri]BL21-PET[/font][font=宋体]表达系统，此系统目前已经商业化，并且普遍应用于各大实验室和生物技术公司。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]对于表达不同的蛋白，需要采用不同的载体。目前已知的大肠杆菌的表达载体可分为非融合型表达载体和融合型表达载体两种。非融合表达是将外源基因插到表达载体强启动子和有效核糖体结合位点序列下游，以外源基因[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]AUG[/font][font=宋体]为起始翻译，表达产物在序列上与天然的目的蛋白一致。融合表达是将目的蛋白或多肽与另一个蛋白质或多肽片段的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]序列融合并在菌体内表达。融合型表达的载体包括分泌表达载体、带纯化标签的表达载体、表面呈现表达载体、带伴侣的表达载体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点：遗传背景清楚；繁殖快、成本低、抗污染能力强；表达量高、表达产物分离纯化相对简单、稳定性好；商品化的载体和菌株种类非常齐全、适用范围广等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点：[/font][font=宋体][font=宋体]① 没有真核转录后加工的功能，不能进行[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]的剪接，所以只能表达[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]而不能表达真核的基因组基因；[/font][/font][font=宋体]② 没有真核翻译后加工的功能，表达产生的蛋白质，不能进行糖基化、磷酸化等修饰，难以形成正确的二硫键配对和空间构像折叠，因而产生的蛋白质常没有足够的生物学活性；[/font][font=宋体][font=宋体]③ 表达的蛋白质经常是不溶的，会在细菌内聚集成包涵体，尤其当表达目的蛋白量超过细菌体总蛋白量[/font][font=Calibri]10%[/font][font=宋体]时，就很容易形成包涵体。生成包涵体的原因可能有是蛋白质合成快速太快，多肽链相互缠绕，缺乏使多肽链正确折叠的因素，导致疏水基因外露等。细菌裂解后，包涵体的离心后的沉淀中，虽然有利于目的蛋白的初步纯化，但无生物活性的不溶性蛋白，要经过复性，使其重新散开、重新折叠成具有天然蛋白构象和良好生物活性的蛋白质，常常是一件很困难的事情。也可以设计载体使大肠杆菌分泌表达出可溶性目的蛋白，但表达量往往不高。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④ 可能会产生一些致热源[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]内毒素[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，并且大肠杆菌本身含有内毒素和有毒蛋白，可能混杂在终产物里。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、酵母表达系统[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]酵母表达系统作为一种后起的外源蛋白表达系统，由于兼具原核以及真核表达系统的优点，正在基因工程领域中得到日益广泛的应用，应用此系统可高水平表达蛋白，且具有翻译后修饰功能，故被认可为一种表达大规模蛋白的强有力的工具。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常用的酵母表达系统有酿酒酵母表达系统和甲醇营养型酵母表达系统。甲醇酵母表达系统是目前应用最广泛的酵母表达系统。目前甲醇酵母主要有汉森酵母属[/font][font=Calibri](Hansenula)[/font][font=宋体]，毕赤酵母属[/font][font=Calibri](Pichia)[/font][font=宋体]，球拟酵母属[/font][font=Calibri](Torulopsis)[/font][font=宋体]等，并以毕赤酵母属应用最多。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点[/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]生长方面：酵母是一种单细胞低等真核生物，培养条件普通，生长繁殖快速，能够耐受较高的流体静压，用于表达基因工程产品时有效降低了生产成本。毕赤酵母具有强烈的好氧生长偏爱性，可进行细胞高密度培养，利于大规模工业化生产。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]安全性方面：酿酒酵母被认为是安全无毒的，有着数十年的大规模发酵研究基础。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]分子生物学操作方面：酿酒酵母在重组[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中的广泛研究也是基于其己被人们掌握的大量分子生物学及生理学信息。外源基因一般和表达载体一起整合到了酵母染色体上，随染色体一起复制和遗传，不会发生外源基因的丢失现象。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]蛋白表达方面：可以进行蛋白的糖基化，而且还能分泌重组蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5. [/font][font=宋体]蛋白分泌方面：由于毕赤酵母自身分泌到培养基中的蛋白很少，因此纯化方便。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点[/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]克隆基因的表达量低，发酵时间长，不正确的蛋白糖基化及抗细胞分裂。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]培养上清多糖浓度高，不利于纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前大肠杆菌蛋白表达系统是用最广泛，也是最经济实惠的蛋白表达系统。[/font][font=Calibri]E. coli[/font][font=宋体]具有遗传背景清楚、细胞增殖快、表达量高、稳定性好和抗污染能力强等特点，适用于多种属蛋白的表达，尤其对小分子蛋白的生产具有极大的优势，但也存在一些问题，如易形成包涵体和含有内毒素等。义翘神州提供从密码子优化到重组蛋白表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化的一站式服务以及内毒素去除等附加服务，以满足不同的定制需求。我们拥有丰富的[/font][font=Calibri]E. coli [/font][font=宋体]可溶性蛋白表达[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]纯化及蛋白复性经验，拥有多种[/font][font=Calibri]E. coli[/font][font=宋体]细胞株和表达载体，可为客户提供优质的[url=https://cn.sinobiological.com/services/e-coli-protein-expression-service][b]原核蛋白表达服务[/b][/url]。更多关于[/font][font=宋体]大肠杆菌蛋白表达平台[/font][font=宋体]详情可以关注：[/font][/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/e-coli-protein-expression][u][font=宋体][color=#0000ff][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/e-coli-protein-expression[/font][/color][/font][/u][/url][font=宋体] [/font]

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  • 葛瑛团队成果：自上而下蛋白质组学表征人类心脏中肌球蛋白特异性表达
    大家好，本周为大家分享一篇预发表的文章，Top-down Proteomics of Myosin Light Chain Isoforms Define Chamber-Specific Expression in the Human Heart ，文章的通讯作者是威斯康星大学麦迪逊分校的葛瑛教授。　　肌球蛋白作为肌节的“分子马达”，产生心肌收缩所必需的收缩力。肌球蛋白轻链1和2 (MLC-1和-2)在调节六聚体肌蛋白分子结构中起着重要的功能作用。轻链中存在“心房”和“心室”亚型，在心脏中呈现出腔限表达。然而，近年来MLC亚型在人心脏的腔室特异性表达受到了质疑。在本文中，作者使用自上而下蛋白质组学质谱分析了成人非衰竭供体心脏的四个心脏腔室中MLC-1和-2心房和心室亚型的表达。　　MLC-1v和MLC-2a是在所有供体心脏中呈现出腔限表达模式的MLC异构体。重要的是，作者的结果明确地表明，MLC-1v，而不是MLC-2v，在成年人心脏中是心室特异性的。图1展示了LV(left ventricle)、RV(right ventricle)、LA(left atrium)和RA(right atrium)中MLC异构体的检测和定量。作者发现MLC-1v存在心室特异性表达，而MLC-2v没有特异性，并在心房组织中发现了与MLC-2v和pMLC-2v分子质量相匹配的峰。此外，在所有(n=17)无心脏疾病的捐赠者的每颗心脏的心房组织中都能检测到MLC-2v。MLC-2v占总MLC-2含量的百分比采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行定量分析，认为MLC-2v占总MLC-2含量的百分比具有统计学意义，心室和心房间差异显著，LA和RA间横向差异显著。　　图1. MLCs Top-down MS分析　　接下来作者使用串联质谱(MS/MS)鉴定了MLC-2v蛋白质序列。位于心房组织MLC-2v上的去酰胺化翻译后修饰(PTM)被定位到氨基酸N13。去酰胺化位点与调控磷酸化位点Ser14相邻。磷酸化位点附近的脱酰胺基团所带来的额外负电荷模拟了MLC-2a在Ser22/23位点的双磷酸化模式(图2C)。心房特异性的MLC-2v去酰胺化可能与心房内心力的产生有关。磷酸化诱导了MLC-2的构象变化，而第二负电荷的加入可能有助于提高钙敏感性并诱导蛋白质进一步的构象变化。　　图2. Top-down MS/MS 鉴定　　总的来说，自上而下蛋白质组学对整个人类心脏的MLC亚型表达进行了无偏差分析，揭示了之前意想不到的亚型表达模式和PTMs。　　撰稿：张颖　　编辑：李惠琳　　文章引用：Bayne EF, Rossler KJ, Gregorich ZR, Aballo TJ, Roberts DS, Chapman EA, Guo W, Ralphe JC, Kamp TJ, Ge Y. Top-down Proteomics of Myosin Light Chain Isoforms Define Chamber-Specific Expression in the Human Heart. bioRxiv [Preprint]. 2023 Feb 26:2023.01.26.525767. doi: 10.1101/2023.01.26.525767.　　李惠琳课题组网址www.x-mol.com/groups/li_huilin　　参考文献　　1. Bayne EF, Rossler KJ, Gregorich ZR, Aballo TJ, Roberts DS, Chapman EA, Guo W, Ralphe JC, Kamp TJ, Ge Y. Top-down Proteomics of Myosin Light Chain Isoforms Define Chamber-Specific Expression in the Human Heart. bioRxiv [Preprint]. 2023 Feb 26:2023.01.26.525767. doi: 10.1101/2023.01.26.525767.
    时间： 2023-04-17
    作者： ONE
  • Analytical Chemistry封面成果：基于MALDI-TOF血清多肽指纹图谱的新冠肺炎快速检测方法
    仪器信息网讯 由新型冠状病毒(SARS CoV-2)引起的新冠肺炎疫情仍在继续，严重威胁着全球公众健康。截至2021年4月，全球新冠肺炎确诊病例累计已超过1.282亿例。故迅速检测该疾病、及时隔离受感染个体显得尤为重要。目前广泛使用的基于聚合酶链式反应(PCR)和免疫分析的检测方法存在假阴性和诊断延迟的问题。因此，迫切需要高准确度、快速高通量的新冠肺炎检测方法用于大规模人群筛查。重庆市人民医院、复旦大学和国家蛋白质科学中心(北京)等单位的研究团队合作发展了一种基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的血清多肽指纹图谱分析方法，以高效检测新冠肺炎。该方法准确、成本低、通量高、样品消耗少(一次检测仅需5 μL血清)，不需要苛刻、洁净的检测环境，且操作简便，对于非专业人员非常友好。此外，血清样本的采集很大程度降低了采样人员的暴露风险。因此，该方法在大规模人群筛查、常规检测和诊断应用方面具有巨大潜力，有望在疫情控制中发挥重要作用。相关研究成果近期作为封面文章发表在 Analytical Chemistry 期刊上。点击图片阅读论文　　研究团队首先采用MALDI-TOF MS分析了146例新冠肺炎患者和152例对照病例(包括73例临床症状相似的非新冠肺炎患者、33例结核病患者和46例健康人)的血清样本。使用最小绝对收缩和选择算子(LASSO)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和交叉验证递归特征消除(REFCV)共3种机器学习方法对测试集(198个样本)中的血清多肽谱图进行特征峰筛选，筛选出25个峰作为新冠肺炎和对照组之间的差异特征峰。　　图1. 基于血清多肽指纹图谱的新冠肺炎快速筛查诊断模型的建立流程　　随后，利用逻辑回归(LR)、支持向量机(SVM)、随机森林(RF)、朴素贝叶斯(NB)、梯度增强决策树(GBDT)、K-最近邻(KNN)、决策树(DT)和自适应增强(Adaboost)共8种机器学习方法，以这25个特征峰构建用于新冠肺炎筛查诊断的分类模型。并绘制了已构建的不同机器学习模型的接收器工作特性(ROC)曲线，使用曲线下面积(AUC)评估分类器的性能。由结果可知，所有模型的AUC均高于0.99。其中，LR、SVM、RF、GBDT、DT和Adaboost模型的AUC为1。　　图2. 基于多种机器学习算法的新冠患者血清多肽指纹图谱差异特征峰筛选　　紧接着，在独立于特征峰筛选和模型生成的测试集(100个样本)中测试了25个特征峰的分类效果，获得了最佳的分类模型—LR模型，该模型在识别新冠肺炎患者方面显示出98%的敏感度、100%的特异度和99%的准确率。　　图3. 在100例测试集中使用基于机器学习的分类模型鉴定新冠肺炎患者　　研究团队进一步通过血清样本的蛋白质组学分析对25个特征峰进行注释，25个特征峰中有15个被鉴定为完整蛋白质或蛋白质片段。经分析，这15个蛋白涉及淀粉样纤维形成、中性粒细胞脱颗粒、结核分枝杆菌感染、体液免疫反应、受体介导的内吞、急性炎性反应和MAP激酶活性调节等过程。其中，中性粒细胞脱颗粒及急性炎性反应相关蛋白的富集变化已在其它新冠肺炎的组学研究中被报道。　　在这项研究中，新冠肺炎患者血清的取样时间从症状出现起3至28天不等，涵盖了相对较长的疾病进展期。所研究的对照组由近一半具有相似临床症状的非新冠肺炎患者(共73例)、33例结核病患者和46例健康人组成。从非新冠肺炎个体中，尤其是具有相似症状的非新冠肺炎患者中筛查新冠肺炎患者一直以来都是新冠诊断的难题，意义重大。本项研究中样本的长期疾病进程覆盖、对照组样本组成的多样化均显示本方法在新冠肺炎患者快速筛查中有巨大应用前景。　　论文并列第一作者为颜令硕士、易佳博士、黄长武主任技师和张剑博士，乔亮研究员、孙薇副研究员及廖璞教授为共同通讯作者。该项目得到了国家自然科学基金委员会(National Natural Science Foundation of China)、中华人民共和国科技部(Ministry of Science and Technology of the People' s Republic of China)和北京市科委(Beijing Municipal Science & Technology Commission)的支持。
    时间： 2021-06-30
    作者： ONE
  • 印度CDMO巨头采购50套CEM Liberty PRO™： 标志多肽生产模式的根本转变
    印度CDMO巨头采购50套CEM Liberty PRO&trade ：标志多肽生产模式的根本转变随着2023年落幕，CEM迎来了其历史上最大的单笔订单，作为全球最大的原料药供应商之一，印度某知名公司一次性采购50套CEM先进的Liberty PRO&trade 全自动多肽合成生产系统用于多肽原料药API的生产。Liberty PRO&trade 其独特的聚焦微波电磁技术HE-SPPS、CarboMAXTM 专利偶联方法，No Wash 全过程脱保护偶联免洗技术的运用，杜绝了DMF试剂的使用。自动化的Liberty PRO&trade 在一天之内可实现1000mmol级多批次多肽生产。该设备已在众多多肽业务板块中大放异彩，无论是在原材料的生产、新药制剂的研发、仿制药的制造，还是生物仿制药的研发和生产领域，均显著提升了生产效率。在使用CEM Liberty PRO&trade 产品的企业群体中，一致反应此系统极大地，提高了工作流程效率，降低了成本。CEM的Liberty 系列从小规模0.005mmol到大规模1000mmol以上合成工艺的无缝转换，其在优化cGMP工作流程和提升效率方面的卓越表现，赢得了业内专家和各公司科研团队的一致认可和高度评价。众所周知，在多肽药物的生产过程中，首要任务是合成高纯度的肽链。传统的固相多肽合成（SPPS）方法遵循着一系列标准化的操作步骤：去保护、洗涤、耦合和再次洗涤。这些步骤通常在一个设定好产能的大型反应釜中进行，这一过程实际上是从手动多肽合成技术演变而来的，通过增大反应釜的规模以实现产能扩展，反应釜生产装置是基于特定的多肽序列模式和产能要求来设计的。传统的SPPS多肽生产方式，基于其固定的多肽序列模式和固定产能来设计大型反应釜生产线。其试剂和原材料管道、投料口、溶剂尺寸固定，一旦装备和设备投入生产后，生产程序和产能不能更改。而且，随着产能要求反应釜规模的不断扩大，其生产的风险管理挑战也随之而来。许多长链多肽药物生产的第一步固相多肽合成阶段，所需时间即常常超过一个月。这无疑拖长了整个多肽药物生产的周期。而且，万一系统出现任何故障，所投入的原材料和试剂极有可能全部作废，造成管理风险和损失极大。Liberty PRO&trade 的横空出世，改变了传统的固相多肽合成的生产方式和管理方式，大大降低了多肽原料药生产的技术和成本门槛。它的出现是一个重大的技术突破，它改变了传统的多肽生产方式，让多肽的生产从集约的大反应釜模式变成灵活多变的小型单元模块，合成速度提高了5-20倍以上，降低了95%的传统洗涤试剂的使用量，和85%的去保护碱的使用量，实现了多肽生产的高纯度和高产能。Liberty PRO&trade 配置三种不同型号的反应器，其组合的单元化、标准化管理符合 cGMP 的规定，为企业带来生产过程中灵活性。另外，CDMO企业生产管理面对的一个最大的矛盾，是无法实现在大规模单一性多肽订单和小规模多样性的多肽订单之间自由切换的能力。印度医药公司一次性采购50台Liberty PRO&trade 设备订单背后的意义在于，CDMO厂家抛弃了传统固相合成大反应釜的生产管理思路，转而采用更机动灵活的小型模块化单元化生产设备。这样厂家可以根据多肽订单的要求，随时改变设备单元组合，在cGMP框架内，以满足CDMO企业所需要的机动性和灵活性的生产管理。从而既能满足大规模单一性的多肽合成需求，又能满足小规模多样化的多肽订单的机动性要求。厂家大大节约了多肽合成的成本、试剂的成本、风险成本和安全生产管理的成本。 CEM 的 Liberty PRO&trade 是一种创新的多肽合成模块化和单元化设备。它采用了 HE-SPPS、No Wash、CarboMAX 等三大技术，是市场上目前时间最快、成本最低、纯度最高的合成装置。得益于此装置小型化、标准化、模块化及工业化的设计。Liberty PRO&trade 展现出无与伦比的操作灵活性和经济性，能够根据不同多肽序列快速调整工作流程，在极短的时间内合成大量多肽。此外，在符合 cGMP标准的前提下，它能够灵活调整多肽序列和生产规模，彻底颠覆了传统的生产管理模式，为多肽药物的快速工艺和生产开发提供了一种全新的解决方案。Liberty PRO&trade 不受特定多肽序列的限制，显著缩短了多肽药物的生产周期。这一突破使得原本可能需要一到两个月完成的固相多肽合成工作，如今仅需一两天便可完成生产。此外，Liberty PRO&trade 还改变了传统的多肽合成思想观念，其高机动性的生产方式和管理方式，实现了生产的灵活性、经济性，化整为零，降低了风险。它的高性能、高可靠性、高灵活性，小型化、标准化和模块化，使得任何一个单元出现故障，都不会影响整个生产管理。Liberty PRO&trade 单元化组合的合成模块，彻底颠覆了传统多合成生产线生产方式，使得合成生产更经济、更灵活。而且，CDMO企业可以随时根据订单多肽序列的不同，和产量的不同，随时改变生产流程和重新配置。这标志着现代CDMO企业采用了前沿的多肽合成技术，从而构建了全新的cGMP生产管理模式。总的来说，Liberty PRO&trade 彻底解决了CDMO企业所面临的小规模多样性多肽合成和大规模单一性多肽合成产能的配置矛盾。突破了原来令人望而生畏，难以想象的，不敢企及的高难度多肽合成的生产格局，克服了难以想象的技术困难和生产管理的障碍。Liberty PRO&trade 改变传统的多肽合成的概念，提供从小规模微波多肽合成到大规模微波多肽合成的cGMP生产无缝转换，从而让更多的CDMO企业能够轻而易举的生产合成高纯度高质量的长链多肽。能够更容易的进入到多肽原料药的cGMP生产行业。这个改变给广大的 CDMO 和药厂带来了无限的商机和可能性。
    时间： 2024-03-12
    作者： 培安公司
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