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一、HLA配型器官移杆的供、受者之间组织相容性程度越高,器官存活的机率就越大。因此,在器官移植前,慎重选择供者是至关重要的。一般供者的ABO血型必需与受者一致,这是比较容易做的。此外,供者的HLA组织型别也应尽可能与受者相近。在HLA各座中,DR座最为重要,其他座配型不同,通过免疫抑制可控制其排斥强度,而DR座配型不同,则器官存活率明显降低。一般有亲缘关系供、受者之间HLA型别相近的机会大得多。HLA配型一般是鉴定供、受者的HLA表现型,即检查HLA抗原。近年来,随着分子生物学的发展,HLA的DNA定型法也已发展起来。二、免疫抑制采取免疫抑制措施可以有效地抑制植排斥的发生。(一)免疫抑制药物免疫抑制药物的应用,促进了人体器官移植的发展。60年代,由于硫唑嘌呤的问世,使器官移植存活率有了很大的提高。这个时期,硫唑嘌呤、皮质激素以及抗人胸腺细胞球蛋白的应用,使肾、肝、心移植都能在临床开展起来,并取得了部分成功。70年代末,由于新一代高效免疫抑制剂环孢素A(GsA)的出现,使各种器官移植有了突破性的进展。CsA不但具有更强的免疫抑制作用,而且可以相对选择性地作用于T细胞。因此,从1978年以后,CsA已广泛应用于临床器官移植。GsA与其它免疫抑制药物联合应用,可以提高作用效果,且可以减少GsA的用量,减少毒副作用。近年来,临床采用GsA与强的松二联疗法,和用GsA与强的松和硫唑嘌伶的三联疗法,以及CsA与强的松、硫唑嘌呤和抗人胸腺细胞球蛋白和四联疗法,都取得了很好的效果。80年代初期发现的另一种真菌代谢产物FK-506,具有比CsA更强的免疫抑制作用和相同的靶细胞选择性。目前,FK-506已应用于临床肾、肝、心以及心肺移植中,并发现与CaA合用效果更佳。(二)抗胸腺细胞球蛋白和抗T细胞单克隆抗体抗胸腺细胞球蛋白抗T细胞单克隆抗原可与T细胞结合,通过活化补体去除T细胞。抗CD3单抗还可以阻止T细胞识别移植抗原,防止移植排斥的发生。这二种抗体在临床上已得到广泛应用。(三)输血效应由于担心受者被HLA抗原及其他抗原致敏,发生超急排斥,所以多年来曾禁止给移植受者输血。后来发现,移植前接受输血的病人,肾移植存活时间可明显延长。80年代,进一步的临床实验研究证明了这种观察结果。此后,在许多移植中心都采取了预输血的方案。输血的这种作用的机制还不是很清楚,一般认为可能是:①输血可活化TS细胞;②输血可产生封闭抗体;③输血可产生抗T细胞的独特型抗体,阴断T细胞识别抗原。确切机制尚有待进一步阐明。三、移植耐受的诱导由于免疫抑制药物本身的毒性,以及应用免疫抑制药物后患者免疫功能长期低下,容易导致感染,所以长期使用免疫抑制剂来防止称植排斥会产生许多严重的副作用。解决移植排斥的根本方法,是诱导供、受体间的免疫耐受。因此,如何诱导成年个体间的免疫耐受具有重要的实际意义。近年来,移植耐受的研究已取得了许多重要的进展,主要有以下几种诱导耐受的方法。(一)用照射的方法诱导耐受1. 全淋巴照射(TLI)小鼠经全淋巴照射后输入大量异基因骨髓,可形成不同程度的嵌合体。由于异基因骨髓在受体内分化、发育,并经过胸腺的选择,可以导致耐受的产生。所以嵌合体的水平越高,移植物存活时间越长。这种模式已应用于临床肾移植,可减少免疫制剂的用量。在某些研究中,诱导免疫耐受后,甚至在完全撤除免疫抑制剂后,机体对供体的MLR和细胞毒作用仍十分低下,移植物不被排斥。2. 紫外线照射用紫外线照射小鼠,同时在照射部位涂布抗原,可以灭活朗格罕细胞的抗原呈递功能,使其对相应抗原的细胞免疫反应下降;胰岛移植前,将供体的血液用紫外线照射后输给受体,可诱志免疫耐受,使以后植入的胰岛长期存活;异基因骨髓移植前经紫外线照射也可以降低GVHR。紫外线照射除对APC的作用外,可诱导TS细胞活性,抑制免疫应答。(二)药物诱导耐受1. 环磷酰胺(CY)诱导耐受 从静脉注射供体脾细胞,48小时后腹腔注射CY的方法,可诱导H-2不同的受体小鼠产生不完全耐受。其表现为对供体细胞的特异性免疫应答降低,MLR和CTL活性明显抑制,DTH反应也明显降低,并可接受供体来源的肿瘤细胞不被排斥,但对供体的皮肤移植物仍会排斥,只是排斥期延长,在H-2相同,而只有次要组织相容性抗原不同的品系间,这种方法则可诱导完全耐受。在上述模型基础上,将骨髓细胞和脾细胞的耐受原,再合并用CY和胸腺细胞血清,则可在H-2完全不同的品系小鼠间诱导完全的移植耐受。表现为耐受小鼠对供体鼠各种同种异型的特异反应消失,移植的皮肤可以长期存活不受排斥。这类耐受产生的主要机制是克隆排除。2. 环孢素A(CyA)诱导的耐受 对家兔的肾移植研究发现,短期应用CsA并进行肾移植后6个月,无关第三者的皮肤可被迅速排斥,而来自肾移植供者的皮肤可以稳定植活。狗和猴肾移植中也获得相似的结果。CsA诱导的耐受大多为诱导Ts细胞。(三)抗体诱导耐受温表1. 抗淋巴细胞血清(ALS)诱导耐受 注射ALS的小鼠,在皮肤移植后1周,静脉输注供体来源的骨髓,在受体小鼠体内可检出供体来源的血细胞,也即形成微量骨髓嵌合体。这样,与供体抗原反应的T细胞将在胸腺中被阴性选择去除,形成对供体组织的免疫耐受。表现为同种异型反应性消失,移植供体皮肤下被排斥等。目前,用抗淋巴细胞球蛋(ALG)进行骨髓输入已应用于临床肾移植中。2. 抗T细胞单克隆抗体诱导耐受 抗CD4单克隆抗体被广泛应用于实验性免疫耐受的诱导。用抗CD4单抗处理PCG大鼠,移植组织不相容的PVG?RTIa大鼠的心脏,获得长期存活。停止注射抗体后,CD4+T细胞群逐渐恢复,但供体心脏不被排斥,这时移植新的PVG?RTIa移植物也可长期存活,而移植无关大鼠的心脏,则迅速被排斥。3. 抗独特型(Id)抗体 抗T细胞抗原受体(TCR)的独特型抗体可诱导对移植抗原的耐受,这方面的实验研究已有报道,但人体应用尚未见报道。4. 抗粘附分子的抗体粘附分子是免疫细胞活化所必需的细胞表面分子。近来的研究证明,用抗粘附分子的单克隆抗体可阻断免疫细胞活化,延长移植物的存活,并导致免疫耐受的产生。移植耐受的研究已经取得了许多重要进展。近来研究证明,不但未成熟的T细胞在胸腺内可经程序性死亡途径导致克隆排除,成熟的T细胞也可经此途径导致克隆排除,因此,移植耐受的研究必将对器官排斥的最终解决作出贡献。(龙振洲)
[url=http://www.f-lab.cn/microscopes-system/magnetic-tweezers.html][b]细胞单分子操纵磁镊系统[/b][/url],magnetic tweezers是继激光光镊技术仪器后又一种细胞操纵和细胞力学测量仪器.它采用倒置显微镜和电动平移旋转定位台和PicoTwist磁力细胞操纵捕获技术,组成强大的单分子操纵磁镊仪器。细胞单分子操纵磁镊系统是通过梯度分布的磁场对处于其中的可磁化微粒施力,通过显微镜观察并分析微粒运动过程,这套磁镊可同时对40个细胞分子视频采集和跟踪测量。[b]细胞单分子操纵磁镊系统特点[/b]操作稳定—图像漂移很低分辨率高,测力能力强—适合超薄样品可以同时对40个细胞单分子成像和跟踪测量磁铁来控制 DNA拉伸和超螺旋结构[b]细胞单分子操纵磁镊系统应用[/b]细胞单分子,生物单分子,细胞力学,生物力学等,在单分子水平上对生物分子行为(包括构象变化、相互作用、相互识别等)的实时﹑动态检测以及在此基础上的操纵﹑调控等;对单个生物大分子施以力或力矩,并测量它们的物理性质(如DNA弹性、蛋白质的力学变性等);对单个生物大分子施以力或力矩,测量它们的力学生化反应(如分子马达);研究机械力的作用如何影响细胞的生长、分裂、运动、粘附以及信号的传输,基因的表达;在生物大分子上施加力以使之发生构像上的变化,研究生物单分子形成新的结构,以及力学以及动力学之间的相互联系等。研究各种药物可能导致的DNA、蛋白质凝聚、变性过程;给出分子实时行为与性质的分布,有效避免对集群测量苛刻的同步(synchronization)要求,如DNA的解链(unzipping)、蛋白质的折叠(folding)等。[b][img=细胞单分子操纵磁镊系统]http://www.f-lab.cn/Upload/magnetic-tweezers.jpg[/img][/b]细胞单分子操纵磁镊系统:[url]http://www.f-lab.cn/microscopes-system/magnetic-tweezers.html[/url]
293T/17(人胚肾细胞)293T/17(人胚肾细胞)培养条件:DMEM(PM150210)+10% FBS (164210-500)+1% P/S (PB180120)由衷地感谢您对我们公司的信任与支持! [img=,557,423]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707311556_01_3250905_3.png[/img]注意事项:1、首先,观察细胞培养瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有,请拍照,并及时与技术支持联系(所拍照片将作为后续服务依据)。2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落;先不要打开培养瓶盖,将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时,以便稳定细胞状态。3、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如贴壁特性(贴壁/悬浮)、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。4、静置完成后,取出细胞培养瓶,镜检、拍照,记录细胞状态(所拍照片将作为后续服务依据);建议细胞传代培养后,定期拍照、记录细胞生长状态。5、贴壁细胞:若细胞生长密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,移除细胞培养瓶内培养基,预留5ml左右继续培养,直至细胞密度达80%左右再进行传代操作,瓶盖可稍微拧松。6、悬浮细胞:将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内,1200rpm离心5min,离心后上清培养基可收集备用,管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时,若细胞密度超过80%,可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养,补加培养基至5ml;若细胞密度未超过80%,将细胞悬液移至原瓶继续培养,直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。 [img=,557,425]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707311556_02_3250905_3.png[/img]温馨提醒:1、可将培养瓶内多余的培养基转移至50ml无菌离心管中,备用;细胞首次传代时,可以将该培养基按照一定比例和客户自备的培养基混合使用,让细胞逐渐适应培养条件。2、确认细胞状态良好后,应及时将部分细胞冻存,再进行后续的实验,避免后期实验失误可能发生细胞污染或死亡而导致的细胞丢失,影响后续实验。3、建议客户收到细胞后前3天,100X、200X、400X各拍3张细胞照片,记录细胞状态,便于后续和技术支持沟通交流。 更多咨询中国微生物菌种查询网 网址:www.biobw.org