菌落总数标准

本产品基于GB 4789.2-2022研发制成。菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1 mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是最常用的微生物检测项目。MicroPaper菌落总数测试片为预制好的即用型培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和显色剂，菌落在测试片上呈红色，可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于各类食品、食品原料及生产环境中菌落总数的测定。执行标准：符合GB 4789.28-2016中平板计数琼脂培养基质量控制要求，且主要营养成分与平板计数琼脂培养基配方一致。

五、菌落总数测试片使用说明 1 原理及适用范围：菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是最常用的检测项目指标。菌落总数测试片（Aerobic Count Plates BB202）是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂——氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在测试片上呈紫红色或粉红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于食品及水中菌落总数的测定，也可用于与食品接触的容器操作台和其他设备表面的卫生检测。2 样品处理与稀释2.1 生活饮用水：取充分混匀的水样（原液）检测。2.2 水源水：以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，混匀成1:10稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇后成为1:100的稀释液，以此类推，做出1:1000等稀释度的稀释液，每次换一支吸管。2.3 食品：取样品 25 mL（g）放入含有225 mL灭菌生理盐水的取样罐或均质杯内，充分混匀成1:10稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇后成为1:100的稀释液，以此类推，做出1:1000等稀释度的稀释液，每次换一支吸管。3 接种：将菌落总数测试片（BB202）置于实验台面，揭开上层膜准备接种。生活饮用水、纯水和矿泉水取原液，每个样品做两片；水源水以及食品选择2～3个稀释度进行检测，每个稀释度同时应做一平行接种。以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL混匀的样品液，慢慢均匀地滴加到测试片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置5 min使培养基凝固，最后用手轻轻地压一下。每次检测，同时将1mL灭菌生理盐水滴加到另一片测试片上作为空白对照。4 培养： 将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h观察结果。5 结果判读: 细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（10～100个）的测试片进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（克）样品中所含的细菌菌落总数。作菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各测试片菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时用。6 计数原则及报告方式6.1通常选择菌落在10～100个之间的测试片进行计数，乘以稀释倍数报告之（见表1实例1）。6.2若有两个稀释度的菌落数在10～100个之内，两者的比值小于2，则取其平均数，若大于2，则用值小者（见表1实例2、例3）。6.3若三个稀释度的菌落数都有在10～100个之内，应选择二个低数值的平均数（见表1实例4）。6.4若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时，应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数；或采用均小于数量标准的最小值，或采用均大于数量标准的最大值（见表1实例5、例6）。6.5若所有稀释度的测试片均无生长，以未检出报告之。菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采样两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。表1 稀释度选择及菌落总数报告方式实例稀释度两稀释度之比选定计数稀释度报告方式（个/g或个/mL）10-110-210-3123456158208265988295766882505174 51250151106—1.86.1———10-210-2、10-310-210-1、10-210-110-37.6×1039.4×103 8.2×1033.0×1038.0×101.1×1057 表面取样方法：加1mL灭菌生理盐水在测试片上，静置至少1h使培养基凝固；提起上层膜，使中央滤纸部分贴到待测物表面，用手在外侧轻压；然后将上盖膜合上，置培养箱内培养。

菌落总数测试片检测方法方法编号：5011 1 适用范围：可用于各类食品及原料中菌落总数的测定。也可用于与食品接触的容器、操作台和其他设备表面的卫生检测。2 方法原理：将营养培养基、凝胶和氯化三苯基四氮唑（TTC）显色剂等加载在试纸片，经加样、培养后，细菌菌落在测试片上显现出红色菌斑，通过计数报告结果。3 操作方法 3.1样品处理：无菌称取样品25g（或25mL）放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内，经充分振摇（均质）做成1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，用1mL灭菌吸管反复吸吹制成1:100的稀释液。以此类推，做出1:1000等稀释度的稀释液，每个稀释度更换一支灭菌吸管。3.2接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如食用纯水和矿泉水等）可直接用原液检测。将测试片放在水平台面上，揭开上面的透明薄膜，用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL，均匀加到中央的纸片上，轻轻将上盖膜放下，静置5 min使培养基凝固，最后用手轻轻地压一下。每个稀释度接种两片。3.3培 养： 将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。4 结果判断与计数：4.1细菌在纸片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（10个～100个）的纸片进行计数，乘以稀释倍数后即为每克（或毫升）样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时，按实有数报告。大于100时，用二位有效数字，二位有效数字后面的数字，以四舍五入方法计算，并以10的指数来表示。4.2计数原则与报告方式4.2.1 通常选择菌落在10个～100个之间的纸片进行计数，乘以稀释倍数报告之（见下表中例次1）。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL，cfu的含义为菌落形成单位。4.2.2 若有两个稀释度的菌落数在10个～100个之内，两者的比值小于2，则取其平均数，若大于2，则采用稀释度小者报告（见下表中例次2和例次3）。4.2.3 若三个稀释度的菌落数都有在10个～100个之内时，应选择二个低数值的平均数（见下表中例次4）。4.2.4 若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时，应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数；或采用均小于数量标准的最小值，或采用均大于数量标准的最大值（见下表中例次5和例次6）。例次 稀释度两稀释度之比选定计数稀释度报告方式（个/g或个/mL）10-110-210-3123456158208265988295766882505174 51250151106—1.86.1———10-210-2、10-310-210-1、10-210-110-37.6×1039.4×1038.2×1033.0×1038.0×101.1×105 5 表面取样方法：加1mL灭菌生理盐水在测试片上，静置至少1h使培养基凝固；提起上层膜，使中央滤纸部分贴到待测物表面，用手在外侧轻压；然后将上盖膜合上，置培养箱内培养。6 注意事项：使用过的纸片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。