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最近在做一些多肽类药物的生物分析,用的是液质联用,AB的4000,但是感觉方法总是不成熟,保留时间总是在漂,内标也不稳定,方法很难重现,样品前处理用的是固相萃取,有没有做过类似多肽化合物的朋友给点建议,怎样的色谱条件比较适合多肽类的检测和分析?
[font=宋体][size=10.5000pt]常见的多肽类药物种类[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]多肽药物是一种可以用于疾病的预防、治疗和诊断的多肽类生物药物,其制备方法主要有化学多肽合成、分离纯化法和基因工程法等,其中化学多肽合成是多肽药物的主要制备方式。虽然多肽类药物可以通过从生物体内分离纯化获得,但是天然存在的多肽分子含量少,无法完全满足临床应用的需求。化学多肽合成方法是通过氨基酸逐步缩合的化学反应来实现,一般是从羧基端向氨基端,重复逐个添加氨基酸的过程。【[font=宋体]详情请咨询国肽生物[/font]】[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]多肽类药物主要包括多肽疫苗、抗肿瘤多肽、抗病毒多肽、多肽导向药物、细胞因子模拟肽、抗菌性活性肽、诊断用多肽以及其他药用小肽等。多肽药物与一般的有机小分子药物相比,具有生物活性强、用药剂量小、毒副作用低和疗效显著等突出特点,然而其半衰期一般较短、不稳定,在体内容易被快速降解。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]与蛋白类大分子药物相比,除了多肽疫苗外,多肽类药物免疫原性相对较小,用药剂量少,单位活性更高,易于合成、改造和优化,产品纯度高,质量可控,能够迅速确定药用价值。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]1[font=宋体]、多肽疫苗[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]多肽疫苗是按照病原体抗原基因中已知或预测的某段抗原表位的氨基酸序列,通过化学多肽合成技术制备的疫苗。多肽疫苗是目前疫苗研究的重要方向,已经针对了艾滋病病毒和丙肝病毒的多肽疫苗进行了研发。传统疫苗一般由两种方式制备,一种为能诱发免疫力却不致病的减毒疫苗,例如黄热病、脊髓灰质炎和麻疹疫苗或卡介苗;另一种为灭活疫苗,例如百日咳杆菌、狂犬病毒、伤寒杆菌。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]多肽疫苗由于完全是合成的,不存在毒力回升或灭活不全的问题。特别是一些还不能通过体外培养方式获得足够量的抗原的微生物病原体。有些虽能进行体外培养,但这些病原体有潜在致病性和免疫病理作用等涉及安全性与有效性的问题。多肽作为体内引起效应细胞免疫应答形成的免疫原,将成为一种新型的疫苗。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]2[font=宋体]、抗肿瘤多肽[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]多肽类药物凭借其靶向性、安全性、特异性,使其在抗肿瘤药物的研制中受到关注,不同的多肽药物具有多种不同的作用机制。其可抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡达到直接抗肿瘤作用,也可以通过增强和激发机体对肿瘤细胞的免疫应答、抑制肿瘤血管生成等达到间接的抗肿瘤作用。而且其作用机制的多样性和特异性,也可以实现多肽改造和融合,实现多肽的高效、靶向、特异的抗肿瘤作用。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]3[font=宋体]、多肽导向药物[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]将具有结合能力的多肽与细胞毒素或细胞因子等进行融合,将其导向至病变部位,发[/font] [font=宋体]挥治疗作用,同时减少毒副反应。已知很多毒素(如绿脓杆菌外毒素),细胞因子(如白细胞介素系列)等有较强的肿瘤细胞毒性,但在人类长期或大量使用量时也可损伤正常细胞。将能和肿瘤细胞特异结合的多肽与这些活性因子进行融合,则可将这些活性因子特异性地集中在肿瘤部位,可大大降低毒素、细胞因子的使用浓度,降低其副作用。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]4[font=宋体]、细胞因子模拟肽[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][font=宋体]指从肽库中筛选获得能够与细胞因子受体特异性结合,同时具有细胞因子活性的多肽。这些模拟肽的序列一般与细胞因子的氨基酸序列不同。能刺激造血的细胞因子如红细胞生成素[/font](EPO)[font=宋体]和血小板生成素[/font][font=Calibri](TPO)[/font][font=宋体]等通过与其受体的特异性结合来调控造血细胞的自我更新、增殖、分化、成熟及程序性死亡。近年来利用噬菌体展示文库等技术业已筛选出类似于细胞因子活性的模拟肽类和非肽类小分子,经体外和动物试验证实它们具有类似于细胞因子的刺激造血生物学功能。这为进一步探讨细胞因子的作用机制、筛选出理想的模拟其它细胞因子功能的小分子肽[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]非肽类药物奠定了坚实基础。[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]5[font=宋体]、抗菌性活性肽[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]从昆虫、动物体内筛选获得的具有抗菌活性的多肽分子,目前已经筛选获得上百种。抗菌肽具有抗菌谱广、热稳定性强、分子量小及免疫原性小等特点,其杀菌机制独特,病原菌不易产生耐药性,有望开发成新一代肽类抗生素。但部分抗菌肽具有空间结构不稳定、溶血活性等特点,限制了临床应用。因此设计或改造天然抗菌肽,提高抗菌活性的基础上消除其溶血活性,促进抗菌肽在医药上的应用,有望开发成新型抗菌药物,为解决病原菌对传统抗生素日益增强的耐药性问题提供新的途径。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]6[font=宋体]、诊断用多肽[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]通过从致病体或肽库中筛选获得的多肽,用作诊断试剂,检测体内是否存在病原微生物、寄生虫等的抗体。包括对肝炎病毒、艾滋病病毒、类风湿疾病等抗体的检测。多肽在诊断试剂中最主要的用途是用作抗原检测病毒、细胞、支原体、螺旋体等微生物和囊虫、锥虫等寄生虫的抗体。多肽抗原比天然微生物或寄生虫蛋白抗原的特异性强,且易于制备,因此装配的检测试剂,其检测抗体的假阴性率和本底反应都很低,易于临床应用。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]常见的多肽类药物种类主要有以上几种,目前来自动物组织提取的多肽药物将逐步被淘汰,化学多肽合成和基因重组方式将在很长一段时间内成为互为补充的多肽药物生产方式。在化学多肽合成类药物快速成长之际,基因重组表达制备多肽药物也引起业内关注。与化学多肽合成相比,基因重组方式更适于长肽的制备;而且随着技术的进步,以基因重组方式生产多肽药物的成本也在不断降低。[/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt][img=,690,177]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007021610504262_3029_3531468_3.jpg!w690x177.jpg[/img][/size][/font][font=宋体][size=10.5000pt]国肽生物主要提供:多肽合成、多肽定制、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽(Cy3、Cy5、Fitc、AMC等)、目录肽、偶联蛋白(KLH、BSA、OVA等)、美容肽、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。详情请咨询国肽生物[/size][/font]
在重组药物领域,多肽类药物由于其毒性低,特异性高,分子量小等自身独特的优势,其成为患者的最佳选择。另外,随着制造工艺和给药系统的改进,多肽类药物从上世纪70 年代诺华的Lypressin(赖氨加压素)上市起,已经取得了迅猛发展。据全球肽治疗基金会的报告显示,在过去的几十年,进入临床开发的多肽类药物数量不断增加,上世纪90 年代年均为9.7 种,2000~2008 年间增加到16.8种。2000~2008 年间,进入临床研究的多肽最常见适应症是癌症和代谢性疾病(包括糖尿病和肥胖症),分别占18%和17%。而治疗过敏、免疫功能紊乱和心血管疾病的多肽类药物研究有所下降。而据生命科学产业的首席战略与管理咨询公司Bionest Partners 预计,全球多肽类药物市场将会从2003 年的53 亿美元增长到2013 年的115 亿美元,复合年均增长率(CAGR)为8.1%。在全球医药市场上,数种多肽类药物已经取得了商业上的成功,其销量已经达到或者接近“重磅炸弹”级药物的销售水平。新贵 1:醋酸格拉替雷以色列梯瓦制药公司的拳头产品 Copaxone(醋酸格拉替雷)是一种人工合成的肽类制剂,由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和赖氨酸四种氨基酸组成。Copaxone于1996 年获美国FDA 核准用于治疗多发性硬化症。在具有较多多发性硬化症患者的西方国家中,Copaxone 的疗效与耐受性皆获得十足的肯定。目前国内暂无企业申报格拉替雷或进口。2011 年Copaxone 全球销售额达到36 亿美元。据悉2012 年一季度,该药物创下了9.09 亿美元的销售额。6 月,梯瓦制药公司在发布的年度经济预测中表示,该药物2012 年或将为公司带来高达38 亿美元的收入。不过Copaxone 可观的收益也引来仿制药公司的挑战。近日,梯瓦制药公司宣布,此前公司同包括Momenta 生物制药公司、诺华制药公司山德士分公司、迈兰制药公司以及Natco 生物制药公司数家制药公司之间就Copaxone 的专利权展开了一场法律诉讼案件,日前美国纽约州法院表示梯瓦制药公司胜诉。梯瓦制药公司对于该药物的市场独家销售权有效期将会延至2014年。新贵 2:醋酸亮丙瑞林雅培的 Lupron(醋酸亮丙瑞林),是一种自然产生的促性腺激素释放激素GnRH 或促黄体生成释放激素(LH-RH)的合成九肽类似物。Lupron 适应症较广,包括子宫内膜异位症;伴有月经过多、下腹痛、腰痛及贫血等的子宫肌瘤;绝经前乳腺癌,且雌激素受体阳性患者;前列腺癌;中枢性性早熟症。2011 年,雅培的Lupron 在全球的销售额达到8.1 亿美元。在中国市场,武田药品工业株式会社2000 年起进口销售。2009 年,北京博恩特药业有限公司和上海丽珠制药有限公司上市国产醋酸亮丙瑞林。近两年,国内16 个重点城市样本医院醋酸亮丙瑞林用药快速增长,增长率保持在50%左右,2011 年就达到5730 万元。国内醋酸亮丙瑞林市场份额中,武田药品工业株式会社占据着86.73的市场份额。新贵 3:醋酸戈舍瑞林阿斯利康的诺雷得(醋酸戈舍瑞林)是一种注射用的促黄体生成素释放激素类似物。用于晚期前列腺癌的姑息治疗;以及绝经前及围绝经期晚期乳腺癌、子宫内膜异位和子宫纤维瘤的治疗。2011 年阿斯利康的诺雷得全球销售额达到11 亿美元。在中国市场,前英国捷利康公司从1999 年进行进口销售,阿斯特拉公司和捷利康公司合并为阿斯利康后,继续由阿斯利康进口销售。2007~2011 年,国内16 个重点城市样本医院醋酸戈舍瑞林用药保持着高速增长,虽然2010 年略有放缓,但增长率仍维持在30%以上,2011 年国内16 个重点城市样本医院醋酸戈舍瑞林用药更是达到1.9亿元人民币。