凯杰核酸提取仪原理

核酸提取(核酸的分离与纯化)主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开,但在分离核酸时,应保证核酸分子一级结构的完整性,并排除其他分子污染。核酸提取方法一般包括细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤,而每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。操作过程中首先通过物理、化学或酶解作用裂解细胞,使核酸释放出来,并去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂肪类等生物大分子的过程。在此基础上,沉淀核酸、去除盐类和有机试剂等杂质,从而得到纯化的核酸。核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器。在传统的手工核酸提取过程中通常采用离心澄清的方法，操作时费时费力。近年来,出现了磁珠分离技术，利用磁珠在一定条件下对核酸具有很强亲和力的特点，吸附核酸。当条件改变时，磁珠又可以与其吸附的核酸分离,从而得到纯化的核酸。这种方法简便、高效、易于操作，是目前核酸提取仪采用的主要方法。具体来说，磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后，再在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，回收颗粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂，操作简单，符合核酸自动化提取要求，是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。

问题描述：核酸提取方式主要有哪些？有何差异？解答：[align=left][font=宋体][color=black]目前主流的核酸提取方法有煮沸裂解法、苯酚氯仿抽提法、离心柱法、磁珠法，接下来介绍这几个方法的原理、优劣势及适用场景。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]1[/color][/font][font=宋体][color=black]）煮沸裂解法：原理是通过加热使细胞膜破裂，充分暴露核酸，核酸可溶解于上层水溶液中，通过高速离心沉淀变性蛋白质和细胞碎片，上清液即为核酸粗提液。此方法的操作相对简单，成本低，但由于是粗提，成分比较复杂，有时可能带来一定的体系干扰或者裂解不充分的情况，一般用于细菌定性鉴定时使用。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]2[/color][/font][font=宋体][color=black]）苯酚氯仿抽提法：原理是苯酚和氯仿抽提除去蛋白和多糖类杂质，获得相对较为纯净的基因组核酸。成本比较低廉。缺点是试剂毒性较大，长时间操作对人员健康有较大影响。试剂需要自行配制，批次间差异显著。提取效率相对较低，不适宜少量或者微量操作。一般用于大量核酸样本的抽提。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]3[/color][/font][font=宋体][color=black]）离心柱法：原理是利用裂解液促使细胞破碎，使细胞中的核酸释放出来，利用柱子中的载体吸附提纯核酸。它的优点是比传统的酚氯法提取纯度高、毒性低，有利于[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]RNA[/color][/font][font=宋体][color=black]保护，而且能进行微量操作，价格较低。缺点是不便于高通量、自动化操作，对实验室设备和人员的操作技能要求较高。目前应用广泛，常用于细菌、病毒、动物组织等多种样本的核酸提取[/color][/font][sup][font='Times New Roman','serif'][color=black][13][/color][/font][/sup][font=宋体][color=black]。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]（[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]4[/color][/font][font=宋体][color=black]）磁珠法：与离心柱的操作原理基本相同，利用交换吸附材料吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等细胞中其他物质分离。优点是能够实现自动化、高通量操作，配合核酸自动提取仪使用，操作简单、用时短，核酸纯度高、浓度大，可广泛用应用于血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]DNA[/color][/font][font=宋体][color=black]和[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]RNA[/color][/font][font=宋体][color=black]分离，但超高通量样本同时进行时，可能存在一定的污染风险。[/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》

问题描述：核酸提取中裂解液的使用量为多少合适？解答：[align=left][font=宋体]裂解液的用量原则是确保能彻底裂解样品，同时使裂解体系中核酸的浓度适中。浓度过低，将导致沉淀效率低，影响得率；浓度过高，去除杂质的过程复杂且不彻底，导致纯度下降。另外，裂解液的用量是以样品中蛋白质的含量为基准的，而不是以核酸含量为基准，这一点务必牢记。[/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》