离子交换层析介质

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  • 北京博尔西科技有限公司
    北京博尔西科技有限公司致力于为企业提供诊断试剂原料及科研原料，拥有着动物免疫技术，抗原抗体纯化技术，蛋白纯化处理技术等，欢迎各界朋友指导和业务洽谈。产品包括：重组蛋白（肠激酶、链霉亲和素、蛋白AG等）、血凝试剂原料（兔脑粉、兔脑磷脂、牛凝血酶、组织因子）、多克隆单克隆抗体原料（羊抗鼠IgG、酶标荧光二抗）、血液制品（抗血清、小牛血清、新生牛血清、小鼠血清、红细胞）、填料（真菌素免疫亲和柱、亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等）。
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  • 苏州纳微科技有限公司
    纳微科技（NANO-MICRO）通过提供革命性的色谱层析填料或介质、色谱柱、预装柱及分离纯化技术服务，开创单分散色谱分析和制备的新时代。我们在天然产物、抗生素类、蛋白、多肽类、糖类、核酸、标准品、杂质等分离制备方面拥有广泛的专业技术，为业界提供数千种高质量产品类别，涵盖色谱层析微球填料如硅胶正相、反相、HILIC、手性、聚合物反相、离子交换、疏水、PROTEIN A亲和、金属螯合亲和、硼酸亲和、凝胶渗透(GPC)、固相萃取及特殊功能填料，以及各种规格的分析色谱柱、层析制备预装柱、标准微纳米颗粒、功能磁珠、磁珠母球以及光电微球等产品，还提供分离纯化整体解决方案、分析检测服务以及实验技能培训，拥有规模化生产、供货能力和质量保证，致力于为广大色谱分析制备、制药分离纯化以及光电显示产业提供可持续、高品质及创新性的产品和技术服务。 NANO-MICRO通过ISO9001：2008质量管理体系认证，确保产品的质量、批次间重复性，大规模出口高性能色谱填料到欧美、日本、韩国等国际知名制药和色谱企业，成为中国色谱行业的领军企业之一。
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  • 德兰梅勒(北京)分离技术股份有限公司
    德兰梅勒(北京)分离技术股份有限公司隶属于RIGHTLEDER INTERNATIONAL HOLDING GROUP INC.是一家处于领导地位的高科技创新公司。致力于为功能糖甜味剂行业、食品饮料行业、生物发酵与制药行业、湿法冶金行业及电泳涂装行业提供分离纯化系统与工艺技术。 　 德兰梅勒(北京)分离技术股份有限公司为了向客户提供先进的膜分离设备、电渗析设备、离子交换设备、色谱分离与层析设备和完整的解决方案，针对各个系统成立了研究院，可根据客户对不同工艺的具体需求而研发设计出最优化、最合理、最经济的生产线。 　 公司正不断地成长并在我们的领域中始终保持领先地位。我们不断寻求、吸引和培养一些行业专家并与各高校建立人才培训中心，努力打造一个以一流的技术、专业的团队、科学的管理、优质的服务于一体的高新技术企业。
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  • 默克Fractogel®层析介质 400-622-8982
    Fractogel®介质为基于合成甲基丙烯酸酯的聚合物小球，提供优良的压力稳定性，从而能够采用高流率。视您的应用而定，我们可提供中等大小的M型填料（粒度40-90 µm）和较小的S型填料（粒度20-40 µm）。Fractogel®介质的独特组成，是纯化策略的有力工具。触手是长线形的聚合物链，携带功能配位体。全部触手与Fractogel®介质的羟基以共价键连接。该构型提供了高表面积，使生物分子不受空间位阻，与可及的配位体结合。许多配位体可用于各种层析应用（包括离子交换、亲和、疏水性相互作用和分子筛）。优点：- 更佳的产品收率官能团与目标分子之间的空间位阻最小，更易接触。与常规方法相比，触手介质提供了更高的结合力，特别是对于大型蛋白质、抗体、病毒和质粒。由于目标分子的结合更紧密，使用Fractogel®离子交换介质的捕获步骤，常比其他介质更高效，从而有更大的总收率。- 更安全的产品与基于碳水化合物的介质不同，Fractogel®介质不易为微生物降解。因此，内毒素污染风险大大减少。此外，Fractogel®介质可以多次清洁，也延长了其使用寿命。- 更低的运行费用由于Fractogel®介质的优良化学耐受性，循环次数可以很高。介质寿命极长，更换频率降至最低，从而减少了运行费用。分类：- 用于离子交换层析的Fractogel®介质可以实现从各种来源（例如细胞培养上清液、微生物表达系统、血浆等）中分离天然和重组蛋白质；有效地纯化肽和低分子量物质；DNA、内毒素和HCP，获得优良的对数减少值；安全去除病毒；很适合于有效纯化单克隆抗体。E.g., Fractogel® EMD TMAE, Fractogel® EMD TMAE Hicap, Fractogel® EMD DEAE, Fractogel® EMD SO3, Fractogel® EMD SE Hicap, Fractogel® EMD COO-, etc.- 用于金属螯合亲和层析的Fractogel®介质Fractogel® EMD Chelate选择亚氨基二乙酸作为功能亲和配基，非常适合于金属离子配位作用。金属离子的自由配位点，被用来与各种蛋白质和肽结合。适合于分离重组、组氨酸标签蛋白质；可应用于肽的分离、柱内的在位复性。- Fractogel® EMD BioSEC分子筛填料Fractogel® EMD BioSEC是基于交联聚甲基丙烯酸的分子筛层析填料，机械稳定性强，化学稳定性好，适合生产规模，可应用于精致纯化。更多信息，e.g., 详细参数，填料、预装柱货号信息等，可参见本页面核心参数 – 样本下载中的资料手册。
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    厂商： 默克工艺解决方案
    品牌： Millipore
    型号： Fractogel®
    价格： 面议
  • 默克预装层析柱Chromabolt 400-622-8982
    Chromabolt™ 是一款经过预先验证且预装有默克（Merck Millipore）层析介质的层析柱，可用于早期临床阶段生产。现有3 种尺寸规格可供用户选择——内径（i.d.）10、20 和32 cm，这些预装柱无需人工封装和清洗，大大节省了终端用户宝贵的时间和资源。使用Chromabolt™ 预装柱，可以让您将宝贵的时间用在制造产品上，而不是浪费在封装层析介质上。 优点：1. 消除了费时费力的封装2. 安装时间比传统层析柱更快3. 无需清洁硬件4. 规格齐全，适用于试验工厂应用和小批量生产5. 无需额外的资金投资或备件 了解更多：
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    厂商： 默克工艺解决方案
    品牌： Millipore
    型号： Chromabolt预装层析柱
    价格： 面议
  • 默克Eshmuno®层析填料 400-622-8982
    Eshmuno®采用聚乙烯醚基架，刚性强，‍亲水性好‍，平均粒径为85 µm或50 µm，高流速下背压更低。另，Eshmuno®在触手结构与配基密度上做了相应的优化，使得Eshmuno®系列填料在与目标蛋白的结合过程中，能够更好地克服空间位阻，达到更快速的传质，从而加速生物药剂的制备过程。优点：- 下游加工的生产能力优越- 更高的选择性和HCP去除- 活性触手吸附- 稳健、安全的装柱程序- 切实地节约成本和时间分类：- Eshmuno® A层析填料Eshmuno® A填料含有一种默克专有的配基，源自金黄色葡萄球菌蛋白A的C域，为五聚体形式。在大肠杆菌中，该配基被重组表达。生产过程中，未使用动物源性产品。将该配基固定在Eshmuno®介质（基于聚乙烯醚的硬质、亲水聚合物）上即合成Eshmuno® A蛋白A亲和层析填料。 Eshmuno® A为刚性、高载量、耐酸碱的层析填料，用于含Fc的蛋白质的纯化。与竞品相比，它的优势在于耐酸、耐碱和去除聚集体，有效地去除聚体可以减少含Fc蛋白质纯化工艺中层析之后步骤的负担。- Eshmuno® CMX层析填料Eshmuno® CMX是一种基于Eshmuno®树脂技术的混合模式层析填料，它创新地将弱阳离子交换性能与疏水相互作用结合在一起，为单克隆抗体，融合蛋白和ADC药物的纯化以及低分子量杂质和HCP的分离提供了高选择性。 Eshmuno® CMX填料的优势在于：工艺整合降低成本（通过减少层析步骤和降低缓冲液消耗）；提升纯化性能（更高的回收率，高选择性和出色的载量）；提升用户体验（更宽的操作空间，简化工艺开发过程，基于硬质基架更容易装柱）。- Eshmuno® P层析填料Eshmuno® P填料选用了高度稳定的Eshmuno®基质与特异性的配基相结合的可靠技术，将多糖抗原（A & B）固定到亲水性聚乙烯醚的Eshmuno®基质上。Eshmuno® P anti-A, Eshmuno® P anti-B是两种不同的亲和层析填料，分别用于有效去除anti-A和anti-B凝集素。 Eshmuno® P的优势在于：降低患者风险，提高经济效益，提高产品质量，操作灵活。- Eshmuno® CPX层析填料Eshmuno® CPX填料是强阳离子交换层析填料，采用了可靠的Eshmuno®填料技术。Eshmuno® CPX填料为50 µm粒径圆球基质，配套默克专有的触手技术，下游纯化工艺中在聚集体去除方面表现出色，同时动态载量依旧表现卓越。 Eshmuno® CPX填料的优势在于：优异的抗体单体/聚体分离效率；中间纯化工艺的高分辨率；优异的动态载量表现；满足高通量纯化需求；硬性基质，易于装填；卓越的低反压，高流速特性。- Eshmuno® CP-FT层析填料Eshmuno® CP-FT阳离子交换（CEX）填料是为在流穿前沿层析操作模式下有效去除mAb聚集体而特别设计的，与传统的结合/洗脱CEX层析相比，载量提高了10倍。Eshmuno® CP-FT填料有助于提高生产灵活性并简化工艺，从而降低了mAb下游纯化的总成本。 Eshmuno® CP-FT的优势在于：提高性能（流穿模式去除mAb聚集体，效果优越；载量及产品回收率高）；降低成本（填料和缓冲液体积显著减少；层析柱、缓冲罐等更小因而生产占地面积更小）；简化工艺（低盐工艺条件，其后的离子交换步骤之前无需稀释；处理体积显著减少，改善了病毒过滤和超滤处理的经济效益）；提高易用性（硬质基架，高流速，更易装填）- Eshmuno® S层析填料Eshmuno® S填料是Eshmuno®系列离子交换填料的第一个成员。它是强阳离子交换剂，在直接捕获与蛋白A之后步骤中具有高生产能力。与其他阳离子交换剂相比，它显示了优越抗体结合力。而且，Eshmuno® S填料能够采用高得多的流率，而生物分子仍与触手强力结合。 Eshmuno® S的优势在于其对所感兴趣的生物分子的高选择性。Eshmuno® S填料有效地去除HCP，因而选择性比传统层析填料更高。由于Eshmuno® S填料具有优良的压力流动特性，您的下游加工可获得杰出的生产能力（超过40 mg/mLh），为mAb的生产节约客观的制造成本。- Eshmuno® CPS层析填料Eshmuno® CPS阳离子交换填料在高盐条件下，在重组蛋白纯化工艺中具有高动态载量和高分离效率的优点。Eshmuno® CPS填料的耐盐性已被证明可支持直接上样高电导率样品，降低对稀释的需求。直接节约了缓冲液和时间，减少生产所需占地空间，简化生产步骤结合高效纯化，从而可提高整体的生产效率。 Eshmuno® CPS的优势在于：在高电导率水平下具有优异的结合载量；强阳离子交换剂，无疏水集团，便于工艺开发；刚性基质颗粒，支持更高的流速，易于装柱；节约成本和时间，从而提高生产效率。- Eshmuno® HCX层析填料作为最新的创新性Eshmuno®填料系列产品之一，Eshmuno® HCX填料是一款智能型混合模式填料，结合了默克著名的触手（tentacle）结构和全新的亲水聚乙烯醚基质。因此即使在盐浓度高的传统阴阳离子交换，或是流穿模式的应用，Eshmuno® HCX填料都有出色的表现。 Eshmuno® HCX的优势在于：在高盐浓度下更高的载量；产量优越的生产效率；出色的选择性；刚性基质，易于装柱；优异的压力流速性能。- Eshmuno® Q层析填料Eshmuno® Q阴离子交换填料兼具Eshmuno®填料的触手结构与新型亲水聚乙烯醚基质。Eshmuno® Q填料在典型的阴离子交换应用（例如以流穿模式去除杂质，或在血液制品加工时分离血液因子）中，效果杰出。 Eshmuno® Q的优势在于：卓越的生物分子下游工艺产率；高流速，低背压；优异的杂质去除；稳健安全的装柱流程；优秀的化学稳定性 更多信息，e.g., 填料性能，详细参数列表等，可参见本页面核心参数 – 样本下载中的资料手册。
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    厂商： 默克工艺解决方案
    品牌： Millipore
    型号： Eshmuno®
    价格： 面议
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  • 新品发布：耐盐型阴离子交换层析介质TOYOPEARL NH2-750F
    近期，东曹生物科技新推出了一款新型的阴离子交换层析介质TOYOPEARL NH2-750F， 它具有不同于普通阴离子交换填料的高耐盐性和选择性，即使在0.15 mol/L的NaCl甚至更高盐浓度的缓冲液中仍然能够保持较高的吸附载量。 产品特点及优势 NaCl浓度超过0.15 mol/L下仍然可以吸附蛋白样品。 酸性蛋白在低于等电点的酸性条件下依然能被吸附。 样品原液可以直接上样，无需稀释 该款填料可以使用线性梯度或者穿透模式来去除抗体中的多聚体。 具有100 nm的孔径，适合IgG和生物大分子样品的纯化 产品介绍手册请点击下载：http://www.instrument.com.cn/netshow/SH101626/down_330056.htm
    时间： 2014-07-07
    作者： 东曹TOSOH
  • 浅谈令人“爱恨交加”的Protein A亲和层析介质（上）
    下游工艺先进性决定了药品的质量抗体药物生产是个非常复杂的过程，大致分为上游的发酵及下游的分离纯化：上游工艺主要包括细胞复苏、传代、发酵生产。而下游工艺主要包括膜过滤及多步层析分离纯化。过去十多年来，基因工程获得突飞猛进的进步，细胞培养的表达量从原来的不到0.5 g/L 到现在普遍达到5g/L，有的甚至超过10g/L。这些进步是由细胞表达载体的开发，克隆筛选以及细胞培养基优化等技术创新所驱动的。由于发酵产率的大幅度提升，使得上游细胞培养成本大幅度降低，下表是抗体生产成本与表达量的关系。表1.表达量与抗体生产成本关系Titer（g/L）Annualproduction（1000kg）DisposableMaterial物料成本（$/g）Cell Culture PurificationFacilitiesc厂房/设备/人工FormulationCost（$/Vial）Total Cost（$/Vial）100 mg 1 g0.51204100422 134244425413 435102410412 26与上游十多倍生产效率提升相比，下游分离纯化技术进步明显滞后，导致下游工序成为生产瓶颈，抗体主要生产成本也转移到下游。下游工艺在整个生物制药生产中占据60%以上生产成本，也被认为是最需要改进的技术领域。下游工艺先进性决定了药品的质量，及药品生产效率和成本，也成为生物制药企业的核心竞争力所在。由于生物分子由于结构复杂，对外部条件敏感，稳定性差，杂质多，浓度低等特点，且监管部门对生物药的纯度和质量要求越来越高。因此下游的分离纯化成为生物制药的瓶颈，也是生物制药成本最大的一块。层析技术由于具有分离纯化效率高，条件温和且容易保持目标分子的生物活性，因此层析是生物制药分离纯化最主要方法。层析介质的“皇冠之珠”——令人爱恨交加的Protein A生物大分子的层析方法主要分为亲和，离子交换，疏水作用及体积排阻。亲和层析是利用介质上的配基与目标蛋白分子有特异性结合，而对其它的蛋白质及杂质不吸附，因此杂质从层析柱中流出，被吸附的目标生物分子通过改变洗脱液的条件使被分离物质与配基解吸附，即可达到分离纯化的目的。亲和层析无疑是最理想的层析分离方法，其与其它分离方法如离子交换、疏水、体积排阻等最大的不同是由于亲和层析只与目标生物分子发生专一性吸附，其它杂质都不吸附，因此亲和层析分离纯化的工艺条件与杂质的组成及含量多少关系不大，从而大大简化亲和分离工艺开发方法，而其它分离方法如离子交换、疏水、体积排阻等都是基于目标分子跟杂质分子之间的大小，电荷及疏水强度的差异来分离的，因此即使分离纯化同样的目标分子，但不同样品的杂质组分不同，含量不同，纯化工艺方法就需要重新调整。Protein A填料由于与大多数抗体有特异性吸附，因此被广泛地用于抗体药物生产过程中，极大地提高了抗体的分离纯化效率，毫无疑问Protein A 亲和介质是层析介质的皇冠上的明珠，其价格也是普通层析介质的十几倍。Protein A 亲和层析介质之所以会成为层析介质的贵族与它对抗体有特异性吸附有关。Protein A 亲和层析是利用Protein A 配基与目标抗体具有专一亲和吸附作用从而达到分离纯化抗体的目的。因为配基与目标抗体的作用的专一性，其分离纯化与目标样品抗体纯度无关，也与样品杂质含量和种类多少无关，使用Protein A 填料一步纯化目标抗体就可以达到95%纯度以上，回收率达到90%以上。Protein A 层析介质的出现，让抗体的分离纯化步骤及方法大大简化，使得抗体的分离纯化比其结构简单多的生物分子都要简单。抗体分离纯化基本都是标准化的三步曲，第一步用Protein A进行抗体捕获，第二步用阳离子去除多聚体，第三步用阴离子精纯去除剩余少量杂质。Protein A亲和层析已经成为平台化技术，被广泛应用在抗体类分子捕获阶段。Protein A与抗体分子之间可特异性结合，特别对IgG1、IgG2、IgG4有较强亲和作用，使得抗体分子与发酵液中不具FC端结构的杂质如宿主蛋白与核酸等有效分离，进而达到纯化目的。亲和特异性赋予了Protein A填料捕获时可接受更宽泛的样品条件，如pH及电导率等。因此，发酵液通过离心、深层过滤后即可直接进行亲和捕获。另外与离子交换、疏水层析等方法相比，Protein A亲和层析纯化抗体料液可以获得更大的纯度，一步就可以获得抗体纯度大于98%，而且在回收率上也有明显优势，亲和捕获回收率可达95%。抗体工作者对Protein A 是爱恨交加，爱的是Protein A 亲和层析的出现大大简化抗体的分离纯化工艺开发,并大幅度提高抗体纯化效率和纯度，而且几乎适用于所有抗体的分离纯化。恨的是Protein A 亲和介质价格贵，寿命短，占据下游分离纯化成主要本。虽然很多科学家曾经致力于研究新的价廉抗体亲和配基以取代昂贵的Protein A亲和配基，但都没有成功找到一个可以取代Protein A 配基的分子。Protein A亲和层析因其高度特异性及同时具有浓缩的效果成为过去近30年里抗体纯化捕获的金标准。Protein A亲和层析介质贵的主要原因有两方面，一方面是Protein A 蛋白配基成本远比传统的小分子配基昂贵，另一方面，Protein A亲和填料寿命较短也是其成本过高的主要因素。一般离子交换填料使用寿命可高达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次。还有Protein A 介质贵与其一直处于高度垄断的局面也有关系，因此Protein A 亲和层析介质国产化以降低抗体的生产成本是必然的发展趋势。ProteinA结构及作用机制ProteinA蛋白是金黄色葡萄球菌细胞壁锚钉蛋白，其C端为细胞壁结合区域，抗体结合区域包括五个同源区域（E、D、A、B、C，N端顺序）。五个domain的序列同源率65-90%（图1）。图1 重组与天然ProteinA基本性质三维空间上，抗体FC端CH2-CH3区域与ProteinA蛋白B结构域上两条反相平行的α螺旋结构相互结合。抗体与ProteinA结合时，主要依靠的是疏水作用力，其次是氢键和双盐桥作用力。疏水作用主要来自于核心区域组氨酸残基。抗体上高度保守的组氨酸残基与ProteinA上的组氨酸残基发生相互作用。碱性或中性条件下，组氨酸残基不带电荷，其咪唑环的疏水效应的增强促进了FC端与ProteinA的结合。当pH降低至4.5以下时，组氨酸带上正电荷，于是两者产生静电排斥力，抗体从ProteinA上解离。除FC端恒定区域外，可变区VH3也参与了ProteinA结合及洗脱，影响洗脱pH（图2）。图2单抗分子结构 图3 抗体分子与ProteinA作用Protein A来源于金黄色葡萄球菌的一个株系，它含有5个可以和抗体IgG分子Fc段特异性结合的结构域，当其作为亲和配基被偶联到填料基质上后，可特异性地与样品中的抗体分子结合，使其他杂蛋白流穿，借助高效亲和层析仅需一步就可使目标抗体纯度超过95%，此外Protein A也可结合另一些免疫球蛋白，如可用于某些种属IgA、IgM的纯化。由于Protein A亲和层析基于天然存在的生物大分子之间特异性结合为分离机理，这种得天独厚的势使得Protein A亲和层析成为重组蛋白\抗体等分离纯化中的绝佳选择（图3）。下一期，江必旺博士将继续分享Protein A亲和填料的关键考核要素有哪些，敬请持续关注。
    时间： 2021-12-31
    作者： YOLO
  • 离子交换层析 DEAE Tanrose 6FF
    离子交换层析填料广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。主要包括强酸性阳离子交换层析填料、弱酸性阳离子交换层析填料、强碱性阴离子交换层析填料和弱碱性阴离子交换层析填料四种。蛋白质之所以能够在离子交换层析填料上发生吸附是由于其表面带有电荷。蛋白质分子中的带电基团来源有两种：一种来自于特定的氨基酸；另一种是蛋白质在修饰过程中引入的。蛋白质由氨基酸组成。组成蛋白质时，氨基酸的α-氨基和α-羧基形成肽键而不再发生解离。但很多氨基酸的侧链带有可解离基团，其中有的能进行酸性解离而带上负电荷，如天冬氨酸和谷氨酸的侧链羧基、酪氨酸的酚羟基、半胱氨酸的巯基；有的能进行碱性解离而带上正电荷，如赖氨酸的侧链氨基、精氨酸的胍基、组氨酸的咪唑基。此外，在肽链的N末端还有一个游离氨基，C末端还有一个游离羧基，两者都能发生解离反应。这些基团的pK’值与游离氨基酸中的pK’值是不完全相同的，一般来说，它们比游离氨基酸中的pK’值向靠近中性的方向偏移 。此外，侧链可解离基团在蛋白质三级结构中的位置在很大程度上也会影响到pK’值。如果是结合蛋白质，则辅基中可能也含有可解离基团。月旭DEAE Tanrose 6FF是一种弱阴离子交换层析填料，离子交换基团是二乙基氨基乙基。基本参数应用实例
    时间： 2022-04-25
    作者： 月旭
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  • 离子交换层析分离纯化蛋白质原理、介质及具体步骤

    [font=宋体][b]离子交换层析基本原理：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子交换层析法是蛋白纯化的一种方式，通过带电的溶质分子与离子交换层析介质中可交换离子进行交换，从而达到分离纯化的目的。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子交换层析法主要依据电荷间的相互作用，利用带电分子中电荷的微小差异而进行分离，具有较高的分离容量。几乎所有的生物大分子都是极性的，都可使其带电，所以离子交换层析法的应用很广泛。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]离子交换层析的介质：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]有许多离子交换介质都已经商品化，但不存在一种神奇的介质其最适合各种蛋白质的纯化。选择离子交换介质的标准包括应用的特异性需要、样品成分的等电点和分子大小（即目的蛋白和污染物），以及可得到的装备（如泵和柱子）。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]首先需要选择阴离子或阳离子介质，如果目的蛋白的等电点已知，选择阴离子介质且操作的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]高于目的蛋白的[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]，或选择阳离子介质且操作[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]低于目的蛋白的[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]。如果靶蛋白的[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]未知，开始之前最好先测定它。最佳操作[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]可根据经验确定。因为大多数蛋白质的[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]低于[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]，选择阴离子交换和操作[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]为[/font][font=Calibri]8.5[/font][font=宋体]开始是合理的，然后根据估计结果和优化条件。知道蛋白质溶液中污染物[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]和结合特征也是有用的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]离子交换层析应用：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]离子交换层析法是生物纯化中应用最广泛的色谱模式，应用于大多数下游处理平台。在[/font][font=Calibri]IEX[/font][font=宋体]中结合目标蛋白、洗脱柱子和洗脱目标蛋白的典型方案被称为“结合[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]洗脱模式”，经常应用于中间纯化步骤如抗体的下游处理。阴离子交换层析是大多数血浆蛋白纯化平台的组成部分如凝血因子[/font][font=Calibri]VIII[/font][font=宋体]的纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]离子交换层析（[/font][font=Calibri]IEX[/font][font=宋体]）具体操作步骤：[/font][/b][/font][font=宋体]平衡[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]第一步是固定相的平衡。当达到平衡时，所有的固定相带电基团都与可交换的平衡离子结合，如氯或钠。选择起始缓冲液的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]和离子强度，以确保目标蛋白与介质的结合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]上样和清洗[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]第二步的目标是结合目标分子，并清洗出所有未结合的物质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]洗脱[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]随着离子强度的增加，在选定的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值下净电荷最低的蛋白将最先从柱子上洗脱。同样地，在一定[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值下电荷最高的蛋白被保留得最牢固，并且在最后被洗脱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]再生[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]最后用高离子强度的缓冲液进行最后一次清洗，使色谱柱再生，并去除任何仍结合的分子。然后在开始下一次运行之前，色谱柱需要在起始缓冲液中重新平衡。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec][b]离子交换层析蛋白纯化[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec[/font][/font]

  • 【网络会议】：2015年12月21日 14:00 中低压层析填料的选择以及新型离子交换填料的介绍

    【网络会议】：2015年12月21日 14:00 中低压层析填料的选择以及新型离子交换填料的介绍

    【网络会议】：中低压层析填料的选择以及新型离子交换填料的介绍【讲座时间】：2015年12月21日 14:00【主讲人】：明华 博士 东曹（上海）生物科技有限公司 技术中心 层析纯化资深工程师【会议介绍】一、中低压层析填料选择中需要考虑的问题二、耐盐型阴离子交换层析介质Toyopearl NH2-750F三、高载量硫酸盐型阳离子交换层析介质Toyopearl Sulfate=650F-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件：只要您是仪器网注册用户均可报名，通过审核后即可参会。2、报名并参会用户有机会获得100元手机充值卡一张哦~3、报名截止时间：2015年12月21日 13:304、报名参会：http://www.instrument.com.cn/webinar/Meeting/meetingInsidePage/17465、报名及参会咨询：QQ群—171692483 快速报名，请扫描或长按下方二维码！http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/11/201511230949_574710_2507958_3.png

  • 蛋白质纯化方法详解——离子交换层析步骤及作用

    [font=宋体]离子交换层析是一种在生物化学和生物技术领域中广泛使用的分离和纯化技术。它基于离子间的相互作用，特别是离子与固定在层析介质上的带电基团之间的相互作用，从而实现对混合物中不同离子的分离。以下将详细介绍离子交换层析的步骤及其作用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、步骤[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、预处理：在开始离子交换层析之前，通常需要对样品进行预处理，以去除大颗粒杂质和不需要的成分。这通常包括离心、过滤和可能的浓缩步骤。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、选择合适的离子交换剂：离子交换剂是层析过程的核心。根据待分离离子的性质（如电荷、大小和与交换剂的亲和力）选择合适的离子交换剂。常见的离子交换剂包括阳离子交换剂和阴离子交换剂。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、平衡离子交换剂：在将样品加载到离子交换柱之前，需要用适当的平衡溶液（通常是水或盐溶液）冲洗离子交换剂，以去除可能存在的杂质并确保离子交换剂处于最佳状态。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、加载样品：将预处理过的样品加载到离子交换柱上。样品中的离子会与离子交换剂上的带电基团发生相互作用。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、洗脱：用洗脱液（通常是盐溶液，其浓度逐渐增加）将结合的离子从离子交换剂上洗脱下来。这一步骤是离子交换层析中最为关键的一步，因为它决定了不同离子之间的分离效果。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、收集和分析：收集洗脱下来的各个组分，并进行分析，以确定每个组分中包含的离子种类和浓度。常见的分析方法包括电导率测量、紫外[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]可见光谱和质谱等。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体]、后处理：根据需要对收集到的组分进行进一步的处理，如浓缩、脱盐或重新配制等。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]二、作用[/font][/b][font=宋体]离子交换层析在生物化学和生物技术领域有着广泛的应用，主要作用包括：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、分离和纯化蛋白质：离子交换层析可用于从复杂的混合物中分离和纯化蛋白质，这对于后续的生物化学研究和药物开发至关重要。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、去除杂质：离子交换层析能够有效地去除样品中的离子杂质，提高样品的纯度。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、样品制备：在进行其他分析或实验之前，离子交换层析可用于样品的制备和预处理。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、研究蛋白质与离子的相互作用：通过离子交换层析，可以研究蛋白质与不同离子之间的相互作用和亲和力，这对于理解蛋白质的生物学功能和调控机制具有重要意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]三[/font] [font=宋体]、应用领域[/font][/font][/b][font=宋体]离子交换层析法在许多领域得到广泛应用：[/font][font=宋体]●生物制药：用于药物蛋白质的纯化，确保生物制剂的质量和稳定性。[/font][font=宋体]●生物学研究：在分离和纯化特定电荷性质的蛋白质时被广泛使用，尤其在基因表达和蛋白质互作研究中。[/font][font=宋体]●食品工业：用于提取和纯化食品中的蛋白质，改善食品的质地和口感。[/font][font=宋体]●环境监测：可用于从环境样品中分离和检测特定蛋白质，例如水体中的生物标志物。离子交换层析法凭借其良好的选择性和高效性，是生物分离和纯化领域不可或缺的重要工具。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec][b]离子交换层析蛋白纯化[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

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