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毛细管电泳原理及分析策略一、毛细管电泳的基本原理电泳是指电解质中带电粒子在电场力作用下,以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象。高效毛细管电泳(HPCE),是指离子或带电粒子以毛细管为分离室,以高压直流电场为驱动力,依据样品中各组分之间迁移速度和分配行为上的差异而实现分离的液相分离分析技术。由于毛细管内径小,表面积和体积的比值大,易于散热,因此毛细管电泳可以减少焦耳热的产生,这是与传统电泳技术的根本区别。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/05/201205142034_366964_2019107_3.jpgHPCE实际上包含电泳、色谱及其相互交叉的内容,是分析科学中继高效液相色谱之后的又一重大进展,它使得分离分析科学从微升级水平进入到纳升级水平,并使得细胞的分析,乃至单分子的分析成为可能。尤其是对样品珍贵,取样极少的生物大分子,毛细管电泳具有绝对的优势。其突出特点是:(1)所需样品量少;(2)分析速度快,分离效率高,分辨率高,灵敏度高;(3)分离模式多,开发分析方法容易;(4)溶剂用量少,经济、环保;(5)应用范围极广。毛细管电泳技术可用于分离分析多种组分,如核酸/核苷酸、蛋白质/多肽/氨基酸、糖类/糖蛋白、酶、碱氨基酸、微量元素、小的生物活性分子等的快速分析,以及DNA序列分析和DNA合成中产物纯度测定等,还可用于碱性药物分子及其代谢产物、无机及有机离子/有机酸、手性化合物、单细胞分析、药物与细胞的相互作用和病毒的分析。毛细管电泳依分离模式不同,可分为:毛细管区带电泳(CZE)、毛细管胶束电动色谱(MECC/MCKC)、毛细管凝胶电泳(CGE)、毛细管等电聚焦(cIEF)、亲和毛细管电泳(ACE)、毛细管电色谱(CEC)。下面以最常用的毛细管区带电泳(CZE)为例,探讨毛细管电泳原理及分析策略。
之前一直在做的微流控芯片,没有毛细管电泳的经验,因为课题要做片上电泳(说白了就是在芯片的沟道中电泳),所以想先做做普通的毛细管电泳的实验了解一下。可实验室条件不允许,没有毛细管电泳仪(见都没见过,呜呜),只好自己搭建实验平台。我想问一下自己如何搭建毛细管电泳实验平台的想法是否可行?如果可行,需要解决的问题主要是什么? 课题要求,检测方式要是电喷雾离化+质谱。先把自己想到的问题罗列一下吧,(本人毛细管电泳盲,可能问题很BC,勿怪嘿嘿)1)首先想到的就是进样问题,文献中罗列的有电动进样,压力进样(包括重力),扩散进样 我想请问如果要自己搭建,哪一种方式最为方便和可靠?2)还有就是缓冲液的选择,如果我希望电泳后接电喷雾电离,缓冲液用什么好?3)电泳的管子我想就用Polymicro Technologies 的熔融石英毛细管,不知是否可行?这个课题偏仪器,对于毛细管电泳检测对象没有要求,对保留时间重复性要求不高。目前想到的问题就这些,希望和大家多多讨论。谢谢啦
以前没做过毛细管电泳,现在课题需要用毛细管电泳定量分析细胞膜上表达的细胞因子,请问坛子里有没有人做过,能否给予指导,谢谢