时间分辨共聚焦荧光显微系统

Confocal（激光共聚焦显微镜）现在已经司空见惯，甚至是超分辨（SIM等）也是屡见不鲜，今天我们就定性和定量两个方面分析显微成像系统的性能（以分辨率为例），从而更了解系统性能好坏，才能在选择显微镜时做到有的放矢 。[align=center][img=,445,262]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807261504385121_662_3450141_3.png!w445x262.jpg[/img][/align]这次我们主要测试对象为奥林巴斯（Olympus） SpinSR超高转盘共聚焦系统，搭载超分辨模块SpinSR10，配以Photometrics 公司的Prime 95B相机。[b][color=#00af50]一、定性分析[/color][/b]利用共聚焦模块与超分辨模块分别在100倍油镜下扫描，采集成像。样品采用Argolight标准测试片Argo-SIM。此测试片中的图样由激光写入，不仅无光漂白效应，而且常见波段皆可被激发，使用方便。通过标准测试片中的“间距渐变线对”图样可以快速定性评估系统空间分辨率及信噪比。Argolight的Argo-SIM标准片中共有4组间距渐变线对，分别朝向四个方向，用以测试显微镜对不同方向的分辨率。线对间距以0 nm为起点，30 nm为步进递增至390 nm。[align=center] [/align][align=center][img=,390,266]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807261505109514_806_3450141_3.png!w390x266.jpg[/img][/align][align=center]图一：用户在观看“间距渐变线对”图样（激发光488nm ）[/align]实时预览状态下，我们仅用肉眼就可以看出，线对之间有无明显分开，以此大致判定系统的分辨率。线对从下往上数，如从第n根可以分开，则显微镜的分辨率大致为（n-1）*30nm左右。以下图为例：[align=center][img=,690,657]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807261506487351_747_3450141_3.png!w690x657.jpg[/img][/align][align=center]图二 定量分析示意图[/align]但是，人眼判断的精确度有限。对于关注方法学的人，仅仅定性分析已不能满足需求。需要对相关结果定量分析，得出更准确的值。[b][color=#00af50] [/color][color=#00af50]二、定量分析[/color][/b]第二阶段，我们将上述采集到的图像分别送入Argolight测试片配套的图像分析软件Daybook中自动计算出分辨率结果。为了得到更为准确的结果，分析过程中截取图像不同区域，分别计算出其分辨率，平均计算得出最终分辨率数值。[align=center][img=,468,298]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807261508270801_1889_3450141_3.png!w468x298.jpg[/img][/align][align=center]图三 Daybook软件对比度测量计算图[/align][align=center] [/align]分析过程中，Daybook软件首先自动识别图像中的线对，将强度曲线中的峰值和谷值分别进行标定，之后计算不同线对之间峰值和谷值得的光强对比度（见图三）。另外，软件允许用户选择对比度阈值，以此作为分辨率的判定标准。[align=center][img=,545,242]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807261511582801_395_3450141_3.png!w545x242.jpg[/img][/align] [align=center] confocal成像（左） 右：超分辨模块成像（右）[/align][align=center]图四 Argo-SIM测试片中的“间距渐变线对”图样的成像（激发光488 nm）[/align][align=center] [/align][align=center][img=,523,294]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/07/201807261513007694_2665_3450141_3.png!w523x294.jpg[/img][/align][align=center]五 Daybook软件测量结果截图[/align][align=center] 通过此次测试，我们清楚了解该显微镜的实际分辨率，验证了与厂家参数的契合度。同时，有赖于Argolight荧光显微镜测试方案的高效和便捷，整个测试过程耗时不超过30分钟。[/align][align=center]Argolight荧光标准评估片除了测试显微镜分辨率外，还可以测试其它性能如照明均匀度、光强光谱响应度、空间共定位、定位误差等等。可关注后续文章或致电了解更多功能。[/align][align=center]（注）[/align][align=center]1、图片传送压缩问题，图片可能失真。烦请谅解！[/align][align=center]2、测量最终结果涉及其他厂家相关产品，暂决定不公布相关测量准确数值，如需了解结果可咨询相关厂家。我司仅负责提供相关产品测量方案，不负责具体系统的评测。烦请谅解！[/align]

讲座名称：共聚焦光片成像技术——让荧光成像速度更快，光毒性更低，光操作更容易　　主讲老师：易海英　　徕卡显微系统生命科学产品应用专家，2014年毕业于华中科技大学生命科学与技术学院，研究生期间的主要研究方向为力学微环境对肿瘤干细胞及其转移的影响，以及力学信号对胚胎干细胞分化及发育的影响，在激光共聚焦和超高分辨率成像领域积累了丰富经验，参与的文章发表在Nature Communications等杂志期刊上。　　主要内容：2014年，光片荧光显微技术（light-sheet fluorescence microscopy）被《Nature Methods》评选为年度技术（Method of the Year 2014）。光片（light sheet）技术简单来说即使用一薄层光束从侧面激发荧光样品，随后从样本的上部或下部检测所产生的荧光信号，即检测方向与照射方向相垂直。该技术能够以很高的三维分辨率对不同大小的固定样品或活样品进行三维成像，快速地捕捉细胞或亚细胞水平上的动态变化。其高速、低毒性、低漂白等优势使得光片技术在生命科学领域开始流行起来。光片荧光显微技术的概念其实早在一百多年前就已经被提出来了，但此后很长时间都没有什么进展，直到近年来才活跃起来，其中徕卡创造性地以其成熟的激光扫描共聚焦系统为平台，直接搭载上光片系统，得到既可以实现光片成像，又可以进行常规单光子成像，还可以将光片与单光子、多光子联合使用以实现和开创更为丰富多样的可能性的系统——Leica TCS SP8 DLS！光片荧光显微技术在细胞生物学、发育生物学、微生物学、植物学等多个领域都有广泛的应用，本次Webinar将着重介绍徕卡共聚焦光片系统DLS在生物学研究领域的应用。 举行时间：2016-11-17 14:00　　　 报名链接：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2178http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669464_2507958_3.jpg手机扫描二维码，报名参会http://exmail.qq.com/cgi-bin/viewfile?type=signature&picid=ZX0717-9QlCeoL%7EVb5UZDdhPeiRO6f&uin=1407973628

讲座名称：共聚焦光片成像技术——让荧光成像速度更快，光毒性更低，光操作更容易　　主讲老师：易海英　　徕卡显微系统生命科学产品应用专家，2014年毕业于华中科技大学生命科学与技术学院，研究生期间的主要研究方向为力学微环境对肿瘤干细胞及其转移的影响，以及力学信号对胚胎干细胞分化及发育的影响，在激光共聚焦和超高分辨率成像领域积累了丰富经验，参与的文章发表在Nature Communications等杂志期刊上。　　主要内容：2014年，光片荧光显微技术（light-sheet fluorescence microscopy）被《Nature Methods》评选为年度技术（Method of the Year 2014）。光片（light sheet）技术简单来说即使用一薄层光束从侧面激发荧光样品，随后从样本的上部或下部检测所产生的荧光信号，即检测方向与照射方向相垂直。该技术能够以很高的三维分辨率对不同大小的固定样品或活样品进行三维成像，快速地捕捉细胞或亚细胞水平上的动态变化。其高速、低毒性、低漂白等优势使得光片技术在生命科学领域开始流行起来。光片荧光显微技术的概念其实早在一百多年前就已经被提出来了，但此后很长时间都没有什么进展，直到近年来才活跃起来，其中徕卡创造性地以其成熟的激光扫描共聚焦系统为平台，直接搭载上光片系统，得到既可以实现光片成像，又可以进行常规单光子成像，还可以将光片与单光子、多光子联合使用以实现和开创更为丰富多样的可能性的系统——Leica TCS SP8 DLS！光片荧光显微技术在细胞生物学、发育生物学、微生物学、植物学等多个领域都有广泛的应用，本次Webinar将着重介绍徕卡共聚焦光片系统DLS在生物学研究领域的应用。 举行时间：2016-11-17 14:00　　　 报名链接：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2178http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669468_2507958_3.jpg手机扫描二维码，报名参会http://exmail.qq.com/cgi-bin/viewfile?type=signature&picid=ZX0717-9QlCeoL%7EVb5UZDdhPeiRO6f&uin=1407973628