蔬菜中久效磷检测方案(气相色谱仪)

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毛细管柱气相色谱法测定蔬菜中有机磷农药残留量   摘要：本文通过毛细管柱气相色谱法来测定蔬菜中6中有机磷：甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果、二嗪磷的残留量。毛细管色谱柱由于其分离能力强, 分析速度快,适应面广等特点, 已成为多种农药残留分析的最佳选择。该柱在多种有机磷农药分析中分离效果较好。   关键字：气相色谱法；蔬菜；有机磷农药；农药残留量有机磷杀虫剂因具有药效高、作用迅速、残留期短等特点而成为我国使用最广、用量最大的一类农药。在蔬菜的生长过程中，需要使用有机磷农药进行病虫害防治, 因此不可避免地带来不同程度的农药残留，甚至造成食物中毒事故的发生[1]。目前，有机磷农药残留检测技术的研究主要采用进口气相色谱[2-10]，使用国产仪器的报道很少[11]。国家标准方法是使用填充柱气相色谱附火焰光度检测器(FPD)法[12]，存在柱效低、分离效果差、灵敏度低、操作繁琐等问题。而国内测定有机磷农药气相色谱法的有关报道大都存在有机溶剂用量大、前处理繁琐、分析时间长等弊端[13-15]。   本文采用丙酮溶液萃取样品，经净化、浓缩后用NPD同时分析6种有机磷1 材料与方法 1.1  材料 1.1.1 试验地点田间试验于新疆乌鲁木齐市头屯河区三坪农场的室外露天菜地及温室大棚内进行。   1.1.2  试剂二氯甲烷（色谱纯），丙酮(色谱纯)， 氯化钠(AR)，无水硫酸钠(AR) ，助滤剂celite545。本实验所用标准物质甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果和二嗪磷均来源于中国农业部标准物质中心。浓度均为100µg/ml，介质为丙酮溶液。分析时用色谱纯丙酮溶液, 将标准物质稀释成使用浓度[1]。   1.1.3  仪器美国Agilent technology 6890N气相色谱仪，NPD检测器，G2070AA化学工作站，旋转蒸发器，组织粉碎机，电子天平。   1.2 方法   1.2.1 试验设计  田间试验供试作物为豆角、辣椒、大白菜，设喷施甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果、二嗪磷和清水7个处理。小区面积4 m2，重复3次，按农药标明用量稀释后喷施，施药后定期取样。室内试验共进行了3组试验。 （1）农药成分检测比对试验：分别用万分之一天平称取少量甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果和二嗪磷，用乙酸乙酯稀释成一定浓度后，分别进行仪器比对检测；（2）重现性比对试验：进口气相色谱使用0.1mg/L混标，每检10个样品进一针混标，使用0.5mg/L混标，在每天检测前进一针混标，中途不定期进0-2次混标；（3）线性试验：设5个处理处理1至处理5设进样量分别为1.0、2.5、5.0μL1.0 mg/L混标3个处理和进样量为5.0μL0.1、10.0mg/L混标2个处理，每个处理重复检测3次1.2.1 色谱条件   色谱柱：HP-5石英弹性毛细管柱(30m0.32mm×0.25µm)。柱温：程序升温60 ℃，以10℃/min 的速度上升至120℃，再以6℃/min的速度升温至250℃，保持25 min。进样口温度：220 ℃，不分流进样，进样量1.0µl，进样后0.75min后吹扫。柱压为140kPa。NPD温度330 ℃，载气为高纯氮气，尾吹45 ml/min，空气100 ml/min，氢气75ml/min。  2 样品处理   2.1  提取    擦净蔬菜上泥土，在垫上牛皮纸的菜板上切碎样品，每处理1个样品均新换牛皮纸。在捣机中捣碎样品。称取10.00g，放入200mL锥形瓶中, 加入20mL乙腈, 在匀浆机中匀浆1-1.5min 。匀浆好的样品过滤到预先加入3-4gNaCl的100mL具塞量筒内[16]。   2.2 净化取滤液100ml移至500ml分液漏斗中，加入10-15g氯化钠，猛烈振荡2-3min，   静置10min，待丙酮和水相分层，收取丙酮液。再取40ml丙酮分二次洗涤水相， 静置分层， 合并丙酮提取液。经无水硫酸钠脱水后置于旋转蒸发器中，40℃温度下浓缩至约2ml，移入 5ml容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度。进样1.0µl，上机测定。将得到的色谱峰采用农药标准的保留时间进行定性分析，对其峰面积用外标法进行定量计算3 制作标准曲线   3.1 标样的配制  将六种100mg/kg单个农药标准样回复到室温，取100ml的容量瓶，向容量瓶中加入少量丙酮，分别取1ml六种农药标准样放入容量瓶中。用丙酮定容到100ml得1mg/kg的农药标准溶液,再配制0.1mg/kg,0.01mg/kg的两个浓度水平的混合标样，用气相色谱进行分析。三种浓度的混合标样每个进样三次，每次进样L，取平均值得六个农药标准曲线。以峰面积(Y,单位:150PA×S)对质量浓度(X,单位:mg/kg)作线性回归分析。检出限是根据积分时确定的最小峰面积值计算得出的。   3.2  标样的测定仪器稳定后，编制进样程序，将配制好的不同浓度的混合标样溶液和待测试样溶液通过自动进样器，按溶剂-溶剂-标样-标样-试样-标样的顺序分别注入气相色谱仪。   3.3 精密度考察   将配制好的0.1mg/kg的六种农药标准混合液按照相应检测条件，设定自动进样器的进样体积为2.0µL，重复进样五次，得相应成分的峰面积(Y,单位：150PA×S), 以峰面积计算标准偏差和相对标准偏差。   3.4  标准曲线绘制在得到的混合标样色谱图的基础上绘制标准曲线，利用Chem station色谱 工作站中外标法计算功能计算检测结果。该方法灵敏度高，线性关系好，检出限低，完全可以满足对有机磷农药残留限量标准的检测需要[17]。   4  定性、定量计算蔬菜中有机磷农药含量计算公式:  蔬菜中农药残留量mg/kg=(样品峰面积/标准峰面积)×标准溶液浓度(ug/ ml)×(提取液化定容体积(ml)/样品重量(g))[18]  使用Excel和SAS软件进行数据处理及图表绘制。   5  小结   5.1 毛细管色谱柱由于其分离能力强, 分析速度快,适应面广等特点, 已成为多种农药残留分析的最佳选择。该柱在多种有机磷农药分析中分离效果较好。   5.2  载气流量的选择  载气压力不宜太高，压力低，分离度较高，但灵敏度较低，峰形可能有拖尾的现象出现， 而当压力过高则会出现分离效果不好，峰形尖锐的特点。选取最佳的平行点压力这样才能满足分离效果和峰形好两者的要求。   5.3  柱温的选择   若初始柱温过低，则检测时间过长，会引起农药的分离效果差。同时, 为了适合多种农药检测要求，选用较低的初始柱温，以多级的程序升温，以达到分离多种有机磷农药检测的要求 毛细管柱气相色谱法测定蔬菜中有机磷农药残留量 摘要：本文通过毛细管柱气相色谱法来测定蔬菜中6中有机磷：甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果、二嗪磷的残留量。毛细管色谱柱由于其分离能力强, 分析速度快,适应面广等特点, 已成为多种农药残留分析的最佳选择。该柱在多种有机磷农药分析中分离效果较好。 关键字：气相色谱法；蔬菜；有机磷农药；农药残留量有机磷杀虫剂因具有药效高、作用迅速、残留期短等特点而成为我国使用最广、用量最大的一类农药。在蔬菜的生长过程中，需要使用有机磷农药进行病虫害防治, 因此不可避免地带来不同程度的农药残留，甚至造成食物中毒事故的发生[1]。目前，有机磷农药残留检测技术的研究主要采用进口气相色谱[2-10]，使用国产仪器的报道很少[11]。国家标准方法是使用填充柱气相色谱附火焰光度检测器(FPD)法[12]，存在柱效低、分离效果差、灵敏度低、操作繁琐等问题。而国内测定有机磷农药气相色谱法的有关报道大都存在有机溶剂用量大、前处理繁琐、分析时间长等弊端[13-15]。 本文采用丙酮溶液萃取样品，经净化、浓缩后用NPD同时分析6种有机磷1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试验地点田间试验于新疆乌鲁木齐市头屯河区三坪农场的室外露天菜地及温室大棚内进行。 1.1.2 试剂二氯甲烷（色谱纯），丙酮(色谱纯)， 氯化钠(AR)，无水硫酸钠(AR) ，助滤剂celite545。本实验所用标准物质甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果和二嗪磷均来源于中国农业部标准物质中心。浓度均为100µg/ml，介质为丙酮溶液。分析时用色谱纯丙酮溶液, 将标准物质稀释成使用浓度[1]。 1.1.3 仪器美国Agilent technology 6890N气相色谱仪，NPD检测器，G2070AA化学工作站，旋转蒸发器，组织粉碎机，电子天平。 1.2 方法 1.2.1 试验设计 田间试验供试作物为豆角、辣椒、大白菜，设喷施甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果、二嗪磷和清水7个处理。小区面积4 m2，重复3次，按农药标明用量稀释后喷施，施药后定期取样。室内试验共进行了3组试验。 （1）农药成分检测比对试验：分别用万分之一天平称取少量甲胺磷、敌敌畏、氧化乐果、久效磷、乐果和二嗪磷，用乙酸乙酯稀释成一定浓度后，分别进行仪器比对检测；（2）重现性比对试验：进口气相色谱使用0.1mg/L混标，每检10个样品进一针混标，使用0.5mg/L混标，在每天检测前进一针混标，中途不定期进0-2次混标；（3）线性试验：设5个处理处理1至处理5设进样量分别为1.0、2.5、5.0μL1.0 mg/L混标3个处理和进样量为5.0μL0.1、10.0mg/L混标2个处理，每个处理重复检测3次1.2.1 色谱条件 色谱柱：HP-5石英弹性毛细管柱(30m0.32mm×0.25µm)。柱温：程序升温60 ℃，以10℃/min的速度上升至120℃，再以6℃/min的速度升温至250℃，保持25 min。进样口温度：220℃，不分流进样，进样量1.0µl，进样后0.75min后吹扫。柱压为140kPa。NPD温度330℃，载气为高纯氮气，尾吹45 ml/min，空气100 ml/min，氢气75ml/min。 2 样品处理 2.1 提取  擦净蔬菜上泥土，在垫上牛皮纸的菜板上切碎样品，每处理1个样品均新换牛皮纸。在捣机中捣碎样品。称取10.00g，放入200mL锥形瓶中, 加入20mL乙腈, 在匀浆机中匀浆1-1.5min。匀浆好的样品过滤到预先加入3-4gNaCl的100mL具塞量筒内[16]。 2.2 净化取滤液100ml移至500ml分液漏斗中，加入10-15g氯化钠，猛烈振荡2-3min， 静置10min，待丙酮和水相分层，收取丙酮液。再取40ml丙酮分二次洗涤水相， 静置分层，合并丙酮提取液。经无水硫酸钠脱水后置于旋转蒸发器中，40℃温度下浓缩至约2ml，移入5ml容量瓶中，用二氯甲烷定容至刻度。进样1.0µl，上机测定。将得到的色谱峰采用农药标准的保留时间进行定性分析，对其峰面积用外标法进行定量计算3 制作标准曲线 3.1 标样的配制 将六种100mg/kg单个农药标准样回复到室温，取100ml的容量瓶，向容量瓶中加入少量丙酮，分别取1ml六种农药标准样放入容量瓶中。用丙酮定容到100ml得1mg/kg的农药标准溶液,再配制0.1mg/kg,0.01mg/kg的两个浓度水平的混合标样，用气相色谱进行分析。三种浓度的混合标样每个进样三次，每次进样L，取平均值得六个农药标准曲线。以峰面积(Y,单位:150PA×S)对质量浓度(X,单位:mg/kg)作线性回归分析。检出限是根据积分时确定的最小峰面积值计算得出的。 3.2 标样的测定仪器稳定后，编制进样程序，将配制好的不同浓度的混合标样溶液和待测试样溶液通过自动进样器，按溶剂-溶剂-标样-标样-试样-标样的顺序分别注入气相色谱仪。 3.3 精密度考察 将配制好的0.1mg/kg的六种农药标准混合液按照相应检测条件，设定自动进样器的进样体积为2.0µL，重复进样五次，得相应成分的峰面积(Y,单位：150PA×S), 以峰面积计算标准偏差和相对标准偏差。 3.4 标准曲线绘制在得到的混合标样色谱图的基础上绘制标准曲线，利用Chem station色谱工作站中外标法计算功能计算检测结果。该方法灵敏度高，线性关系好，检出限低，完全可以满足对有机磷农药残留限量标准的检测需要[17]。 4 定性、定量计算蔬菜中有机磷农药含量计算公式: 蔬菜中农药残留量mg/kg=(样品峰面积/标准峰面积)×标准溶液浓度(ug/ ml)×(提取液化定容体积(ml)/样品重量(g))[18] 使用Excel和SAS软件进行数据处理及图表绘制。 5 小结 5.1 毛细管色谱柱由于其分离能力强, 分析速度快,适应面广等特点, 已成为多种农药残留分析的最佳选择。该柱在多种有机磷农药分析中分离效果较好。 5.2 载气流量的选择 载气压力不宜太高，压力低，分离度较高，但灵敏度较低，峰形可能有拖尾的现象出现，而当压力过高则会出现分离效果不好，峰形尖锐的特点。选取最佳的平行点压力这样才能满足分离效果和峰形好两者的要求。 5.3 柱温的选择 若初始柱温过低，则检测时间过长，会引起农药的分离效果差。同时, 为了适合多种农药检测要求，选用较低的初始柱温，以多级的程序升温，以达到分离多种有机磷农药检测的要求