中药中展青霉素检测方案(浓缩仪)

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LabTech 2020版《中国药典》2351中药展青霉素测定解决方案 北京莱伯泰科仪器股份有限公司 前言 随着我国中医药产业的快速发展，中药材与饮片使用人群范围日益扩大，市场需求不断增长。由于产地分布广、加工企业多、制备工艺各异及成分复杂多变等，给中药材与饮片的质量控制带来极大的挑战，，保障中药材与饮片安全性显得 尤为重要。因此，中药材与饮片微生物污染问题不容忽视，特别是在生产以及加工储运过程中，如不采取有效措施加以控制，极易造成外源微生物的污染，其中可能产生大量致病菌和某些真菌毒素，导致中药材与饮片存在一定的安全性风险隐患，给临床使用带来安全性问题。 展青霉素是一种遗传毒性化合物，具有潜在的细胞和动物毒性，存在致畸性、致癌性和免疫毒性，是多种真菌的次级代谢产物，广泛存在于多种植物作物及其制品中，所以展青霉素的残留问题已引起世界卫生组织的高度关注，对其最低限量做了严格规定。 本文参考2020版《中国药典》2351通则中的展青霉素测定法，对常用中药(人参、枸杞、大枣)的展青霉素进行提取，用 MultiVap-10定量平行浓缩仪对样品进行浓缩，并用 MiniLab3000 全自动液体样品处理平台配制标准曲线，采用LC-MS检测，建立了一套中药的展青霉素处理检测方法，此方法回收率及平行性 良好，标准曲线R2>0.999，加标回收率为71.4%~91.7%，重复性 RSD 为5.0%~5.7%，满足检测要求。 关键词：：NMultiVap-10 2020版《中国药典》 展青霉素 2351 通则MiniLab3000 1仪器设备及试剂 1.11仪器设备 1.1.1 MultiVap-10定量平行浓缩仪(莱伯泰科公司)； 1.1.2 SCIEX Exion LC "M液相系统+ TripleQuadM 4500质谱系统 (SCIEX中国公司)； 1.1.3 MiniLab3000全自动液体样品处理平台(莱伯泰科公司)； 1.2试剂及耗材 1.2.1甲醇(色谱级)； 1.2.2乙腈(色谱级) 1.2.3蒸馏水； 1.2.4展青霉素净化柱； 1.2.5展青霉素标液(购自坛墨质检)； 1.2.6氯化钠； 1.2.7无水醋酸钠； 1.2.8无水硫酸镁； 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-80 48 6 450 (总部 )/6 49 73 1 19 ( 市场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 1.2.9果胶酶(活性大于1500IU/g)； 2试验方法 2.1样品处理 分别取人参、枸杞、大枣三种中药进行实验，取供试品粉末约5g(过二号筛)，精密称定，加入水20mL和果胶酶75uL，混匀并40℃放置2h，精密加入乙腈60mL，均质2min (11000r/min)， 离心 10min (4000r/min)， 取上清液20mL， 加入无水醋酸钠：无水硫酸镁(1：4)3g，充分振摇2min， 离心10min(4000r/min)，取上清液8mL，通过展青霉素净化柱，收集净化液，取5mL净化液放入 MultiVap-10定量平行浓缩仪中，按40℃、2psi 条件进行氮行浓缩至 0.5mL 以下， 加2%乙腈溶液(乙酸调pH至2)定容至1mL， 用0.22um滤膜过滤，待测。 2.2 基质标标回收率实验 标准曲线配制：取展青霉素标品母液至MiniLab3000 全自动液体样品处理平台上，按图1方法配制标曲。 图1 MiniLab3000 全自动液体样品处理平台展青霉素标曲配制流程 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-80 48 6 450 (总部 )/6 49 73 1 19 ( 市场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 按2.1方法准备样品，进行加标实验，按药典所规定的检出限展青霉素12pg/kg进行加标及前处理实验，同时进行3个平行样品，用来测定加标回收率及平行性。 2.4 LC-MS分析条件 2.4.1液相色谱条件 色谱柱： Shim-pack Velox C18 (2.7pm， 2.1*100mm)； 流动相： A：水；B：乙腈； 流速： 0.3mL/min；柱温：25℃；进样量：5pL； 洗脱梯度： 0~0.5min， 20%B； 1min，40%B； 4min， 75%B； 4.1~5min， 95%B；5.1~6.5min，20%B： 2.4.2质谱条件 离子源： ESI源， MRM模式，正离子模式； 离子源参数： IS电压：5500V 气帘气 CUR：35 psi； 雾化气 GS1：55 psi 辅助气 GS2：60 psi； 源温度 TEM：550℃碰撞气 CAD：9 psi； 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-80 48 6 450 (总部 )/6 49 73 1 19 ( 市场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 3结果和讨论 3.1样品色谱图 图2基基加标LC-MS MRM 总离子流色谱图(正离子模式) 3.2标准曲线 按2.3中的配制的不同浓度标液计算得出展青霉素(以相对峰面积和浓度作标准曲线)的线性方程、相关系数，见图3。 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-80 48 6 450 (总部 )/6 49 73 1 19 ( 市场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) Calibration for 2：y=4.84175e4x+3.00055e5 (r=0.99985，r=0.99970) (weighting： None) 图3展青霉素LC-MS 法标准曲线 3.2加标回收率 加标样品经前处理后，分别进行 LC-MS分析、定量，计算得到的加标回收率及相对标准偏差如表1所示。 表 1展青霉素 LC-MS 法加标回收率 中药品种 回收率(%) 平均值(%) RSD 1 2 3 枸杞 91.3% 87.4% 96.5% 91.7% 5.0% 人参 79.7% 88.8% 81.8% 83.4% 5.7% 大枣 74.2% 72.6% 67.3% 71.4% 5.1% 4结论 由图3、表1可知，2020版《中国药典》2351通则中展青霉素的标准曲线R2>0.999，加标回收率为71.4%~91.7%，重复性 RSD 为5.0%~5.7%，满足检测要求。 ( 北京莱伯泰科仪器有限公司 ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 综上所述，莱伯泰科 MultiVap-10定量平行浓缩仪及 MiniLab3000 全自动液体样品处理平台能够高效、稳定地达到实验的要求，适用于2020版《中国药典》2351 通则中规定的展青霉素测定，适用于人参、大枣、枸杞等多种中药样品的前处理实验。 ( 参考文献： ) ( [1]江曙，杨美华，段金列，钱大玮.展青霉素研究现状及其对中药安全性的影响[J].南京中 医药大学学报，2010，26(05)：398-400. ) ( [2 ] 中华人民共和国药典2020年版.四部[S].2020：30ChP 2020. Vol Ⅳ[S]. 2020： 30. ) 北京莱伯泰科仪器有限公司 ( 电 话 ： 01 0-80 48 6 450 (总部 )/6 49 73 1 19 ( 市场 ) ) ( 传真：01 0-8 0 4 86354( 总 部)/64 97 4 268 ( 市场) ) 北京莱伯泰科仪器有限公司地址：北京空港工业区电话：总部)/市场)Your Lab， Our Tech传真：总部)/市场) 地址：北京空港工业区Your Lab， Our Techwww.labtechgroup.com 随着我国中医药产业的快速发展，中药材与饮片使用人群范围日益扩大，市场需求不断增长。由于产地分布广、加工企业多、制备工艺各异及成分复杂多变等，给中药材与饮片的质量控制带来极大的挑战，保障中药材与饮片安全性显得尤为重要。因此，中药材与饮片微生物污染问题不容忽视，特别是在生产以及加工储运过程中，如不采取有效措施加以控制，极易造成外源微生物的污染，其中可能产生大量致病菌和某些真菌毒素，导致中药材与饮片存在一定的安全性风险隐患，给临床使用带来安全性问题。展青霉素是一种遗传毒性化合物, 具有潜在的细胞和动物毒性, 存在致畸性、致癌性和免疫毒性，是多种真菌的次级代谢产物, 广泛存在于多种植物作物及其制品中，所以展青霉素的残留问题已引起世界卫生组织的高度关注, 对其最低限量做了严格规定。本文参考2020版《中国药典》2351 通则中的展青霉素测定法，对常用中药（人参、枸杞、大枣）的展青霉素进行提取，用MultiVap-10定量平行浓缩仪对样品进行浓缩，并用MiniLab3000全自动液体样品处理平台配制标准曲线，采用LC-MS检测，建立了一套中药的展青霉素处理检测方法，此方法回收率及平行性良好，标准曲线R2>0.999，加标回收率为71.4%~91.7%，重复性RSD为5.0%~5.7%，满足检测要求。关键词：MultiVap-10 2020版《中国药典》  展青霉素  2351通则  MiniLab3000