正常视网膜色素上皮细胞原代培养

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实验材料：1. 材料来源：人眼、兔眼或者猪眼等；2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.3. 特殊取材器械：眼球托与7-0尼龙线。以灭菌的白色橡胶反口胶塞作为眼球托；4. 消毒液：200IU/ml的庆大霉素生理盐水；5. 消化液：0.01%EDTA-0.125%胰蛋白酶的混合消化液；6. 培养液：为含10%胎牛血清的DMEM培养液；7. 培养器皿：培养瓶、24孔培养板或培养皿若干。实验方法：1. 摘取眼球，用200IU/ml的庆大霉素生理盐水浸泡消毒5min。沿锯齿缘后2—3mm处环形剪开眼球前段，去除角膜、晶状体以及玻璃体。分离去掉视网膜神经上皮层。将眼球后段制成眼杯；2. 将眼杯置于眼球托（可以洗净消毒过的盐水瓶胶塞替代）上，取持针器用7-0尼龙线在4个对称方向上，把眼杯缝合固定在眼球托的壁缘上；3. 用毛细吸管轻轻从眼杯中吸出视网膜神经上皮层。以PBS液漂洗眼杯2次，吸干；4. 加入0.01%EDTA-0.125%胰蛋白酶的混合消化液，置于无菌的烧杯中。于37℃电热恒温培养箱中消化30min；5. 吸去消化液。用PBS液稍洗。加入有血清培养液终止消化酶的作用，并用毛细吸管轻轻吹打眼杯内壁，以使视网膜色素上皮细胞脱落；6. 收集眼杯内的细胞悬液，离心（800r/min）8min；7. 弃上清液，将沉淀的视网膜色素上皮细胞重新用培养液悬浮。计数；8. 以8×104—10×104个/ml的密度接种于培养瓶中；9. 送入电热恒温培养箱中，按常规方法培养，每周换液2次；10. 也可直接用机械分离植块法：用无齿镊撕下视网膜色素上皮细胞层，经PBS漂洗后，将其剪成1.5mm×1.5mm大小的组织块，直接接种于24孔培养板进行培养。上海喆图科学仪器有限公司 用途概 述 Z DP电热恒温培 养 箱，其 试 验 常 用 于在37℃±1，主 要用于发 酵 以及 菌 类培 养等 恒温试 验。恒温培养 箱 是 生 物遗 传 工程、医药 、农、林、环 境 科学、 畜牧、水 产 等生 产 、科研、教 育 部 门的理想设备。可适 用 于医 疗 卫生、医药工业、 产 品特 点 ※彩色液晶 显示 屏，按 键触摸式操作界面，简 单易懂，便 于 操作； ※采用自 主研 制的风道循环系统 ，结 构 合理，确保工作 室 温度均 匀 性 ； ※双层门结构，隔 热 性 能好 ，观 察箱内情况时不 影 响 箱内温度； ※采用拉丝不锈钢内胆，四 角半 圆弧设计易清洁，箱内搁板间距可 调 ； ※可 根 据实验需要设定 报 警 温 度点 ，温度偏高或超过 设 定温度将自动报 警； ※具有因停电，死 机 状态造成数 据 丢失而保护的参数记忆，来电恢 复 功能； ※内 胆采 用 镜面不锈钢材质，四 角半 圆弧 设计易清洁，箱内搁板 间 距可调；※外观造 型 美观，箱壳采用优 质 冷轧钢板制造，表面静电喷塑 ，经久耐用 ； ZDP电热式：采用电热膜加热方式，在 箱体与 内 胆 之 间安装电热膜 ，使用 热传递方式加热，加热速度快； ZGP隔 水式 ：使用 时需通过箱体侧面注水口加入适 量 蒸馏水，由 电热管加 热箱体独 立 隔间内水源，水源被加热 后 ，独 立 隔间内水源会通过自然对流 在 箱体独立隔间内循 环 流动，热 量通过辐射传递到箱体内部从而保持了温 度的恒定 ，既保证工作室温度均匀性，又可在断 电 情况下保持较长时 间 恒 型号 ZDP-9012 ZDP-9032 ZDP-9052 ZDP-9082 ZDP-9162 ZDP-9272 ZDP-9402 ZDP-9602 ZDP-9902 电源电压 AC220V 50Hz AC220V 50Hz 控温范围 RT(室温)+5~65℃ RT(室温)+5~65℃ 恒温波动度 ±0.5℃ ±0.5℃ 温度均匀性 ±1℃(温度测试点37℃时) ±2℃(温度测试点37℃时) 温度分辨率 0.1℃ 0.1℃ 工作环境温度 RT(室温)+5℃~35℃ RT(室温)+5℃~35℃ 输入功率 180W 200W 250W 350W 550W 700W 1300W 1500W 2200W 内胆尺寸 W*D*H(mm) 250*260*250 340*320*320 345*355*410 400*400*500 500*500*650 600*600*750 600*550*1300 800*640*1300 1000*600*1600 外形尺寸 W*D*H(mm) 380*365 *540 470*425*600 475*460*695 530*505*785 630*605*940 730*705*1035 780*750*1750 980*750*1750 1180*800*2150 公称容积 16L 35L 50L 80L 160L 270L 420L 620L 1000L 载物托架 1块 2块 3块 4块 定时范围 1~9999min 1~9999min