LCMS方法分析腹泻性贝毒

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LCMS 方法分析腹泻性贝毒 腹泻性贝毒(Diarrhetic Shellfish Poison，DSP) 是二枚贝在摄取涡鞭毛藻 Dinophysisfortii 和 Dinophysis acuminata 等有毒浮游生物时积蓄在中肠腺内的物质，会引起呕吐、腹泻、腹痛的急性肠胃炎。通常，人类摄取的量不会致死，在家庭烹调程度的热处理下不会分解。具有代表性的腹泻性贝毒有：大田软海绵酸(Okadaic acid， OA)， 鳍藻毒素(Dinophysistoxin， DTX)，PPectenotoxin，(PTX)，扇贝毒素Yessotoxin等，由于它们结构复杂，而且没有适当的显色团，因此， 分析相当麻烦。日本法定方法为生物检定法的小鼠单位法，但是，荧光衍生后 HPLC 的分析方法也较为常见。 本文介绍使用 LCMS进行的 OA、DTX-1、PTX-6(图1)的分析例。OA 的正、负离子ESI质谱如图2所示。使用负离子 ESI法可以清楚地观察到去质子分子(M-H)―。使用正离子法时，除钠离子加合型分子(M+Na)*外，可确认由质子化分子脱去1~4个水分子的碎片离子。 图1大田软海绵酸(OA)，鳍藻毒素 (DTX-1) 和 Pectenotoxin -6 (PTX-6)的结构式 在负离子检测中使用去质子分子(M-H)，在正离子检测中使用钠结合型分子(M+Na)*的质量数进行选择离子检测(SIM)的结果，在13~1625ng/mL 的浓度范围取得了良好的线性，定量限均为 13ng/mL(负离子 检测中的 PTX-6 除外)。 PTX-6在进行负离子检测时，与正离子检测相比，灵敏度差 5倍左右，而且 PTX 类中存在不含羟酸的同分异构体，因此需要进行 PTX 类分析时，谱图有些复杂，因而选择正离子检测为宜。 图3使用正离子和负离子 ESI的腹泻性贝毒的 SIM 色谱图 表1 分析条件 色谱柱： Shim-pack VP-ODS (2.0mmI.D. +4.5kV(ESI-Negative mode) ×150mmL.) 雾化气流速： 1.5L/min 流动相A： 5mM醋酸铵+0.1%甲酸水溶液 干燥气压力：0.2MPa 流动相B：乙腈 CDL温度：200℃ 梯度洗脱：10%B(0min)→90%B(15-20min) 加热块温度：200℃ 流速：0.2mL/min CDL & Q-array电压：缺省值 柱温：40℃ SIM： m/z 803.25，887.15，817.25负离子模式 进样体积：2uL m/z 906.25，911.15，634.25，850.30，827.20， 电压：：-3.5kV(ESI-Negative mode) 864.30，841.20负离子模式