化妆品和牙膏中三氯生和三氯卡班的液相色谱分析

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岛津SHIMADZUSSL-CA09-343 No.LC-067 化妆品和牙膏中三氯生和三氯卡班含量的液相色谱分析 No.LC-067 摘要：本文使用岛津LC-30A液相色谱仪建立了化妆品中三氯生(Triclosan， TCS) 和三氯卡班(Triclocarban，TCC )的快速检测方法。本方法采用C18色谱柱，甲醇/水=70/30(v/v)为流动相，紫外检测器的检测波长为281 nm。在0.50-50.00 pg/mL的浓度范围内标准曲线的线性相关系数r=0.9999，线性关系良好。对添加浓度为5.0 pg/L的六个平行样品进行分析，重复性结果(RSD%表示)：TCC三氯卡班的保留时间RSD为0.026%，回收率RSD为0.103%， TCS三氯生的保留时间RSD为0.014%，回收率RSD为0.287%，结果的重复性良好。方法的检出限为0.09ug/L， 定量限为0.26 pg/L，具有较高的检测灵敏度。 关键词：化妆品三氯生三氯卡班液相色谱 三氯卡班TCC作为一种高效、广谱、安全的新型抗菌剂，在医疗消毒剂中有着广泛应用。三氯生TCS广泛用于高效药皂(卫生香皂、卫生洗液)、除腋臭剂(脚气雾剂)、消毒洗手液、伤口消毒喷雾剂、医疗器械消毒剂、卫生洗面奶(膏)、空气清新剂及冰箱除臭剂等，也用于卫生织物的整理和塑料料防腐处理；更高纯度的克力恩还广泛用于治疗牙龈炎、牙周炎及口腔溃疡等的疗效牙膏及漱口水中，建议使用浓度为0.05%~0.3%。《GB22115-2008牙膏用原料规范》中明确规定三氯卡班TCC和三氯生TCS最大允许使用浓度分别为0.2%和0.3%。 过度使用三氯生类抗菌剂可能会导致细菌的抗药性，产生可以抵抗三氯生的新菌种。三氯生可能影响人体激素分泌，并导致人体细菌产生抗药性，可能会致癌，美国食品药品监督管理局正在重新评估其安全性。《SN/T1786-2006进出口化妆品中三氯生和三氯卡班的测定》规定了用高效液相色谱测定三氯生和三氯卡班的方法。本实验中应用岛津的超高效液相色谱LC-30A建立了一种对三氯生和三氯卡班的快速检测方法，并应用于化妆品(包括牙膏)样品的分析。 三氯生的化学结构式 三氯卡班的化学结构式 1.1试剂与仪器 1.1.1试剂： 甲醇HPLC级，水为超纯水。 TCC-TCS标准储备液(1000 pg/mL)：准确称取TCC标准品， TCS标准品0.0250 g，用少量甲醇溶解后，甲醇定容至25 mL， 作为TCC-TCS的标准储备液，在4C冰箱中保存。 1.1.2仪器： LC-30A， 包括CBM-20A System Controller系统控制器， LC-30AD Solvent Delivery Unit 高精度溶液输送泵×2， DGU-20A55 On-line Degasser在线脱气机， SIL-30AC Autosampler自动进样器， CTO-20ACColumn Oven柱温箱， SPD-20AV UV-VIS Detector紫外-可见光检测器。 1.2分析条件 色谱柱： Shim-pack XR-ODS II (3.0 mml.D.×75mmL.，2.2um)；流动相：A-水，B-甲醇，A/B=30/70 (v/v)；流速：1.0 mL/min；洗脱方式：等度洗脱；柱温：40℃；紫外检测波长：281nm；进样量：10 pL。 1.3样品处理 1.3.1TCC-TCS标准品的配制 取不同量的TCC-TCS储备液，用甲醇稀释，配制成浓度为0.50、5.00、10.00、20.00及50.00 pg/mL的标准系列，储存在棕色小瓶中，于4℃冰箱中存放。 1.3.2试样的制备 2.结果讨论 准确称取1.0±0.02g样品于25.0mL离心管中，加入20.0 mL甲醇，混合震荡1 min。将离心管放入水浴超声仪中，温度50℃，功率为100%，超声20 min。将离心管放入离心机中，4000rr/min离心10min。过滤样品，即得。 2.1 TCC和TCS标准曲线的结果 图1是浓度为10.0ug/mL的TCC-TCS标准品色谱图，图2是五个不同浓度的标准溶液采集得到的色谱图。TCC， TCS的校准曲线及方程如图3、图4所示。曲线的相关系数为0.9999。 图1TCC-TCS标准样品的色谱图 图2五个不同浓度的TCC-TCS标准品的色谱图 图3 TCC标准校准曲线 Y=aX+ba=6.23073e-005 b=0 R=0.9999 图4TCS标准校准曲线 Y=aX+b a=0.000169428 b=0R=0.9999 2.2方法的重现性 为了进一步考察该方法的重现性，本文分别对浓度为5.0 pg/mL， 10.0 pg/mL， 20.0 ug/mL的TCC-TCS标准样品及添加后浓度为5.0ug/L的水样均进行了6次重复实验，重复性结果(RSD%表示)：TCC三氯卡班的保留时间RSD为0.026%，回收率RSD为0.103%， TCS三氯生的保留时间RSD为0.014%，回收率RSD为0.287%汇总如下。 表1 TCC5.0 pg/mL， 10.0 pg/mL， 20.0 pg/mL标准溶液的保留时间和峰面积的重复性结果 No. 保留时间(min) 峰面积 浓度(pg/mL) 5.0 10.0 20.0 5.0 10.0 20.0 数据1 5.896 5.889 5.881 81000 162304 321208 数据2 5.905 5.910 5.900 80745 161352 320387 数据3 5.907 5.913 5.902 81214 160976 329879 数据4 5.906 5.911 5.900 81224 160796 320292 数据5 5.907 5.912 5.800 80855 160448 329948 数据6 5.912 5.912 5.797 80777 160588 320252 平均 5.906 5.908 5.863 80969 161077 320328 RSD% 0.086 0.158 0.864 0.262 0.422 0.148 表2 TCS5.0 ug/mL， 10.0 pg/mL， 20.0 pg/mL标准溶液的保留时间和峰面积的重复性结果 No. 保留时间(min) 峰面积 浓度(ug/mL) 5.0 10.0 20.0 5.0 10.0 20.0 数据1 6.575 6.570 6.563 29539 59299 117617 数据2 6.587 6.595 6.587 29606 59244 117168 数据3 6.588 6.599 6.590 29360 59041 117121 数据4 6.588 6.597 6.582 29905 59209 117435 数据5 6.589 6.597 6.475 29609 58649 117772 数据6 6.593 6.598 6.473 29653 58464 117962 平均 6.587 6.593 6.545 29612 58984 117512 RSD% 0.093 0.173 0.856 0.597 0.589 0.284 表3样品添加5.0 pg/mL的TCC保留时间和回收率的重复性结果 No. 保留时间(min) 回收率(%) 数据1 5.799 104.22 数据2 5.799 104.24 数据3 5.799 104.08 数据4 5.796 104.08 数据5 5.796 103.96 数据6 5.797 104.04 平均 5.798 104.10 RSD% 0.026 0.103 表4样品添加5.0 ug/mL的TCS保留时间和回收率的重复性结果 No. 保留时间(min) 回收率(%) 数据1 6.467 103.10 数据2 6.468 103.56 数据3 6.468 103.44 数据4 6.466 102.72 数据5 6.466 103.14 数据6 6.467 103.10 平均 6.467 103.18 RSD% 0.014 0.287 2.3方法的灵敏度 为考察方法的灵敏度，对浓度为0.5 pg/mL的样品进行分析，得到色谱图如图5所示，此时信噪比为18.67，经计算得到此分析方法的检出限为0.09 pg/l，定量限为0.26 pg/L。大大低于《SN/T 1786-2006 进出口化妆品中三氯生和三氯卡班的测定》规定的5 pg/L标准限值。 图5浓度为0.5 pg/mL样品的色谱图 3.结论 本实验中使用LC-30A系统，开发了化妆品中三氯生、三氯卡班的检测方法。本法具有快速便捷，线性、重复性好和灵敏度高等优点。 http：//www.shimadzu.com.cn岛津应用技术咨询电话：北京(海(广州( 沈阳(：