可乐中甲基咪唑检测方案

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MM/LS/LE-2013-024 ZIC@-HILIC 色谱柱检测可乐饮料中的甲基咪唑 默克密理博应用实验室2013-07-15 近日，百事可乐的产品在美国10个州中被爆出4-甲基咪唑(4-Methylimidazole)严重超标。4-甲基咪唑是一种有机中间体，主要用于合成大宗胃药西咪替丁，也可用作环氧树脂固化剂和金属表面防护剂等。可乐中的4-甲基咪唑是在以亚硫酸铵为原料生产焦糖色素时产生的。4-甲基咪唑白色至类白色结晶粉末，易溶于水和乙醇，有腐蚀性，是一种能诱发肿瘤的化学物质。 默克密理博致力于分析方法的开发，为客户提供简便、快速的解决方案。4-甲基咪唑及其异构体2-甲基咪唑均有较强极性，适合使用默克密理博的两性离子型亲水作用色谱柱(ZICQ-HILIC)分离。 本实验采用默克密理博两性离子型 (ZICQ-HILIC)色谱柱直接分析甲基咪唑的液相色谱方法。该方法前处理简单，不需要衍生化，也不需要添加离子对试剂。 1材料试剂 1.1对照品：4-甲基咪唑，2-甲基咪唑。 1.2色谱普： ZICQ-HILIC 250-4.6mm 5um 200A (默克密理博，货号：1.50458.0001) 1.3乙腈(默克密理博，货号：1.00030.4008) 1.4甲醇(默克密理博，货号：11.06007.4008) 1.5磷酸二氢钾(默克密理博，货号：：1.04873.1000) 1.6可口可乐及百事可乐样品 1.7实验用为为超纯水(默克密理博Milli-QAdvantage) 1.8 PVDF0.22um针头过滤器(默克密理博，货号： SLGV033NB) 1.9标准溶液配制：使用70%乙腈溶液，分别配制1mg/ml 的4-甲基咪唑，2-甲基咪唑对照品原液。取两个对照品原液，1：1混合、稀释、定容，成，得100ug/ml的混合对照品母液。混合母液用70%乙腈溶液配制浓度为0.1-10ug/mL的标准工作液。 1.10 样品前处理：取3ml可乐饮料样品于5mL容量瓶中，用碱液调节pH值，加水稀释至刻度。混匀，取1mL溶液于10mL容量瓶中，加8ml乙腈溶解，超声10min后，冷却至室温，加乙腈稀释至刻度。混匀，静置，分层，取上层清液，过滤。另取3ml可乐，加入标准品后，调节pH值，再同法处理。 2.测试条件 2.1液相色谱仪：： Agilent 1260 HPLC 2.2色谱条件 色谱柱：ZICQ-HILIC PEEK 250-4.6 5um(1.50458.0001) 流动相：A-磷酸缓冲盐(20mMK2HPO4)， B-乙腈 梯度程序：0-12 min 80% B； 12-15 min 80-50% B， 15-20 min 50% B， Post time： 7 min 检测波长：214nm 柱温：30℃ 流速：1mL/min 进样体积：20ul 3测试结果 Merck Millipore is a division of 'MERCK 3.1对照品测试 对照 图1混合对照品溶液(10ug/ml) 表1对照品测试结果 No.( Compound Retention Theoretical Asymmetry Resolution RSD% Time (min) Plates (n=3) 1 4-Methylimidazole 10.1 7135 0.80 2.37 2 2-Methylimidazole 11.4 7857 0.79 2.46 1.44 3.2校准曲线 配制0.1，0.5，2， 5，，10ug/ml 的对照品溶液，分别进样检测。根据浓度与峰面积值绘制校准曲线。 图2校准曲线 Merck Millipore is a division of'MERCK 结果表明，在 0.1-10ug/ml之间，线性关系良好。 3.3加标回收及精密度试验 百事可乐样品按照样品处理方法处理，结果显示未检出甲基咪唑，，且在4-甲基咪唑和2-甲基咪唑色谱峰附近没有干扰峰。 图3百事可乐样品 取3mL百事可乐样品，分别加入不同量混合对照品，经过处理后测定，计算加标回收率，见表3. 图4样品加标(蓝色为可乐空白，红色为可乐加标 (17ug/ml)) 表2加标回收及精密度实验 加标浓度(ug/ml) 回收率 RSD 1.7 111.9% 4.3% 17 94.9% 1.2% 83.3 95.4% 1.3% 3.5可口可乐样品测试 图5可口可乐样品的测试图谱 4结论 采用 ZICQ-HILIC 色谱柱，直接分析可乐样品中的4-甲基咪唑和2-甲基咪唑。方法在0.1-10ug/ml 范围内线性关系良好，操作简单，重现性良好。 附： LC-MS/MS测试食品中的甲基咪唑 Merck Millipore is a division of ' MERCK 附图： ZIC-HILIC-MS/MS测试MRM扫描图谱(20ppb) 色谱柱推荐 应用 描述 订货号 HPLC ZICQ-HILIC PEEK 250-4.6 5um 1.50458.0001 LC/MS ZICR-HILIC PEEK 150-2.1 5um 1.50454.0001 更详细信息请联系默克密理博。 Merck Millipore is a division of MERCK