乳制品中氯霉素的测定 SPE-UPLC/MS/MS 方法

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DiMA@A reliable partner for your lab 氯霉素由于其较强的毒副作用，许多国家禁止在食用动物饲养和治疗中使用；我国也明令其作为兽药禁用，且所有动物可食组织均不得检出。因此，研究一种高效、灵敏的检测乳品中氯霉素残留量方法，对我国的进出口贸易以及食品安全将具有重要意义。我国农业部于2002年发布的第193号公告中规定禁止生产、经营和使用氯霉素，在可食性动物组织中不得检出氯霉素。 ( 迪马优势 ) 对比《GB 29688-2013食品安全国家标准牛奶中氯霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法》，本方案具有如下优势： (1)不需要乙酸乙酯完成氯霉素提取(牛奶和乙酸乙酯会出现乳化现象)，改用乙腈作为提取溶剂； (2)采用 ProElut DPC 净化，简化前处理步骤，节省大量时间，并降低杂质干扰，回收率达80%以上，保证实验结果的准确性、重现性； (3)牛奶的检出限0.01 pg/kg、定量限为 0.1 pg/kg(与国标方法《GB 29688-2013食品安全国家标准牛奶中氯霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法》一致)； (4)奶粉的检出限0.05 pg/kg、定量限 0.5 ug/kg， 可以为国内质检部门快速测定牛奶中氯霉素留量提供方法参考。 1、适用范围 适用于牛奶、奶粉等乳制品中氯霉素的检测，牛奶的检出限是0.01 pg/kg，定量限是0.1pg/kg；奶粉的检出限是 0.05 pg/kg， 定量限是0.5 pg/kg. 2、提取 ( (1)取 10 mL 牛奶样品(或2g奶粉样品、10mL 水)， 加10mL乙腈，涡旋1 min； ) (2)加 10 mL 乙腈、2 mL 乙酸铅(200 g/L)、4g 氯化钠，涡旋2 min， 7000 rpm 下离心3 min， 收集上清液； ( 上海：0 2 1-61263966 沈阳：0 2 4-22943513 石家庄：0311-66686220 ) (3)取 10 mL上清液，待净化。 3、净化—ProElutDPC 3 g/12 mL (Cat.#65353) a活 化：：10mL乙腈活化； b上 样：1加入待净化液，收集流出液； c洗 脱： 加入 10mL乙腈，收集流出液，合并步骤b 和步骤c流出液； d重新溶解：：将流出液在40℃下减压蒸馏至干，用水定容至1mL，供UPLC-MS/MS分析。 4、色谱条件 4.1液相条件 色谱柱： Endeavorsil C18， 100×2.1 mm， 1.8 pm(Cat.#87003) 流速： 0.2 mL/min 进样量： 5pL 柱温： 40℃ 流动相： A： 10 mmol/L 乙酸铵溶液B：乙腈梯度设置 时间/Min. 0 4 4.5 6 6.5 12 A(%) 20 50 90 90 20 20 B(%) 80 50 10 10 80 80 4.2质谱条件 电离模式：ESI扫描方式：负离子扫描检测方式：多反应监测电喷雾电压：-4500V雾化气压力：：50 psi辅助气压力：50 psi气帘气压力：20 psi离子源温度：500℃ 定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表 药物 定性离子对 定量离子对 碰撞 去簇 (m/z) (m/z) 气能量 电压 名称 (母离子/子离子) (母离子/子离子) V V 氯霉素 321.0/151.8 321.0/151.8 -24 -80 321.0/256.9 -15 天津：400-633-6606 广州：020-85593520 济南：0531-83681355 青岛：0532-83725230 5、添加回收结果 牛奶和奶粉中氯霉素的 UPLC-MS/MS 检测添加回收结果 基质 分析物 添加水平(ug/kg) 回收率(%) 牛奶 氯霉素 0.2 87.8 奶粉 氯霉素 1.0 82.6 牛奶中氯霉素检测(空白样品)的总离子流图 氯霉素多反应监测色谱图 -30 50 6.0 10.0 110 添加水平为1.0 pg/kg 奶粉中氯霉素检测的总离子流图 添加水平为 0.2 pg/kg牛奶中氯霉素检测的总离子流图 奶粉中氯霉素检测(空白样品)的总离子流图 相关产品信息 reliable partr 货号 名称 规格 样品前处理 65353 乳品中农、兽药检测专用柱ProElut DPC 3 g/12 mL， 20/pkg 244358 12管防交叉污染真空 SPE 萃取装置 12位 4806 考克(控制流量) 15/pk 99011 真空/正压两用泵，无油 1/pk 99013 抽滤瓶套装(包括硅橡胶管2米，2L抽滤瓶及橡胶塞) 1/pk 37177 针头式过滤器 Nylon 13 mm，0.22 pm 100/pk 37180 针头式过滤器 Nylon 13 mm，0.45 pm 100/pk 色谱柱及保护柱 87003 超高效液相色谱柱 Endeavorsil C18 100×2.1 mm， 1.8 pm 北京：400-608-7719 上海：021-61263966 天津：400-633-6606 广州：020-85593520 货号 名称 规格 标准品 56-31667-250MG 氯霉素[56-75-7] 250 mg HPLC溶剂·缓冲盐•离子对试剂 50101 乙腈 HPLC及 4L 50138 乙酸铵 HPLC 级 100g 通用色谱产品 52401B 瓶架/蓝色 50 孔 52401A 瓶架/白色 50孔 5323 样品瓶(棕色/螺纹) 2mL， 100/pk 5325 样品瓶盖/含垫(已经组装) 100/pk 上海：021-61263966 广州：020-85593520 沈阳：024-22943513 青岛：0532-83725230 石家庄：0311-66686220 北京：都：庆：