化学药中特殊物质和基团检测方案

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采用静态顶空研究不同基体中的溶剂残留 应用报告 摘要 美国药典 (USP)<467>广泛应用于鉴别和定量医药产品中的有机军发性杂质(OVI)，所有这些有机挥发性杂质均为溶剂残留，由于这些残留对人体和环境均有伤害，故这些残留必须严格监控，该研究报告为采用 USP <467>方法，使用静态顶空和 GC/FID 检测不同基体中的挥发性有机物。 引言 USP <467>， 溶剂残留，允许制药厂商在检测医药产品时可选大量GC和顶空参数，其中一个参数为载气类型，氦气或者氮气，氮气相当来说价格较低，该报告为采用氦气和氮气作为顶空和气相载气来检测USP<467>第1类，2A和2B溶剂。 根据范德姆特方程，氮气的线速度与氦气有些差异，该报告将研究氮气在35cm/sec 和25cm/sec时检测USP溶剂残留时的影响。 分析方法精度将根据FDA有关于工业生物分析方法验证文件规定，五次分析结果变异系数小于15%，该报告采用7次USP标准浓度样品。 实验部分-仪器参数 Teledyne Tekmar Versa 全自动顶空进样器与GC (FID检测器)相连接。USP<467> G43色谱柱，，气相载气氦气和氮气线速度设置为35cm/sec，同时，根据范德姆特方程式GC氮气载气线速度设置为25 cm/sec 。 两种气体均在Versa and GC/FID 上使用，不同气体和流速的组合见下表， Versa参数见表2， GC/FID 参数见表3。 载气 线速度(cm/sec) GC线性尺寸(mm，inside) 实验 Versa GC/FID 1 氦气 氦气 35 1 2 氮气 氮气 35 1 3 氮气 氮气 25 1 4 氮气 氮气 25 3.5 5 氮气 氦气 35 3.5 Table 1：USP<467>气体实验不同气体和流量 采用静态顶空研究不同基体中的溶剂残留 Versa 顶空进样器参数 变量 Value 变量 Value GC 循环时间 65.00min 压力 11psig 阀加热温度 85℃ 加压时间 2.00min 传输管温度 85℃ 压力平衡时间 0.25min 滚筒/样品温度 80℃ 定量环填充压力 9psig 滚筒温度平衡时间 0.50min 定量环填充时间 2.00min 样品平衡时间 60.00min 进样时间 0.25min 混合 Off Table 2： Versa 参数 USP G43柱 624，30m， 0.32mm ID， 1.8um；氦气和氮气线速度 35cm/sec，氮气线速度25cm/sec 柱温箱程序 40 ℃20min； 10 ℃/min 至 240℃，保持20min， 运行60min 进样口 140℃，氦气或者氮气作为载气，吹扫流量为3.0mL/min FID 250℃，氢气流速40.0mL/min， 空气流速 400.0mL/min，补偿流量 30mL/min Table 3： GC/FID 参数 标准样品准备 Class 1， Class 2A 和 Class 2B USP溶剂示留标准从Restek 购买，二二基亚砜(DMSO) 99.5% 从Sigma-Aldrich 购买。 按照USP <467>步骤进行准备标液， 1.0mL of the Class 1 or 2A 加入含有5ml水的20ml顶空瓶， 5.0mL Class2B加入含有1.0ml水的顶空瓶。空白样品包括6.0ml水。 结果 所有峰面积数据都用于计算平均值和变异系数，[， 1，1，1-三氯乙烷在 Class 1 标准中信噪比小于5，满足USP<467>对于色谱系统要求。其他物质在 Class 1 标准中信噪比小于3，乙腈和二氯甲烷之间的分辨率不小于1. Table 4 为 Class 1 混合物不同实验的 CV数据。 Table 5 为 Class1混合物不同实验的信噪比。 Class 1 标准物质示例色谱图见 Figure 1. Table 6 为 Class 2A 混合物五组不同实验的变异系数。 Table 7 为 Class 2A 混合物不同实验是信噪比数据。Figure 2 为 Class 2A 混合物示例色谱图。 Table 8 Class 2B 混合物不同实验的变异系数。Figure 3 为 Class 2B混合物示例色谱图。 Figure 1： Class 1 标准物色谱图(相应峰数据见Tables 4 and 5) Class 1 Conc CV (n=6) for Gas Experiments Compound (ppm) 1 2 3 4 5 1，1-二氯乙烯I 0.07 0.99 5.73 2.29 2.74 2.12 1，1，1-三氯乙烷 0.08 1.45 4.80 2.32 2.76 1.35 四氯化碳’ 0.03 2.08 6.80 4.72 2.75 2.61 苯+ 0.02 1.49 5.02 2.35 3.54 2.02 1，2-二氯乙烷’ 0.04 1.72 7.28 5.28 4.05 2.72 Table 4： 采用G43 USP<467> 色谱柱Class 1化合物变异系数 (CV) Class 1 Conc S/N ratio for Gas Experiments Compound (ppm) 1 2 3 4 5 1，1-二氯乙烯 0.07 99.79 93.62 57.47 52.05 80.42 1，1，1-三氯乙烷” 0.08 80.11 68.36 57.53 45.32 70.20 四氯化碳 0.03 7.71 6.61 5.30 3.86 6.07 苯4 0.02 68.35 55.19 55.28 45.94 73.53 1.2-二氯乙烷5 0.04 27.16 21.66 27.98 22.61 34.42 Table 5： 采用G43 USP<467> 色谱柱Class1化合物信噪比(S/N) 采用静态顶空研究不同基体中的溶剂残留 Figure 2： Class 24 标准物色谱图(相应峰数据见Tables 6和7) Class 2 A Cone (ppm) CV (n=6) of Gas Experiment Compound 1 2 3 4 5 甲醇 25.00 1.41 2.38 3.04 2.04 1.65 乙腈’ 3.42 1.56 2.43 3.54 2.11 1.67 二氯甲烷 5.00 2.77 0.96 2.15 1.54 0.82 反式1，2-二氯乙烯” 7.83 3.21 0.71 2.10 2.01 0.94 顺-1，2-二氯乙烯 7.83 2.97 0.73 2.00 1.79 0.91 四氢呋喃" 5.475 1.25 2.44 3.27 1.47 1.26 环己烷² 32.33 7.19 2.35 2.67 4.48 1.20 甲基环己烷13 9.83 9.85 2.82 2.65 5.46 1.25 1，4-二氧己环14 3.17 1.48 2.72 3.93 3.60 2.24 甲苯15 7.42 1.99 0.60 1.91 2.42 1.03 氯苯16 3.00 1.82 0.62 1.92 2.47 0.99 乙苯1 3.07 4.17 0.57 2.10 3.50 1.13 间-，和对-二甲苯 10.85/2.53 4.15 0.55 2.07 3.44 1.14 邻二甲苯 1.63 3.66 0.54 2.01 3.33 1.20 Table 6： 采用G43 USP<467> 色谱柱Class 2A变异系数(CV) 采用静态顶空研究不同基体中的溶剂残留 Class 2A Resolution of Gas Experiment Compound 1 2 3 4 5 乙腈对二氯甲烷 1.1 1.1 1.3 1.3 1.2 Table 7：采用G43 USP<467>色谱柱乙腈和二氯甲烷在Class 2A 化合物中分辨率 Figure 3： Class 2B 标准物质色谱图(相应峰数据见Table8) Class2B Conc (ppm) CV (n=6) of Gas Experiment Compound 1 2 3 4 5 正己烷20 2.42 1.73 2.53 1.83 5.72 2.98 硝基甲烷2 0.42 1.93 0.99 1.14 3.34 1.58 氯仿”? 0.50 0.88 1.91 1.93 3.29 2.29 1，2-二甲氧基乙烷23 0.83 1.92 5.56 1.57 3.21 1.48 三氯乙烯24 0.67 1.18 1.76 2.33 4.18 2.86 吡啶2 1.67 5.53 5.19 10.38 11.38 10.10 2-己酮26 0.42 1.62 1.99 0.65 1.97 0.63 四氢萘” 0.83 1.52 2.45 2.08 3.21 2.71 Table 8： 采用 G43 USP<467>色谱柱 Class 2B 化合物变异系数(CV) 采用静态顶空研究不同基体中的溶剂残留 结论 实验结果表明，，\Versa可以为GC/FID 提供稳定，精确的样品，完全满足于USP<467>中化学溶剂残留测试。根据USP<467>，单纯改变气相参数会影响到溶剂残留CV， S/N和分辨率。该研究报告中还包括氦气和氮气作为载气的影响， 当采用氮气作为载气时线速度的影响。 所有变异系数均通过FDA规定要求小于15%，所有色谱数据均通过USP <467>要求的信噪比和分辨率。乙腈和二氯甲烷之间的分辨率随着气相载气氮气的线流速从35cm/sec 改变至 25cm/sec而增加。 该研究报告完全采用 USP <467>规定的其他参数，包括水中标准样品制备。 ( 参考文献 ) 1.A Guide to GC Setup，Restek， http：//www.chromspec.com/pdf/lit/rk19.pdf2 U.S. Department of Health and Human Services， Food and Drug Administration， Guidance for Industry，Bioanalytical Method Validation， May 2001， http：//www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/ucm070107.pdf