决明子中有效成分检测方案(液相色谱仪)

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高效液相色谱测定决明子中的有效成分 决明子为豆科决明属植物决明或者小决明的干燥成熟的种子，具有清热明目，润肠通便的功效。现代药理研究表明，决明子还具有降压、降血脂、抑菌、增强机体免疫力和抗衰老等多方面的作用。化学成分的研究表明，决明子中主要含有蒽醌类化合物。本文采用天津兰博高效液相色谱系统，建立了决明子中的3个蒽醌类化合物大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的检测方法。 1 测试条件 1.1 仪器 分析型高效液相色谱仪（HPLC），由AS1000自动进样器，Lablliance Series 高压泵、DAD检测器和Lablliance色谱工作站组成，配一支C18 Kromasil 色谱柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱温箱。 1.2试剂和样品 大黄素、大黄酚和大黄素甲醚标准品（中国药品生物制品检定所），甲醇（色谱纯），水为屈臣氏蒸馏水，其他试剂为分析纯，决明子样品购自当地药店，来源河北邯郸野生。 1.3标准溶液配制 精密称取对照品大黄素3.61 mg、大黄酚6.98 mg和大黄素甲醚7.12 mg，置于10 mL的容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，即得标准品溶液。 1.4供试品溶液的制备 取决明子粉末0.5 g，置于具塞锥形瓶中，加入50 mL甲醇，称定质量，置水浴上加热回流30 min，放冷，在称定质量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤。 精确移取滤液25 mL，蒸干，加10%盐酸溶液30 mL，置水浴中加热水解1 h，立即冷却，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30 mL，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）溶解，转移至10 mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得。 1.5色谱条件： 色谱柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)； 流动相：85%甲醇-0.1%磷酸水溶液（v/v） 柱温：28℃； 流速：1.0 mL/min； 检测波长：254 nm； 2测试结果： 2.1 标准品色谱图 按1.5的测试条件对3种标准品进行检测，所得色谱图如图1 所示。 图1标准品的高效液相色谱图 1 大黄素； 2 大黄酚； 3大黄素甲醚 2.2线性关系、方法检出限考察 分别精确移取3种标准品储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mL，于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样。以峰面积Y为纵坐标，浓度X（ug/mL）为横坐标，绘制标准曲线，的线性方程。大黄素：Y = 801 64 X - 2500.9，r = 0.9995，线性范围为3.61～36.1 ug/mL；大黄酚：Y = 9623.4 X + 5064，r = 0.9994，线性范围为6.98～69.8 ug/mL大黄素甲醚：Y = 12684X + 8264.4，r = 0.9994，线性范围为7.12～71.2 ug/mL。 2.3稳定性实验 取供试品溶液分别在0、2、4、8、12 h进样—（不测时于冰箱4℃冷藏），测定峰面积。结果表明，供试品溶液在12h内稳定性良好，大黄素、大黄酚、大黄素甲醚峰面积的RSD分别为0.96、1.02、1.39。 2.4精密度和重现性实验 取供试品溶液重复进样6次，每次20 mL，测定峰面积。大黄素、大黄酚和大黄素甲醚6次，峰面积测定结果的RSD分别为1.32%，0.55% 和0.79%，表明方法精密度良好 。 取样品粉末，按1.4条件制备6份供试品溶液，分别进样20 mL，测定峰面积，计算3种成分的含量。大黄素、大黄酚和大黄素甲醚6次，含量测定结果的 RSD分别为2.31%，1.56% 和1.87%，表明方法重复性良好。 2.5回收率实验 采用加样回收试验法。精密样品粉末6份，各约0.25 g，分别精密加入一定量的大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品混合溶液(含大黄素0.101 mg、大黄酚0.301 mg和大黄素甲醚0.213 mg)，按1.4项下方法制备供试品溶液，测定各成分峰面积，根据加入量和测得量，计算回收率。结果大黄素的平均回收率为98.21%，RSD=1.08%；大黄酚的平均回收率为97.64%，RSD=0.79%；大黄素甲醚的平均回收率为98.21%，RSD=1.10%。 3结论 本研究建立了同时测定决明子中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的高效液相 色谱法。该法结果准确，且具有良好的重现性，为决明子药材的质量控制研究提供有效方法 。