肉制品中农兽药残留检测方案

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Best ValueGuaranteed Product Quality应用编号： AF10034 Agela Technologies 猪肉中己烯雌酚残留量检测 LC-MS/MS法 己烯雌酚(Stilbestrol)是人工合成的非甾体雌激素物质，能产生与天然雌二醇相同的所有药理与治疗作用。主要用于雌激素低下症及激素平衡失调引起的功能性出血、闭经，还可用于死胎引产前，以提高子宫肌层对催产素的敏感性。孕妇服用此药，其女性后代在青春期后宫颈和阴道的腺病及腺癌发生率升高，男性后代生殖道异常和精子异常发生率也增加。己烯雌酚可导致恶心，呕吐，食欲不振，头痛等症状，长期使用可使子宫内膜增生过度而致子宫出血和肥大。 国标中规定了在牛猪肝肾和肌肉组织中己烯雌酚方法检出限为1.0 ug/kg。 1.样品提取 称取5.00 g(精确到0.01g)均质好的样品，置于50.0 mL离心管中，加入15.00 mL 叔丁基甲基醚，涡旋1 min， 振荡10 min， 在-4℃下以6000 rpm离心5 min， 取上清液转入浓缩瓶中；用15.00 mL叔丁基甲基醚再提取一次，合并提取液，45℃水浴中减压悬蒸浓缩至干。加80%乙腈溶液2 mL于浓缩瓶中，旋旋溶解残留物，然后将其转移至10 mL离心管中；再加入正己烷5 mL于浓缩瓶中洗涤，一并转移至离心管中，震荡混合1 min， 在15℃以6000 rpm离心10 min，弃去上清液。再加正己烷5 mL于离心管中同法操作，留下层备用。 2.净化方法 先将Cleanert" PEP-2 (500mg/6mL)小柱用3mL叔丁基甲基醚、3 mL甲醇和3mL水活化平衡，取上述下层溶液，以每3~4秒1滴的流速通过预处理后的固相萃取柱；先用甲醇：水(3：7， v/v)溶液3 mL冲洗，然后加水3 mL平衡，再用甲醇：2%氨水(1：9，v/v)溶液3 mL冲洗，弃去洗液，抽干。用0.1%甲酸/甲醇：叔丁基甲基醚(1：9， v/v)溶液7mL洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，用80%乙腈水1mL溶解残余物，充分涡旋，过0.22um滤膜，滤液供高效液相色谱-串联质谱仪测定。 3.检测方法 3.1色谱条件色谱柱： Venusil MPC18， 2.1×50mm， 2.5 um， 100A；流动相：A相-水，B相-乙腈柱 温：35℃；进样量：5pL；梯度洗脱：见表1 表1液相色谱梯度洗脱条件 时间(min) 流速(mL/min) A/% B/% 0.00 0.35 85.0 15.0 1.50 0.35 85.0 15.0 4.00 0.35 10.0 90.0 5.00 0.35 10.0 90.0 5.01 0.35 85.0 15.0 7.00 0.35 85.0 15.0 3.2质谱条件 离子源：电喷雾离子源；扫描方式：负离子扫描； 电喷雾电压： -5500V； 雾化气压力：55psi； 气帘气压力：12 psi； 辅助气压力：50 psi； 离子源温度：550℃； 采集方式：多反应监测(MRM)； Q1、Q3均为单位分辨率，质谱参数(见表2) 表2己烯雌酚的质谱参数 化合物 Q1 Q3 CE/V 己烯雌酚 (Diethylstilbestrol) 267.1 251.2 -36.5 221.9 -47.0 4.实验结果 由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测则烯雌酚，加标量为2.5 pg/kg、25.0 ug/kg， 回收率在80%~96%之间， RSD值在2.26%~8.95%之间，能够满足检测要求。由图1和图2可看出经Cleanert"PEP-2固相萃取柱净化，采用Venusil" MP C18色谱柱检测得到的己烯雌酚峰形良好，且保留时间稳定。 表3己烯雌酚加标回收实验结果(n=3) 物质名称 加标量/(ug/kg) 处理加标回收率/% RSD/% RT/min 己烯雌酚 (Diethylstilbestrol) 2.5 95.58 2.26 3.30 25 83.56 8.95 图1己烯雌酚样品加标2.5 ug/kg 液相色谱/串联质谱质量色谱图 图2己烯雌酚样品加标 25 pg/kg 液相色谱/串联质谱质量色谱图 结论： 本实验建立了己烯烯酚残留量检测的LC-MS/MS检测方法，并结合固相萃取技术对猪肉中己烯雌酚的残留量进行了测定。对于加标量为2.5 ug/kg、25.0 ug/kg的样品进行了检测，回收率在80%~96%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中的己烯雌酚残留量。 产品名称 规格包装 订货号 VenusilMP C18 2.5um，100A，2.1×50mm VA920502-0 CleanertPEP-2 500mg/6mL，30/pk PE5006-2 保护柱套 适用于4.6×10mm和2.1×10mm SH-100 直联式保护柱芯 2.5um，100A，2.1×10mm VA920102-0S 1.5mL样品瓶 短螺纹透明带书写 32×11.6mm，100/pk 1109-0519 1.5mL样品瓶盖 9mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE隔垫，45. Shore A 1.0 mm，100/pk 0915-1819 针式过滤器(Nylon) 13mm，0.22um，200/pk AS021320 一次性注射器 2mL两件式无针头，100/pk LZSQ-2ML 乙腈UV级 4L/瓶，色谱纯 015-4 正己烷HPLC 4L/瓶，色谱屯 AH216-4 甲醇 4L/瓶，色谱纯 S230-4 己烯雌酚 标准品，100mg GBW(E)060984 本手册所有应用均可在博纳艾杰尔官方网站以应用编号搜索下载! www.agela.com.cn—