罗非鱼中硝基呋喃代谢物检测方案(液相色谱柱)

智能文字提取功能测试中

Agilent 6410 串联四极杆质谱分析罗非鱼中的硝基呋喃代谢物 本文使用Agilent 6410 串联四极杆质谱对肉类和肉制品中的禁用物物硝基呋喃类抗生素进行 LC/MS/MS分析，所建立的方法对选用的四个化合物具有很高的灵敏度。最低检测限达到0.01 ppb(10 ppt)。研究按照欧盟的分析方法指标认证标准，建立了0.05 ppb~10 ppb 浓度范围的标准定量曲线。以罗非鱼提取物为研究对象，考察 LC/MS/MS技术用于水产品中分析硝基呋喃的性能。 引言 硝基呋喃类药物是一种革兰氏阳性和阴性菌的抗生素，价格低廉，用于治疗牲畜和鱼类的肠道和皮肤感染。此类药物因其母体及其代谢物都有致癌作用，因此在全世界范围内被禁止使用。但是，2005年食品与饲料快速警报系统的年报[1]显示，在很多的食物样品中仍检测到了这类物质的存在。它们所带来的食品安全问题依旧是需要关注的。呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥英和呋喃西林的代谢迅速，且代谢物都与肌肉组织结合紧密，因此，需要在动物源的样品中检测这些药物的代谢产物。 欧盟(EU)制订的动物及动物制品中的兽药检测和认证标准[2]已被世界上的大部分国家和地区所接受。该标准要求分离技术和光谱测定技术进行联用。对于禁用物质如硝基呋喃类化合物，该标准不设定残留量上限(MRL)，每个代谢物的最低性能极限要求(MRPL)设为1g/kg [3]。能够满足这一标准的只有 LC/MS 技术，并且也有多篇相关的文献报道[4-6]。但是，目前此类研究应用最多的是三重串 联四极杆质谱技术。本文将首次采用新型Agilent串联四极杆 LC/MS 系统进行这些代谢物的分析。 实验部分 化学品 硝基呋喃代谢物的衍生物对照品以及样品制备中使用的化学药品均来自-一家食品生产公司。乙腈(HPLC级)和甲酸(Reagent级)均来自Merck 公司(Darmstadt，德国)。 样品制备 将2g罗非鱼置入15 mL 0.125M的盐酸中，混匀。加加50cL的50mM硝基苯乙醛(2-NBA)的DMSO 溶液，震荡后将溶液在37℃条件下加热16小时。然后以NaOH和K，HPO4中和至pH~7。中和后的衍生化样品以乙酸乙酯提取，浓缩至干，再以100 oL 的起始液相色谱流动相溶解。将四种代谢物加入 0.125M的盐酸中，以上述方法进行衍生化和提取，得标准样品用于定量曲线的测定。 LC/MS/MS 方法 LC条件 仪器： Agilent 1100 LC 色谱柱： C18，2.1mm x 150mm， 3cm 柱温： 40℃ 流动相： A=0.1%甲酸水溶液 B=乙腈 洗脱梯度： 起始22%B， 6 min 99%B， 9 min 99%B 流速： 0.3 mL/min 进样量： 50odL MS 条件 仪器： Agilent 6410 型 LC/MS三重串联四极杆系统离子化方式： ESI正离子模式干燥气流速： 10 L/min雾化器： 35 psig干燥气温度： 350℃ Vcap： 4000V 结果与讨论 考虑到四个代谢物， Aminohydantoin (AH)、3-amino-5-morpolinomethyl-2-oxazolidinone(AMOZ)， 3-amino-2-oxazolidinone (AOZ)的衍生化和提取都必须满足1 ppb 的检测限，仪器的灵敏度是该方法中重要的性能参数。本文分析了0.01 ppb的各代谢物的2-NBA 衍生物，见图1。图中列出了 各代谢物的衍生物的结构，每个信噪比都大于3。 本分析方法的另一个重要指标是线性。图2是每个代谢物的50 ppt 到 10 ppb 浓度范围的标准曲线。 含硝基呋喃类药物的鱼的处理一直是食品安全和欧盟成员国进口的难题。为了测试Agilent 三重串联四极杆LC/MS 在该检测中的应用，本文将四种代谢物注入罗非鱼中，经水解，衍生化和提取后进行分析。图3是500 ppt 罗非鱼提取物的图谱。由图可见，所得信号远远低于 MRPL。除了满足灵敏度要求外，本研究还必须达到认证标准，要求保留时间与对照品一致，并且定性离子的相对强度比在规定的偏差范围内。偏差范围的设定通过分析对照品，根据其强度比的增减获得。范围从20%到50%，前者对应于相对强度比大于 0.5%的离子，相对强度比低于 0.1%的离子则适用于后者。 串联质谱的参数多反应监测模式参数 图1.含量分别 10 ppt MRM提取离子流图A)2-NBA AMOZ，D) 2-NBA-A0Z 图2.硝基呋喃类代谢物谢定量标准曲线，线性范围 50 ppt-10 ppb 图3.加标罗非鱼样品提取物，每种代谢物0.5 ppb 更多信息 结论 本研究表明，Agilent 6410 串联四极杆质谱可以快速高灵敏度地分析鱼肉中的硝基呋喃代谢物，其系统性能完全满足欧盟委员会的要求。同时，该系统配置了先进的定量计算软件，能够按照欧盟委员会的规定，计算验证指标并提供相关报告。 如需了解本公司产品和服务的更多信息，请访问本公司网站www.agilent.com/chem/cn。