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蛋白聚集体中分子量、聚集体检测方案(凝胶色谱仪)

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使用了美国怀雅特技术公司的MALS（DAWN HELEOS）与Optilab rEX 检测器以及UV 检测器联，来监测不同流动相中蛋白聚集体的状态。使用这些检测器，可以追踪蛋白随盐浓度和缓冲液条件的改变而发生的变化，这有利于我们更深入了解我们所要研究的蛋白的性质和可预测性

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本应用文摘中，我们使用了美国怀雅特技术公司的 MALS (DAWN HELEOS)与 Optilab rEX 检测器以及 UV 检测器联，来监测不同流动相中蛋白聚集体的状态。使用这些检测器，可以追踪蛋白随盐浓度和缓冲液条件的改变而发生的变化，这有利于我们更深入了解我们所要研究的蛋白的性质和可预测性。 HPLC 的条件如下：日本TOSOH 的TSK-gel G3000SW凝胶色谱柱， PBS均一流动相，泵的流速是1ml/min，样品采集时间30min。在进样之前，我们将所要研究的蛋白透析至不同的缓冲液中，缓冲液的盐浓度从150mM 到500mM，缓冲液体系的PH从5到8.5。两张图上中的黄色三角形组成的曲线是未处理过的蛋白样品，这个实验表明，有些缓冲液会明显改变蛋白中的聚集体数目。不同状态的蛋白经 SEC-HPLC 分离成多个峰，同时 MALS 会计算出这些峰对应的分子量。MALS 计算出的分子量与我们对这一蛋白的单体，二聚体，三聚体以及寡聚体的预期高度一致。正如预期一样，在大部分缓冲液体系中，蛋白的性质与未处理蛋白类似。但是，意外的是，在一一一对缓冲液中，蛋白的分子量要比我们预期的高或者低，表明蛋白亚基的解离还是聚集具有盐浓度或者 pH 依赖性。这一实验，证明一些缓冲液可以明显改变蛋白的聚集体状态(其中两张图中黄色三角形标志组成的曲线代表的是未处理的蛋白)。而且在线 MALS测得的分子量可以帮助研究者更准确的解读 SEC 的结果。 This note graciously submitted by Zhong-Fu Huang， Boehringer-Ingelheim Pharmaceutical， Inc.， Ridgefi eld， CT 06877

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