农药中对映体杂质检测方案(超临界色谱)

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SSL-CA14-382 Excellence in ScienceSFC-007 上海市淮海西路570号红坊E楼 咨询电话：021-22013542http：//www.shimadzu.com.cn SFC 在农药戊唑醇手性杂质拆分中的应用 SFC-007 摘要：本实验使用岛津 Nexera UC SFC-UV 系统对农药戊唑醇异构体进行拆分。考察了色谱柱、改性剂、温度及压力对分离的影响。结果表明， 使用 ChiralPak IE-3色谱主及10%乙醇改性剂条件可以获得良好分离效果，戊唑醇异构体分离度可达到4.27。 关键词： Nexera UC SFC戊唑醇药物杂质手性拆分 含手性特征的化学药物的对映体在人体内或动物体内的药理活性、代谢过程及毒性存在显著的差异。对于手性药物，个异构体可能是有效的，而另一个异构体可能是无效甚至是有害的。当前手性药物的研究已成为国际新药研究的主要方向之 超临界流体色谱(Supercritical FluidChromatography， SFC) 是以超临界流体为主要流动相，具有低黏度、高扩散性和高溶解性等特点，使得 SFC 分析具有快速、高效、高分离等优势。 戊唑醇是一种广谱高效的杀菌剂，既可对植物体外部的病原菌有防治作用，也可以随着在植物体内部的传导杀死内部病 原菌。戊唑醇分子中含有一个手性中心，含一对对应异构体(图1)，文献报道其对映体的抗菌活性存在明显差异，得到单一构型的戊唑醇很有必要。 图1戊唑醇结构式 本文使用岛津 Nexera UC SFC-UV系统，对戊唑醇的两个异构体进行分离，考察了色谱柱、改性剂、柱温及压力对分离的影响。 1.1 仪器 Nexera UC SFC-UV 系统 具体配置为： LC-30ADsF (CO2输液泵)， LC-30AD(输液泵)， DGU-20A5+DGU-20A3(在线脱气机)， SIL-30AC(自动进样器)， CTO-20AC(柱温箱)， SFC-30A(背压调节单元)，SPD-M20A(紫外检测器)， CBM-20A(系统控制器)， LabSolutions Ver.5.81(色谱工作站)。 1.2样品信息 称取一定量戊唑醇加入异丙醇，超声至完全溶解，并用0.45 um 的 PTFE 针式滤器过 图26种键合型手性色谱柱使用乙醇、异丙醇和甲醇改性剂时的分离效果对比图(214nm) 滤得到2 mg/mL 的戊唑醇样品溶液，上机分析。 结果与讨论 2.1色谱柱填料对分离的影响 手性物质的拆分，色谱柱的类型选择十分重要。实验考察了 Daicel 的6款键合型手性色谱柱IA-3、IC-3、ID-3、IE-3、IF-3、IG-3，所用规格均为4.6 mm I.D.x150 mm L.，3um。在 scCO2-MeOH、scCO2-EtOH、scCO2-IPA 体系中对戊唑醇样品进行分析由上图可知，本例中异丙醇作为改性剂时待测物在各种固定相上表现均不佳，对比6种手性固定相发现， IE-3型在乙醇和甲醇作为改性剂时均可表现出良好的峰形和分离度。 2.2改性剂对分离的影响 手性物质的拆分，改性剂的种类和比例影响仅次于固定相。选择在2.1考察结果中表现良好的 Daicel IE-3 和乙醇改性剂，考察不同比例的乙醇对分离的影响。结果显示当减少改性剂乙醇的比例时，样品的保留时间延长同时分离度增大(见图6)，综合考虑分离结果，选择乙醇改性剂的加入比例为10%。 a04V(x100，000) 图3不同比例改性剂分离效果对比图 2.3柱温对分离的影响 改变色谱柱的温度可以改变超临界流体的粘度从而对分离产生影响。本文考察了柱温分别为40℃、35℃和30℃对分离的影响，结果显示保留时间和分离度均随着温度的升高而减小(见图4)。 图4不同柱温下分离效果对比图 2.4背压对分离的影响 本文考察了背压分别为10MPa、15 MPa、20MPa 和 25 MPa 对分离的影响，结果显示随着背压的增加，超临界流体密度增大，洗脱能力增强，表现为色谱峰保留时间减小，拖尾减弱。 图5不同背压下分离效果对比图 综合考虑分离度、分析时间、色谱柱压力等因素，最终确定分析条件如下： SFC 色谱条件 色谱柱 ChiralPak IE-3 4.6mm I.D.x150 mm L.，3 um 流动相 scCO2/乙醇=90/10 流速 2 mL/min 柱温 35℃ 检测波长 214nm 背压 10 MPa 进样量 3 uL 图6 确定条件下戊唑醇样品拆分的色谱图 结论 本文使用岛津 Nexera UC SFC-UV 系统对戊唑醇的两个对映异构体的拆分参数条件进行了研究。优化了色谱柱、改性剂类型及比例、柱温、背压等参数，最终确立了两个对映异构体拆分的最优条件。由于 SFC 分析有有快速、高效、高分离等优势，使得其在手性拆分方面有广阔的应用前景。 本文与大赛璐药物手性技术(上海)有限公司合作完成。 岛津全球应用技术开发支持中心  本实验使用岛津Nexera UC SFC-UV系统对农药戊唑醇异构体进行拆分。考察了色谱柱、改性剂、温度及压力对分离的影响。结果表明，使用ChiralPak IE-3色谱柱及10%乙醇改性剂条件可以获得良好分离效果，戊唑醇异构体分离度可达到4.27。