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SSL-CA14-242 Excellence in ScienceLCMSMS-223 上海市淮海西路570号红坊E楼咨询电话:021-22013542http://www.shimadzu.com.cn LC/MS-8060)测定全血中百草枯和氯化琥珀胆碱 LCMSMS-223 摘要::本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪 LCMS-8060 联用测定全血中百草枯和氯化琥珀胆碱含量的方法。该方法在 10 min 内完成分析,线性良好,判定系数大于0.9988。对 1.0 ng/mL 全血基质加标溶液平行测试6次,保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.08~0.09%和2.56~3.19%之间,仪器精密度良好。百草枯和氯化琥珀胆碱检出限分别为 0.003和0.007 ng/mL, 定量限分别为 0.01 和0.02 ng/mL, 灵敏度良好。该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好的优势,可用于全血样品中百草枯和氯化琥珀胆碱的检测。 关键词: 三重四极杆质谱 百草枯 氯化琥珀胆碱 全血 百草枯(Paraquat,PQ)是目前世界上最受欢迎的除草剂之一。其纯品极性较大,易溶于水,稍溶于丙酮和乙醇,在碱性介质中不稳定。百草枯对人、畜均有较强的毒性作用。临床发生中毒事件后,常常需要在短时间内做出诊断,以利于尽早救治。建立快速分析方法对临床诊断、治疗以及刑事法医鉴定有十分重要的意义。 氯化琥珀胆碱( suxamethonium chloride, SUX) 又称司可林,在水中极易溶解,水溶液呈酸性,在乙醇或氯仿中微溶,在乙醚中不溶。SUX是一种去极化型肌肉松弛药,作为手术麻醉辅助药,用于 术中维持肌松和插管。近年来,利用氯化琥珀胆碱起效快、毒性大的特点,制成飞镖等工具用于麻醉抢劫、非法盗猎的案件越来越多,迫切需要建立快速的检验方法用于刑事侦查和法医鉴定。 面对百草枯和氯化琥珀胆碱的人体中毒事件,液相色谱-串联质谱法由于其快速、灵敏度高、可以准确定性等优点,成为检测此类物质的首选。本文利用岛津LCMS-8060,使用HILIC色谱柱克服此类化合物保留差的问题,建立了全血中百草枯和氯化琥珀胆碱的快速、高灵敏度的同时检测方法。 1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A 与三重四极杆质谱仪 LCMS-8060联用系统。具体配置为 LC-30AD×2输液泵, DGU-20A5在线脱气机, SIL-30ACMP 自动进样器, CTO-30AC柱温箱, CBM-20A系统控制器,LCMS-8060 三重四极杆质谱仪, LabSolutions Ver. 5.80色谱工作站。 液相条件 色谱柱: PC HILIC 150×2.0 i.d mm, 3 um 流动相:A 相-水+0.1%甲酸+10 mM 乙酸铵,B相-乙腈 流速:0.4 mL/min 柱温:35℃ 进样量:5uL 洗针方式: Rinse Pump>Rinse Port, Rinse Pump 洗针液为乙腈/异丙醇/甲醇/水/甲酸=25:25:25:24.5:0.5(v/v/v/v/v); Rinse Port洗针液为50%甲醇水溶液 进样小瓶:PP材质小瓶(低吸附) 洗脱方式:梯度洗脱,B相初始浓度为70%,洗脱程序见表1。 表1梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value 2.00 Pumps Pump B Conc. 70 2.10 Pumps Pump B Conc. 30 5.00 Pumps Pump B Conc. 30 5.10 Pumps Pump B Conc. 70 10.00 Controller Stop 质谱条件 离子化模式: ESI(+)加热气:空气10.0 L/min雾化气:氮气3.0 L/min干燥气:氮气10.0 L/min扫描模式:多反应监测(MRM)驻留时间:40 ms 碰撞气:氩气 接口温度:300℃DL温度:200℃加热模块温度:300℃ 延迟时间:3 ms MRM参数:见表2 表2MRM优化参数 化合物 英文名 CASNo. 前体离子 产物离子 Q1 Pre CE (V) Q3 Pre Bias (V) Bias (V) 百草枯 paraquat dichloride 1910-42-5 186.1 171.2° -20.0 -21.0 -22.0 77.2 -13.0 -46.0 -30.0 氯化琥 suxamethonium 71-27-2 145.2 65.8* -20.0 -21.0 -22.0 珀胆碱 chloride 115.8 -13.0 -38.0 -17.0 注:*表示定量离子 1.3标准品溶液的配制 标准工作溶液配制:将标准品用甲醇溶解至1000.0 ug/mL,使用甲醇稀释得到1.0、2.0、4.0、10.0、20.0、40.0、50.0、200.0、400.0、2000.0 ng/mL的工作溶液备用。 1.4样品前处理方法 取全血1ml加入4mL乙腈,涡旋振荡混匀后,4℃、12000 rpm 离心30 min, 取上清液待用。 结果与讨论 2.1标准样品 MRM色普图 图1标准样品色谱图(浓度0.5 ng/mL) 2.2线性范围 取空白全血添加混合工作液,得到0.05、0.1、0.5、1、5、10、50、100 ng/mL 不同浓度的样品,按1.4步骤处理后上机分析测定,外标法定量。以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制校准曲线如图2所示,线性方程、线性范围和相关系数结果见表3。 图2 百草枯和氯化琥珀胆碱校准曲线 表3 校准曲线参数 名称 校准曲线 线性范围(ng/mL) 判定系数R² 准确度(%) 百草枯 Y=(52178.4)X+(71382.7) 0.05-50 0.9988 87.1~105.1 氯化琥珀胆碱 Y=(146231)X+(673405) 0.1-100 0.9997 86.2~106.7 2.3精密度实验 对 1.0 ng/mL 浓度的全血基质加标液连续6次进样,考察仪器的重复性,保留时间和 峰面积的重复性结果如表4所示。仪器重复性良好。 表4保留时间和峰面积重复性结果(n=6) 样品名称 RSD% R.T Area 百草枯 0.09 3.19 氯化琥珀胆碱 0.08 2.56 2.4灵敏度实验 对浓度为0.05 ng/mL 溶液进样分析,百草枯和氯化琥珀胆碱的最低检出限(S/N=3, LOD表示)、最低定量限(S/N=10, LOQ表示)结果如表5所示。 表5 检出限和定量限 名称 检出限(ng/mL) 定量限(ng/mL) 百草枯 0.003 0.01 氯化琥珀胆碱 0.007 0.02 2.5基质效应 取空白全血配制成低、中、高3个浓度(0.1、1.0、50.0ng/mL),按照1.4步骤操作,得到峰面积A1,测得0.1、1.0、50.0 ng/mL 浓度工作液的峰面积A2。基质效应 M=A1/A2*100%,计算结果见表6。结果表明,本实验建立的方法不存在明显的基质效应。 表6 基质效应考察 基质效应(%) 浓度(ng/mL) 0.1 1.0 50.0 百草枯 95.3 96.3 105.2 氯化琥珀胆碱 96.4 95.6 103.2 ■结论 本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 和三重四极杆质谱仪 LCMS-8060联用测定全血中百草枯和氯化琥珀胆碱的方法。该方法在 10 min 内完成分析,线性良好,对 1.0 ng/mL 全血基质加标溶液平行测试6次,保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.08~0.09%和2.56~3.19%之间,仪器精密度良好。百草枯和氯化琥珀胆碱检出限分别为0.003 和0.007 ng/mL, 定量限分别为0.01 和 0.02 ng/mL, 灵敏度良好。该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好的优势,可用于全血样品中百草枯和氯化琥珀胆碱的检测。 田1岛津全球应用技术开发支持中心 面对百草枯和氯化琥珀胆碱的人体中毒事件,液相色谱-串联质谱法由于其快速、灵敏度高、可以准确定性等优点,成为检测此类物质的首选。本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8060联用测定全血中百草枯和氯化琥珀胆碱的方法。该方法在10 min内完成分析,线性良好,对1.0 ng/mL全血基质加标溶液平行测试6次,保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.08 ~ 0.09%和2.56 ~ 3.19%之间,仪器精密度良好。百草枯和氯化琥珀胆碱检出限分别为0.003和0.007 ng/mL,定量限分别为0.01和0.02 ng/mL,灵敏度良好。该方法具有分析速度快、灵敏度高、重复性好的优势,可用于全血样品中百草枯和氯化琥珀胆碱的检测。
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岛津企业管理(中国)有限公司为您提供《全血中百草枯和氯化琥珀胆碱检测方案(液质联用仪)》,该方案主要用于全血/血清/血浆中百草枯和氯化琥珀胆碱检测,参考标准《暂无》,《全血中百草枯和氯化琥珀胆碱检测方案(液质联用仪)》用到的仪器有岛津三重四极杆液质谱联用仪LCMS-8050。
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