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中药材 Joumnal of Chinese MedicinalMaterials 第30卷第8期2007年8月·1035· ( 参 考 文 献 ) ( [1]罗晋萍,张中苏,田晨.高效液相色谱法测定桂龙咳喘 宁胶囊中肉桂酸的含量.药物分析杂志,2000,20(3): 200-201 . ) ( [2]李 静,朱日然,李启艳,等.HPLC法测定养心定悸口 服液中肉桂酸的含量.实用 医 技杂志,2005,11(12): 3251-3252. ) ( [3]李颖,阳长明.反相高效液相色谱法测定胸舒颗粒剂中 ) ( 肉桂酸的含量.湖南中医杂志,2000,16(3):70. ) ( [4]徐向阳,张蕙,陈希.HPLC法测定脉络宁口服液中肉桂酸的含量.江苏药学与临床研究,2003,11(1):14-16. ) ( [5]徐向阳,张蕙,陈希 .RP-HPLC法测定利咽灵片中肉桂 酸的含量.药物分析杂志,2005,25(2):235-236. ) ( [6]黄晓红,宋宗毕,李秀琴,等 .RP-HPLC测定苓桂术甘方 中肉桂酸的含量.中成药,2002,24(10):764-766 ) ( (2006-12-19收稿) ) HPCE法定定拈痛丸中盐酸小檗碱的含量 汤佩莲,龚红全,宋粉云 (广东药学院,广东广州510224) 摘要 目的:建立拈痛丸中盐酸小檗碱含量测定的毛细管电泳法。方法:采用毛细管区带电泳和紫外检测模式测定,电泳条件:60 mmol/LNaHPO4溶液甲醇(6535)为电泳介质,未涂层弹性融硅石英毛细管柱(46 cm X50um)为分离通道,重力方式进样,室温下 27 kV恒压电泳分离,335 mm紫外检测。结果:盐酸小檗碱在4.95~59.4ug/ml浓度范围内线性关系良好,平均回收率为101.1%,方法精密度(RSD)为2.75%(n=6)。结论:该法可用于拈痛丸中盐酸小檗碱的含量测定。 关键词拈痛丸;盐酸小檗碱;毛细管电泳法;含量测定 中图分类号:R286.02 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2007)08-1035-02 拈痛丸为香港注册的中药成方制剂,由广蕾香、延胡索、厚朴、黄连等18味中药制成,具有解表化湿,理气和胃,燥湿除满,温中止痛之功效。临床用于治疗外感风邪,湿滞困阻所致的恶寒发热,腹痛吐泻,头晕目眩,身体上下诸痛;兼治因寒湿气滞所致的脘腹胀痛,不思饮食。中国药典(2005年版)一部附录中新增加了毛细管电泳法(HPCE),使其成为中药含量测定的法定方法,但尚未有以毛细管电泳法进行含量测定的品种。本实验采用毛细管区带电泳法测定拈痛丸中盐酸小檗碱的含量,简便、快捷、经济,可用于拈痛丸的质量控制。 仪器和试药 CL1030型高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司),德国 KNAUER K-2510紫外可见检测器,HW-2000色谱工作站2.17版(南京千谱软件有限公司)。DL-360超声波清洗器(宁波石浦海天电子仪器厂),工作频率4.5KHz ±5%,输出功率240W。未涂层弹性融硅石英毛细管柱(50um D,总长54 cm,有效长度46 cm,河北锐年永沣色谱器件有限公司)。 ( 基金项目:广东省自然科学基金资助项目(No.5002841) ) ( 作者简介:汤佩莲,主管药师,主要从事医院药学工作。 ) ( 通讯作者:宋粉云。 ) 盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所,110713-200208);痛丸(中港药业公司,每包1g,每盒12包);Na HPONaOH、甲醇等均为分析纯,水为二次蒸馏水。 2 实验部分 2.1 溶液的制备 2.1.1 .缓冲液:取NaHPO适量配制60mmol/I贮备液。临用时配成60 mmol/L Na HPO4溶液甲醇(6535)的电泳介质。 2.1.2 对照品溶液的制备:精密密取在100℃干燥5h的盐酸小檗碱对照品19.8mg,置200 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液(盐酸小檗碱浓度为99ug/ml). 2.1.3 供试品溶液的制备:取对痛丸样品10包,研碎,取约1.5 g,精密称定,置100ml量瓶中,加入盐酸甲醇(1:100)约 95 ml, 60℃水浴中加热15min,取出,超声处理 30min,室温放置过夜,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,续滤液0.45pn滤膜过滤,作为供试品溶液。 2.1.4 阴性对照液的制备:取处方组成中除黄连 外的其余成分制成不含黄连的阴性对照品,按“2.1.3"项下的制备方法处理得阴性对照液。 2.2 电泳条件 以60 mmol/L Na HPO溶液甲醇(6535)为电泳介质,未涂层弹性融硅石英毛细管柱(46 cm X50 {m)为分离通道。采用重力方式进样,进样时间为10s.室温下 27kV恒压电泳分离,335 nm 紫外检测。毛细管柱在使用前依次用0.1mol/L NaOH溶液、水、电泳介质各冲洗约 5min。每二次进样间用电泳介质冲柱2min。当基线不稳,出小杂峰时更换缓冲液,换后电平衡5min左右。在此条件下,盐酸小檗碱的保留时间约为4.2min. 2.3 方法学考察 2.3.1 标准曲线制备:分别吸取一定量的盐酸小檗碱对照品贮备液,加甲醇稀释成盐酸小檗碱浓度为4.95、9.9、19.8、29.7、39.6、49.5、59.4ug/ml的溶液。依次进样10s,每个浓度测定3次以上。以峰高(A)对对照品溶液系列浓度(C)进行回归,得盐酸小檗碱回归方程A=-8.32+56.48C,相关系数r=0.9994。表明盐酸小檗碱浓度在4.95~59.4ug/ml之间与峰面积线性关系良好。 2.3.2 精密度试验:取浓度为29.7ug/ml的盐酸小檗碱对照品溶液进样10s,连续测定5次,其峰高的平均值为1640,RSD 为 2.18%,表明仪器精密度良好。 2.3.3 稳定性试验:取供试品溶液(CK20060201)在 0,2,4,6,8h分别进样10s,记录峰高,结果盐酸小檗碱峰高的 1677,RSD为 2.72%,表明供试品溶液在8h内稳定。 2.3.4 重复性试验:取同一批号(CK20060201)样品6份,照“2.1.3”方法提取、测定,结果盐酸小檗碱平均含量为1.988 mg/g, RSD 为 2.75%。表明分析方法精密度良好。 2.3.5 加样回收试验:精密称取同一批号样品(CK20060201)共6份,加入相应量的盐酸小檗碱对照品,照“2.1.3"方法处理并测定,计算回收率,结果见表1.盐酸小檗碱平均回收率为101.1%,RSD=2.93%。结果表明本方法准确可靠。 2.4 样品测定 取拈痛丸样品3批,照“2.1.3”方法制备供试品溶液,分别取对照品溶液(29.7pg/ml与供试品溶液各进样10s,测定,计算样品中盐酸小檗碱的含量,并与 HPLC法含量测定结果相比较,结果见表1. 表 1 样品测定结果(n=3) 批号 HPCE HPLC 盐酸小檗 RSD 盐酸小檗 RSD 碱含量 碱含量 (%) (%) (mg/g) (mg/g) CK20060201 1.988 2.75 1.914 0.85 CK20060701 1.965 2.13 2.208 1.34 CK20060801 1.975 2.69 2.063 0.72 讨论 3.1 缓冲溶液的选择 选用60 mmol/L Na HPO为电泳介质,电流过大,加有改性剂甲醇减少了电流;并且改善了峰形,所以最后确定为60 mmol/LNaHPO溶液甲醇(6535)为电泳介质。 3.2 进样时间的影响 采用虹吸法,在一定的进样高度下,进样时间决定了进样量。进样量太少,达不到检测器的灵敏度;进样量太大,样品塞长度超过扩散引起的区带增宽,而且大量的溶剂甲醇引起基线的不稳定。本实验进样时间为5s时峰高较小,大于 10s时容易断流,所以最后确定为重力进样10s. 3.3 测定波长的选择 在乙醇中,小檗碱在225mm、270 nm、335 mm三个波长处有最大吸收,在同一缓冲体系下三个波长同时测定,得出335nm时同一溶液灵敏度最高,所以选择335mm为测定波长。 3.4 提取方法的确定 采用盐酸甲醇(1100)为溶剂,分别超声提取20、30、40、50、60 min,结果表明 30min即可提取完全,所以选择超声时间为30m in. 3.5 HPCE与 HPLC法测定结果的比较 同一样品,同时采用 HPCE和 HPLC进行含量测定,表1结果表明,两方法的含量测定结果无显著差异。但HPLC法分析时,盐酸小檗碱的保留时间约为21.8m in; HPCE法分析时其保留时间仅为5.4min,显然采用 HPCE法可大大缩短分析时间。比较两方法的RSD(%),显然 HPCE法的重现性比 HPLC法差,可能是由其进样的重复性决定的。 ( 参 考 文 献 ) ( [1]张国华,王延琮,张永友,等.高效毛细管电泳测定黄连及成药中小檗碱型生物碱的含量.色谱,2005,13(4): 247-249. ) ( [2]国家药典委员会.中华人民共和国药典.2005年版.一部.北京:化学工业出版社,2005:380-381. ) ( (2007-03-29收稿) ) ◎China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved http://www.cnki.net
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北京华阳利民仪器有限公司为您提供《拈痛丸中盐酸小檗碱的含量检测方案(毛细管电泳仪)》,该方案主要用于中药制剂中含量测定检测,参考标准《暂无》,《拈痛丸中盐酸小檗碱的含量检测方案(毛细管电泳仪)》用到的仪器有高效毛细管电泳仪(紫外检测)CL1030。
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