三氯蔗糖中甜味剂之王“三氯蔗糖”检测方案(固相萃取)

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甜味剂之王“三氯蔗糖”的测定（GB 22255-2014） 副标题：新的甜味剂之王“三氯蔗糖”已被广泛应用于可乐、糕点、酱油、发酵酒、酸奶等常见大众喜爱的食品，是近年来的检测热点。 三氯蔗糖是唯一以蔗糖为原料的功能性甜味剂，甜度可达蔗糖600倍。这种甜味剂具有无能量，甜度高，甜味纯正，高度安全等特点。是目前最优秀的功能性甜味剂之一。因此，它将取代阿斯巴甜，成为新的甜味剂之王，是肥胖症、心血管病和糖尿病患者理想的食品添加剂，在食品和医药中的应用不断扩大。 下面看看月旭产品参照国标方法检测三氯蔗糖的表现： 适用范围 食品中（含蛋白脂肪试样，酱及酱制品、醋、酱油，含酒精的试样，饮料，风味发酵乳、奶茶）三氯蔗糖的测定方法。（本实验选用酱油、可乐和酸奶） 2、提取步骤 酱油 称取2g均匀试样，置于50mL离心管中，加入1.0g中性氧化铝，加入3mL水，振荡3min振荡3min后加入15mL甲醇，振荡30s，超声20min，离心（3000r/min）10min，转移上清液至50mL离心管中，沉淀物中加入5.0mL甲醇水75%，振荡30s，离心（3000r/min）10min，取上清液，重复提取沉淀物2次，上清液合并于150mL分液漏斗中。 在分液漏斗中加入30mL正己烷，振摇2min，静置20min，下层水相移置50mL蒸发皿。蒸发皿沸水浴上蒸发，蒸干至1mL左右，用9mL水分三次冲洗蒸发皿，将冲洗液合并至15mL离心管中，超声5min，离心（3000r/min）10min。待净化。 可乐 称取均匀试样5g，置于15mL离心管中，加入5mL水，振荡30s，离心（3000r/min）10min，待净化。 酸奶 称取均匀试样5g置于50mL离心管中，加入5mL水，涡旋3min，加入15mL甲醇、0.50mL乙酸锌溶液、0.50mL亚铁氰化钾溶液，振荡30s，超声20min，离心（3000r/min）10min，转移上清液至50mL离心管中，沉淀物中加入5.0mL甲醇水75%，振荡30s，离心（3000r/min）10min，取上清液，重复提取沉淀物2次，上清液合并于150ml分液漏斗中。 在分液漏斗中加入30mL正己烷，振摇2min，静置20min，下层水相移置50mL蒸发皿。蒸发皿沸水浴上蒸发，蒸干至1mL左右，用9mL水分三次冲洗蒸发皿，将冲洗液合并至15mL离心管中，超声5min，离心（3000r/min）10min。待净化。 3、SPE净化步骤 SPE柱：BRP 200mg/6mL 活化：4mL甲醇，4mL 水 上样：待净化液 淋洗：1mL水（上样液在柱上液面还剩2mm时加入，弃去），抽干 洗脱：3mL甲醇（收集），抽干 浓缩：将洗脱液置于50mL蒸发皿内，沸水浴上蒸干，用乙腈水溶液（11+89）溶解，并定容到1mL，过0.22μm滤膜，滤液待上机检测。 4、注意事项 加标过程：精确移取0.5mL 2mg/mL标样，加入到5g可乐样品中，加标浓度即为200mg/kg。 精确移取0.5mL 2mg/mL标样，加入到2g酱油样品中，加标浓度即为500mg/kg。 精确移取1mL 2mg/mL标样，加入到5g酸奶样品中，加标浓度即为400mg/kg。 5、仪器参考条件 色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18 4.6×150mm, 5μm 流动相：水+乙腈=89+11 流速：1.0mL/min 柱温：35℃ 进样量：20.0μL 示差检测器条件：温度35℃ 6、色谱图及加标回收结果 图1、三氯蔗糖对照品1mg/mL 图2、酸奶样品加标400mg/kg 图3、可乐样品加标200mg/kg 图4、酱油样品加标500mg/kg 表1、加标回收率表 名称 样品 加标水平（mg/kg） 回收率（%） RSD（%） 三氯蔗糖 可乐 200 102 3.55% 97 酱油 500 99 2.80% 103 酸奶 400 95 1.47% 97 7、相关产品信息 货号 名称 规格 00522-20014 Welchrom®BRP 200 mg/6mL，30pk 00000-30013 15mL螺口尖底离心管 100支/包 00000-30016 50mL螺口尖底离心管 50支/包 00824-31001 Welch 固相萃取装置 12位方缸 WEL-REX-25A 固相萃取配套真空泵 抽气流量：25L/min 00802-02201 针头式过滤器 Nylon 13*0.22 100pk 00824-11101 一次性注射器 200pk/盒 带针头 橡胶头 1ml 00821-32291 盖子+垫片 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk 00821-40927 样品瓶 2ml 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk 00201-31041 Ultimate® XB-C18 4.6×150mm,5μm C16985800 三氯蔗糖 对照品 CAS No.:56038-13-2，纯品型，有证书，0.1g 新的甜味剂之王“三氯蔗糖”已被广泛应用于可乐、糕点、酱油、发酵酒、酸奶等常见大众喜爱的食品，是近年来的检测热点。三氯蔗糖是唯一以蔗糖为原料的功能性甜味剂，甜度可达蔗糖600倍。这种甜味剂具有无能量，甜度高，甜味纯正，高度安全等特点。是目前最优秀的功能性甜味剂之一。因此，它将取代阿斯巴甜，成为新的甜味剂之王，是肥胖症、心血管病和糖尿病患者理想的食品添加剂，在食品和医药中的应用不断扩大。下面看看月旭产品参照国标方法检测三氯蔗糖的表现：1、 适用范围食品中（含蛋白脂肪试样，酱及酱制品、醋、酱油，含酒精的试样，饮料，风味发酵乳、奶茶）三氯蔗糖的测定方法。（本实验选用酱油、可乐和酸奶）2、提取步骤（1）酱油称取2g均匀试样，置于50mL离心管中，加入1.0g中性氧化铝，加入3mL水，振荡3min振荡3min后加入15mL甲醇，振荡30s，超声20min，离心（3000r/min）10min，转移上清液至50mL离心管中，沉淀物中加入5.0mL甲醇水75%，振荡30s，离心（3000r/min）10min，取上清液，重复提取沉淀物2次，上清液合并于150mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入30mL正己烷，振摇2min，静置20min，下层水相移置50mL蒸发皿。蒸发皿沸水浴上蒸发，蒸干至1mL左右，用9mL水分三次冲洗蒸发皿，将冲洗液合并至15mL离心管中，超声5min，离心（3000r/min）10min。待净化。（2）可乐称取均匀试样5g，置于15mL离心管中，加入5mL水，振荡30s，离心（3000r/min）10min，待净化。（3）酸奶称取均匀试样5g置于50mL离心管中，加入5mL水，涡旋3min，加入15mL甲醇、0.50mL乙酸锌溶液、0.50mL亚铁氰化钾溶液，振荡30s，超声20min，离心（3000r/min）10min，转移上清液至50mL离心管中，沉淀物中加入5.0mL甲醇水75%，振荡30s，离心（3000r/min）10min，取上清液，重复提取沉淀物2次，上清液合并于150ml分液漏斗中。在分液漏斗中加入30mL正己烷，振摇2min，静置20min，下层水相移置50mL蒸发皿。蒸发皿沸水浴上蒸发，蒸干至1mL左右，用9mL水分三次冲洗蒸发皿，将冲洗液合并至15mL离心管中，超声5min，离心（3000r/min）10min。待净化。3、SPE净化步骤SPE柱：BRP 200mg/6mL活化：4mL甲醇，4mL 水上样：待净化液淋洗：1mL水（上样液在柱上液面还剩2mm时加入，弃去），抽干洗脱：3mL甲醇（收集），抽干浓缩：将洗脱液置于50mL蒸发皿内，沸水浴上蒸干，用乙腈水溶液（11+89）溶解，并定容到1mL，过0.22μm滤膜，滤液待上机检测。4、注意事项加标过程：精确移取0.5mL 2mg/mL标样，加入到5g可乐样品中，加标浓度即为200mg/kg。精确移取0.5mL 2mg/mL标样，加入到2g酱油样品中，加标浓度即为500mg/kg。精确移取1mL 2mg/mL标样，加入到5g酸奶样品中，加标浓度即为400mg/kg。5、仪器参考条件色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18  4.6×150mm, 5μm流动相：水+乙腈=89+11流速：1.0mL/min柱温：35℃进样量：20.0μL示差检测器条件：温度35℃6、色谱图及加标回收结果图1、三氯蔗糖对照品1mg/mL图2、酸奶样品加标400mg/kg图3、可乐样品加标200mg/kg图4、酱油样品加标500mg/kg表1、加标回收率表7、相关产品信息