鱼肉中氯霉素检测方案(液相色谱仪)

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液质联用在食品中兽药残留分析中的应用 液质联用在食品中兽药残留分析中的应用 概述 安捷伦科技已经开发出用于食品中兽药残留检测的许多方法。 应用指南 本应用指南涵盖了液质技术用于食品中兽药药留检测的应用，液质包括单四极杆液质，串联四极杆液质，飞行时间质谱液质和四极杆-飞行时间串联质谱。本指南可以作为兽药残留检测方法建立的起始工具。应用举例包括详细的色谱和质谱条件，质谱的性能数据以及代表性的总离子流色谱图。附录包括通用的样品前处理步骤。 Agilent Technologies 内容列表 前言 兽药的主要类别 兽药残留分析中的挑战 5 液质联用技术概述-如何选择合适的液质技术 6 应用 1.安捷伦6410串联四极杆液质用于奶制品中的痕量B-内酰胺的确认和定量分析 7 2. 液相色谱/飞行时间质谱用于阿莫西林降解物的结构鉴定分析 10 3. 安捷伦6410串联四极杆液质用于蜂蜜，虾仁和鸡肉中的氯霉素检测 12 4. 高效液相色谱/串联四极杆质谱联用法(HPLC/MS/MS)用于测定肉中的盘尼西林 15 5.液相色谱/大气压光电离源/质谱用于鱼中的氯霉素检测 17 6. 安捷伦6410A串联四极杆液质用于鸡肉中的硝基呋喃代谢物的检测 19 7. 安捷伦6410串联四极杆液质用于罗非鱼中的硝基呋喃代谢物的检测 22 8. 液相色谱/大气压化学电离源/质谱用于猪肉中的磺胺类抗生素的检测 24 9. 安捷伦6410A 串联四极杆液质用于肉类产品中磺胺药物的筛查和定量分析 26 10.安捷伦6410 串极四液杆液质用于牛肉中的氟喹诺酮类药物的快速筛查和定量分析 29 11. 安捷伦6410 串联四极杆液质用于食品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿分析 32 12.安捷伦6410A 串联四极杆液质用于动物性食品中的β，-激动剂类多残留药物快速的检测 35 13.安捷伦6410A 串联四极杆液质用于牛奶中四环素类多残留药物的检测 38 附录 通用的样品前处理步骤 42 前言 二苯脲类 兽药的主要类别 ·硝基咪唑类 兽药广泛地用于畜牧业中，达到治疗或防止疾病的目的。它们还可以促进动物生长，提高饲料效果，以及使动物在动物运输过程中保持安静。然而，所有用于食用类动物的兽药都可能导致肉，奶或蛋中含有药物残留。这些药物残留给人的健康带来潜在的危害，包括过敏反应，直接中毒效应，以及对抗生素产生的抗药性。 聚醚类离子载体 ·喹诺酮衍生物 ·三嗪类 4.抗菌生长促进剂 在过去的几十年中，许多兽药在世界范围内被广泛使用，某些药物仍然在食品链中被发现。下面列出的是主要的兽药。 ·有机砷 ·肽类抗生素 1. 抗菌类药物 ·喹喔啉-1，4-二氧化物 ·氨基糖苷类和氨基环醇类 5. 激素类生长促进剂 ·酰胺醇类 ·内源性性激素 ·β-内酰胺(青霉素和头孢菌素类) ·合成甾体药物 ·氟喹诺酮类 ·合成非甾体药物 ·大环内酯和林可酰胺类药物 ·多肽激素 硝基呋喃及其代谢物 6.其它药物 磺胺类抗生素 ·抗真菌药 ·四环素类 ·β-肾上腺素能激动剂 2. 抗寄生虫药 .皮质类固醇 ·苯并咪唑类 ·利尿剂 咪唑骈噻唑类 ·染料 ·有机磷类药物 ·非甾体类消炎药 ·四氢嘧啶 ·镇静药和β-受体阻断剂 ·水杨酰苯胺衍生物 ·甲状腺抑制药物 ·取代苯酚类药物 ·大环内酯 ·哌嗪衍生物 3.抗原虫药(抗球虫药) 许多国家，如美国，欧盟都已经设定了不同食品中各种兽药残留的最大残留限量值(MRLs)。日本也对日本肯定列表检测的兽药残留也设定了最大残留限量值。最近，中国也建立了很多新的国家标准以监测食品中的抗生素残留。 ·苯酰胺类 兽药残留分析中的挑战 食品中兽药残留分析主要两个方面的挑战 1. 分析组分的多元性 因为需要检测的化合物的种类很多，而且它们的物理化学性质差异很大，这些都会影响分离和检测的结果 ·物理化学性质(例如，极性和pKa 值) ·稳定性 2 基质的复杂性 使用单残留方法测定兽药留要比测定农药残留难得多。兽药中的组织是比水果和蔬菜更复杂的基质。这些基质可能是肌肉、肾、肝、牛奶、鸡蛋、尿、血液等等。 ·基质组成(例如，类酯，蛋白质，碳水化合物，水和盐) ·组分-基质反应的相互作用 ·基质共提取物 食品实验室中兽药残留检测数量的大量增加促进了用户进行高通量分析的需求，即在最短的时间内分析更多数量的样品。本应用指南包括了已经开发的液质联用技术用于不同食品中的各种兽药残留的分析，如蛋，虾仁和肉类等。因为在兽药分析中，样品的处理和净化是影响分析速度的关键因素，固相萃取-液质联用是现代食品分析中被广泛使用的手段。 液质联用技术概述-如何选择合适的技术 样品制备 仪器选择 筛查 确认 定量 固相萃取或者 QuEChERs 法 提取 净化 液相色谱/三重串联四极 杆液质联用系统 “脏”或复杂基体样品中目标化合物的痕量分析 -一次进样进行多组分的高选择性，高灵敏度检测 -复杂样品分析时检测限低 -先进的安捷伦喷射流离子聚焦技术，大大提高了灵敏度 -MRM可以提供阳性确认，检测限低，可符合法规要求 -一次分析进行扫描和确认 -常规的高精度的MS/MS定量分析 -全景式的快速浏览定量分析结果 液相色谱/飞行时间质谱 或液相色谱/四极杆-飞行 时间串联质谱仪 非目标，未知化合物分析 -高分辨率可以减少噪音和基质的干扰 -精确质量数可以进一步化合物的选择性，利用精确质量数据库进行无限制的筛选 -先进的安捷伦喷射流离子聚焦技术提高分析的灵敏度 -利用公开和内置的精确质量数据库进行自动检索 -分子式生成器减少数据处理时间 -离子提取可使用窄质量窗口 -色谱图提供精确的一级质谱和二级质谱的定性分析 -宽动态范围使得定量线性范围更宽 液相色谱/单四极杆液质 干净基质样品的扫描和定 量分析 -一次进样进行多组份化合物的选择性检测 -简单样品分析时可获得更低的检测限 -与二极管阵列和荧光检测联用进行结构的鉴定 -宽动态范围使得定量线性范围更宽 1 安捷伦6410弭联四极杆液质联用仪用于牛奶中的痕量B-内酰胺的确认和定量分析 摘要 B-内酰胺抗生素是被广泛使用的兽药，主要用于疾病的预防和治疗。因此这些药物可能会在奶制品和肉类食品中产生药物残留，这些药物在发酵过程中导致问题以及对那些B-内酰胺过敏的人带来健康问题。 样品前处理步骤 1. 取2ml牛奶，加4ml乙腈 2. 涡旋震荡以去除蛋白质 3. 在500转的条件下，离心10min， 然后用0.45 pm膜过滤 4. 进样羊， 20uL 仪器参数 MRM设定 驻留 碎裂 碰撞 TS 化合物 母离子 子离子 时间(ms) 电压(V) 能量(V) 0 阿莫西林 366 114 100 110 15 208 100 110 5 氨苄青霉素 350 160 100 100 5 192 100 110 10 6 双氯青霉素 470 311 70 110 10 160 70 110 10 乙氧萘青霉素 415 256 70 110 15 70 110 10 恶喹酸素 402 243 70 110 10 160 70 110 10 苯氧甲基青霉素 351 192 70 100 5 160 70 100 10 青霉素G 335 176 70 100 10 160 70 100 5 分析结果 LC/MS/MS分析方法性能 化合物 S/N* R2 阿莫西林366-114 224 0.992 氨苄青霉素350-160 61.6 0.984 双氯青霉素470-160 48.5 0.981 乙氧萘青霉素415-199 52.6 0.998 苯唑青霉素402-160 70.9 0.993 苯氧甲基青霉素351-160 225.9 0.998 青霉素 G335-160 33.2 0.981 *样品是牛奶基质中添加的每个化合物为 0.1 ppb. 订货号 描述 部件号 Agilent LC/MS/MS G6410A或者 G6460AA Agilent ZORBAX SB-C18， 2.1×150 mm， 3.5 pim 830990-902 13 mm，45 pm PTFE 注射器滤头 5185-5836 参考文献 安捷伦应用文献5990-3722EN，"6410串极四杆液联用用用于奶制品中痕量的β-内酰胺抗生素残留" 安捷伦应用文献5990-3364EN，“液相色谱/紫外和液相色谱/串联四极杆液质联用仪用于青霉素的检测" 2 液相色谱/飞行时间质谱用于阿莫西林降解物的结构分析 摘要 利用精确质量数和分子式生成确认功能用于阿莫西林降解物的结构鉴定，除了分子离子峰测定之外，还利用液相色谱/电喷雾电离飞行时间的源内碰撞解离功能产生碎片进一步对结构进行确认。 样品前处理步骤 阿莫西林在酸性条件下进行应激处理 1.取1mL阿莫西林溶液(25 mg/mL in DMSO)加入1mL的0.1M盐酸中 2. 室温下搅拌1小时(25℃) 3. 用20mL DMSO稀释10倍 仪器设定 液相条件 结果 注释：阿莫西林青霉噻唑酸(2)(CH2N0，S)，[M+H]+=384.1229 m/z A)阿莫西林青霉噻唑酸的分子离子峰的精确质量数 B)阿莫西林青霉噻唑酸的源内碰撞解离碎片的精确质量数 C) 阿莫西林青霉噻唑酸的碰撞解离裂解图 D) 阿莫西林青霉噻唑酸碰撞解离碎片的质量精度 订货信息 描述 部件号Agilent LC/MS TOF G6224AA或 A6230AA ( 参考文献 ) 安捷伦应用文献5989-2348EN，“阿莫西林降解物的结构鉴定，第二部分：电喷雾-飞行时间质谱及源内碰撞诱导解离进行阿莫西林降解物的结构鉴定”。 安捷伦应用文献5989-3561EN， “利用阿莫西林降解物的分析，评价质量精度” 安捷伦 6410 串极四液杆液质联用仪用于分析蜂蜜，虾仁和鸡肉中的氯霉素 摘要 使用6410串四四杆杆液质联用仪建立了蜂蜜，虾仁和鸡肉中的氯霉素的分析方法。灵敏度远远高于欧盟对食品中氯霉素检出限的规定要求。使用同位素内标和简单的固相萃取法基质样品中氯霉素的检测限可达10ppt。 样品前处理步骤 1. 内标 标准品配制：1 ppb，0.2 ppb，0.1 ppb， 0.02 ppb，和 0.01 ppb的标准溶液，内标浓度为 0.25 ppb蜂蜜 1. 1g样品用5mL水稀释并加入25 pL 10 ppb 内标液 2.转移此溶液至 SPE 小柱顶部静置 5 min 3. 10mL酸酸乙酯洗脱 4.收集洗脱液，40°℃氮吹挥干溶剂 5.残渣用1mL甲醇超声1 min 溶解 6.用针头式过滤器过滤，进样分析 仪器设定 液相条件 MS参数 结果 灵敏度 标准品溶液(溶剂为水)，浓度为10 ppt， 进样量/10pL 订货信息 描述 部件号 Agilent LC/MS/MS G6410B或 G6460AA Agilent ZORBAX SB-C18， 2.1×50 mm， 1.8 pm 827700-902 Agilent AccuBond SPE ENV PS DVB Cartridges 188-3060 ( 参考文献 ) 安捷伦应用文献5989-5975EN，"安捷伦6410串联四极杆液质联用仪用于蜂蜜，虾仁和鸡肉中氯霉素的确认和定量分析" 高效液相色谱/串串四极杆质谱联用法(HPLC/MS/MS)用于测定定中的盘尼西林 摘要 本文介绍了一种用固相萃取高效液相色谱-二级质谱法同时测定动物组织(猪肉)中六种抗菌素残留(阿络西林、盘尼西林G、苯唑西林、氯唑西林、萘夫西林、双氯西林)的方法。此方法将反向柱Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 (3.5 pm， 100 mmx2.1mm)和安捷伦混合模式固相萃取柱 (Agilent SampliQ OPT)组合全面分析了残留的盘尼西林。高效液相色谱-串联质谱法(HPLC/MS/MS)定量地对固相萃取对痕量抗菌素残留进行了性能评价。 样品制备 1.提取 2.用SPE固相萃取小柱纯化 仪器设置 LC 参数 色谱柱 Agilent ZORBAX Eclipse Plus， 2.1 mm ×100 mm，3.5 pm(p/n 959793-902) 流速0.6mL/min流动相B：乙腈运行时间12 min后运行时间3 min温度30℃进样量10 pL洗脱梯度Time %B0222 A：水和10mM的乙酸铵 11.9 12.0 结果 注释：2a：含1ng/g药物的加标肉经过提取和固相萃取净化，2b：肉经过提取和净化然后加标1 ng/g 药物， 2c：未加标的肉经过提取和净化。 回收率 订货信息 描述 部件号 Agilent LC/MS/MS G6410AA或 G6410B Agilent ZORBAX Eclipse Plus， 2.1 mmx100 mm，3.5 pm p/n 959793-902 注射器滤头 p/n5185-5831 Agilent SampliQ OPT 6 mL/150 mg SPE 小柱 p/n5982-3067 PTFE 注射器滤头 p/n5185-5836 2mL自动进样器样品瓶 p/n5182-0864 参考文献 安捷伦应用文献 5990-3364EN，"高效液相色谱/串联四极杆质谱联用法(HPLC/MS/MS)用于测定肉中的盘尼西林" 5 液相色谱/大气压光电离/质谱法用于鱼中的氯霉素的分析 摘要 利用液相色谱/大气压光电离/质谱法建立了鱼中的氯霉素的检测方法。 样品前处理 1.称5g鱼肉样品加5g无水硫酸钠 2.加10mL乙酸乙酯 3.均质匀浆20s 4. 6000 rmp， 离心5 min 5.取上清液，重复步骤2-4 6.在40℃下旋转蒸发至干 7.用1mL乙青回溶， 加1mL正烷烷振摇，弃去正己烷层 8.再加入1mL正己烷，振摇，弃去正己烷层 9.将乙腈层吹干，残渣用ACN： 10mM乙酸铵水溶液(1：9，V/V)回溶含10%乙腈的10 mM 醋酸胺的溶液脱水 10.过滤，进样 仪器参数 液相色谱参数 色谱柱Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18，3×150 mm， 5 pm溶剂A：含10mM乙酸铵的水溶剂B：甲醇添加剂：丙酮， 0.05 mL/min梯度：90/10A/B 15 min 至70/30 A/B柱温：40°C进样羊：20 pL流速：0.5 mL/min质谱参数离子源：APPI(负离子)扫描范围：100-400m/z选择离子：321m/z；(M-H)干燥气：氮气， 7 L/min @ 350°℃雾化气压力：氮气， 50 psi碰撞电压：120V毛细管电压：3500VAPCI源温度：350°C 结果 鱼肉中氯霉素的回收率 添加水平 回收率[±RSD (%)] (ng/g) 小黄狮鱼 比目鱼 0.1 89.3±5.1 87.4±6.1 0.5 102.5±4.9 94.8±6.7 2.0 96.1±4.3 91.8±4.9 订货信息 描述 部件号 Agilent LC/MSD G6120AA， G6130AA 或 G6140AA APPl source G1971B Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18， 3×150 mm， 5 pm 993967-302 参考文献 安捷伦应用文献5988-8999EN"利用液相色谱/大气压光电离源/质谱检测鱼中的氯霉素" 安捷伦6100系列单四极杆液质联用仪用于检测鸡肉中的四种硝基呋喃代谢物 摘要 本方法介绍了液相色谱/单四极杆液质联用仪检测鸡肉中的四种硝基呋喃代谢物。下图结构所示为硝基呋喃原药。 样品前处理步骤 1. 制备四种硝基呋喃代谢物的水溶液(12.5， 25.0， 37.5， and 50pL at 100 ng/mL). 2. 将鸡肉样品放入到40mL 的带盖的玻璃样品瓶中 3. 加入10mL的25mM盐酸溶液， 200pL浓度为50mM的2-硝基苯乙醛二甲亚砜溶液4. 37℃下水浴中，反应16小时 5. 将溶液冷却至室温 6. 用 0.8M的氢氧化钠和0.1M的磷酸二氢钾溶液，将pH值调至7.4 7. 乙酸乙酯提取样品，液氮气吹干乙酸乙酯提取液 8. 用1.0mL的起始流动相回溶残渣 仪器参数 分析结果 线性，检测限(LOD)，和仪器精密度(代谢物水溶液) 代谢物 LOD R2 (ng/mL) 1天 RSD 3天 AMOZ 0.9999 0.04 5.0 7.3 SEM 0.9998 0.02 4.7 8.1 AHD 0.9989 0.06 4.9 7.9 AOZ 0.9997 0.06 3.1 8.2 结果 浓度为0.25 ng/mL的四个硝基呋喃代谢物的2-硝基苯乙醛的衍生物的选择离子流图。 订货信息 描述 部件号Agilent LC/MSD G6110AA，G6120AA， G6130AA或 G6140AA 参考文献 安捷伦应用文献5988-8903EN"安捷伦电喷雾-单四极杆液质联用仪用于检测鸡肉中的四种种基呋喃代谢物" 7 Agilent 6410 三重串联四普杆质谱分析罗非鱼中的硝基呋喃代谢物 摘要 本文使用 Agilent 6410型三重串联四极杆质谱对肉类和肉制品中的禁用物质硝基呋喃类抗生素进行分析，所建立的方法对四个代谢物具有很高的灵敏度，最低检测限(LOD)可达0.01 ppb(10 ppt)。研究按照欧盟的分析方法指标认证标准，建立了0.1 ppb~10 ppb浓度范围的标准定量曲线。以罗非鱼提取物为研究对象，考察LC/MS/MS技术用于水产品分析的性能。 仪器参数 多反应监测模式参数 离子驻留时间 碎裂电压 碰撞能量 化合物 二级质谱 (ms) (V) (V) AMOZ 335.1→291.4 60 100 335.1→262.4 60 100 5 SC 209.1→192.3 60 100 5 209.1→166.3 60 100 5 AH 249.1→134.2 60 100 5 249.1→104.2 60 100 5 AOZ 236.0→134.1 60 100 5 236.0→104.1 60 100 5 结果 硝基呋喃类代谢物的定量标准曲线，线性范围10ppt-10 ppb 灵敏度 罗非鱼提取物样品中每个代谢物添加500 ppt 参考文献 安捷伦应用文献5989-5808EN，"利用 Agilent 6410 三重串联四极杆质谱分析罗非鱼中的硝基喃代谢物" 8 大气压化学电离-单四极杆液质联用仪分析猪肉中的磺胺类抗生素 摘要 本应用介绍了利用安捷伦的大气压化学电离-单四极杆液质联用仪快速、简便分析猪肉中的磺胺类抗生素的方法。具有简单灵敏的优点。 1.称取3g猪肉样品， 置于50mL的聚丙烯离心管中 2. 加入10mL甲醇， 均质3 min 3. 离心10 min 4.提取10mL酸化甲醇溶液，过滤，进样 仪器参数 结果 回收量(ng) 描述 STZ SDZ SPY SMR SMZ SCPD(IS) SQ SDMX 猪肉添加样品1 161 157 132 273 149 2，000 139 126 猪肉添加样品2 154 156 132 293 157 2.000 153 131 猪肉添加样品3 149 158 124 267 155 2，000 132 113 猪肉添加样品4 145 152 122 279 144 2，000 119 111 猪肉添加样品5 151 162 127 294 149 2，000 127 121 猪肉添加样品6 136 147 127 274 136 2，000 116 108 猪肉添加样品7 148 161 128 275 155 2，000 124 116 添加量 (ng) 150 150 150 300 150 2，000 150 150 平均值 149 156 127 279 149 2.000 130 118 SD (Precision) 8 5 4 10 7 13 8 MDL (SD×t-stat) ng 24 17 11 33 23 一 40 26 LOQ (SD×10) ng 76 53 36 104 73 128 82 RSD (SD×100/Mean) 5 3 3 4 5 10 7 准确度(%) 99 104 85 93 100 100 87 79 线性(R2) 0.9994 0.9994 0.9997 0.9979 0.9998 1.0000 0.9989 0.9989 t-stat(N=7) 3.14 3.14 3.14 3.14 3.14 3.14 3.14 3.14 订货信息 参考文献 安捷伦应用文献5989-0182EN，"大气压化学电液-液质联用进行猪肉中磺胺类抗生素药物的确认方法" 9 安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪用于肉类食品中磺胺类抗生素药物的筛选，确认和定量分析 摘要 安捷伦6410A串四四杆杆液联联用仪用于猪肉中磺胺类抗生素药物残留的检测、监测和定量分析，方法具有快速，准确及高灵敏度的特点。 样品前处理 1.称3g猪肉样品，置于50mL的聚丙烯离心管中 2. 加入10mL酸化甲醇，均质3 min 3. 离心10 min 4.提取10mL酸化甲醇溶液，过虑，进样 仪器参数 多反应监测(MRM) 设定 化合物 多反应监测(MRM) 碰撞电压 碰撞能量(V) 磺胺氯哒嗪(SCP) 285-156 100 15 285-108 20 磺胺嘧啶(SD) 251-156 120 10 251-185 10 磺胺二甲嘧啶(SDM) 311-156 140 15 311-218 15 磺胺甲氧嗪(SMP) 281-156 120 10 281-215 15 磺胺甲基嘧啶(SM1) 265-156 120 15 265-172 15 磺胺二甲嘧啶SM2) 279-156 140 15 279-204 15 磺胺异恶恶(MSZ) 254-156 120 15 254-147 20 磺胺间甲氧嘧啶(SMM) 281-156 120 10 281-126 20 磺胺噻唑(ST) 256-156 120 15 256-107 15 磺胺喹噁啉(SQX) 301-156 140 15 301-208 15 磺胺多辛(SDM) 311-156 140 15 311-108 20 磺胺苯吡唑(SPP) 315-156 140 20 315-160 20 磺胺氯哒嗪；3-氯-6-磺胺哒嗪 285-156 100 15 285-131 20 磺胺二甲异恶唑(SIZ) 268-156 120 5 268-113 10 结果 色谱图显示优异的分离度和灵敏度 订货信息 描述 部件号 Agilent LC/MS/MS G6410BA或 G6460AA ( 参考文献 ) 安捷伦应用文献5990-3761EN"安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪用于肉类食品品磺胺类抗生素药物的检测、监测和定量分析" 10 安捷伦 6410A串联四极杆液质联用仪进行牛肉中的氟喹诺酮类多残留农药的快速筛查 摘要 本示例着重阐释使用超临界流体萃取联用串联四极杆液质联用仪，快速筛查肉类中多残留兽药，侧重于液相色谱/串联四极杆质谱联用技术进行肉类食品中兽药多残留筛查检测。 样品前处理 样品(10g)均质 称取样品(2g) +(1克肌肉和2克肝脏)+内标 研钵内碾碎混合 置于样品管 仪器参数 结果 添加100 ppb 猪肝样品内兽药的多反应监测离子流图 订货信息 描述 部件号 Agilent LC/MS/MS G6410BA或 G6460AA ( 参考文献 ) 安捷伦应用简报ASMS07-25"超临界提取-液相色谱/串联四极杆液质联用仪快速筛查肉类中多残留兽药 11 Agilent 6410 三重串联四极杆质谱仪检测食品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿 摘要 本实例使用安捷伦新型6410高效液相色谱三重四极杆质谱 (LC/MS/MS) 方法快速、准确地测定孔雀雀绿(MG) 和隐性孔雀石绿(LMG) 的残留量。串联质谱在使用正离子电喷雾模式(ESI+)，多反应监测(MRM)模式下，进行质谱定性和定量分析，无需采用传统的PbO，氧化柱，比液相检测方法灵敏、快速。该方法的定量限(LOQ)为0.01 pg/kg， 达到出口欧盟和日本残留限量的要求。 样品前处理 1.称取5g罗非鱼，加入1 mL(0.25 mg/mL)的羟胺，2mL的萘磺酸，2mL pH 4.5的醋酸胺和40mL的乙腈 2.用乙腈和二氯乙烷提取 仪器参数 结果 线性范围：10 ppt-10ppb x106- 灵敏度100 ppt 的浓度水平 订货信息 ( 参考文献 ) 安捷伦应用文献5989-5807EN，"Agilent 6410三重串联四极杆质谱仪检测食品中的孔雀石绿和隐性孔雀石绿 12 安捷伦6410A串联四极杆液质联用仪用于动物源食品中的6，-受体激动剂的快速定性和定量分析 摘要 β，-受体激动剂是生长因子，同时也可以影响脂肪分解及脂肪转化至肌肉的过程。在本应用中，对肝脏和尿液样品进行分析。使用分子印记膜对β，受体激动剂进行提取。安捷伦6410A串联四极杆液质联用仪对11个β，-受体激动剂进行了确认和定量分析。本方法的目的建立一个快速筛选和确认β2-受体激动剂分析方法，其最小检出限(MRPL) 符合欧盟法规要求。 样品前处理 1.取5mL尿样或者5g经过粉碎的动物肝脏样品，然后放入离心管 2.加入10mL 0.1M盐酸溶液 3.强烈震荡5 min， 搅拌3 min， 超声10 min， 在12000 rmp 离心5 min 4.收集上清液，上述步骤重复两次，将所有的上清液合并 5.用6mL甲醇和6mL去离子水淋洗 C18固相萃取柱 6.将提取液加至固相萃取柱顶端，然后用5mL去离子水淋洗 7.分别用0.8 mL的甲醇和0.8 mL的去离子水洗并并收集洗脱液 8.氮气下吹干，最后用初始流动相定容 9.用0.45 pm的膜过滤，然后转移至自动进样器瓶 仪器参数 色谱柱 Agilent ZORBAX SB-C18，2.1×100 mm， 1.8 um 柱温 40°C 流动相 A：10 mM的甲酸铵/0.1%甲酸； B：乙腈 流速 0.3mL/min 梯度 0-5 min， B%1%-90% 5-8 min， B%90% 8.1-14 min B% 1%， 0.5 mL/min 进样量 5pL 质谱条件 离子化模式 ESI(+) 毛细管电压 4000V 雾化气压力 35 psi 干燥气流速和温度 11 L/min @ 350°C MRM 参数设定 驻留时间 碎裂电压 碰撞能量 保留时间化合物 母离子 子离子 (ms) (V) (V) 4.95 特布它林 226 152 10 100 15 170 10 100 30 4.98 齐帕特罗 262 244 10 100 10 185 10 100 25 4.98 沙丁胺醇 240 222 10 100 5 148 10 100 15 5.04 西马特罗 220 202 10 80 5 160 10 80 15 5.80 莱克多巴胺 302 284 10 100 10 6.15 妥布特罗(舒喘) 228 119 10 100 30 172 10 100 10 6.18 克伦特罗(瘦肉精) 277 203 10 100 10 259 10 100 5 6.37 溴布特罗 367 349 10 100 10 293 10 100 15 6.49 克仑潘特 291 203 10 100 15 273 10 100 5 6.52 马布特罗 311 237 10 100 15 293 10 100 10 6.83 马喷特罗 325 237 10 100 15 217 10 100 25 结果 化合物 信噪比S/N (p-p) 特布它林 374.6 齐帕特罗 39.0 沙丁胺醇 1759.8 西马特罗 48.8 莱克多巴胺 1539.0 妥布特罗(舒喘) 7.1 克伦特罗(瘦肉精) 30.2 溴布特罗 53.8 克仑潘特 43.0 马布特罗 15.8 订货信息 描述 部件号 Agilent LC/MS/MS G6410BA 或 G6460AA C18 0DS-6 mL tubes， 500 mg SampliQ 5982-1165 ( 参考文献 ) 检验检疫科学， Vol. 18 No. 5， pp 39-41 13 安捷伦 6410A 串联四极杆液质联用仪用于牛奶中的四环素及其代谢物多残留的检测 摘要 四环素类抗生素常常被用于畜牧行业中。本文介绍了液相色谱/串联四四杆杆谱技术同时检测牛奶和动物组织中的10种四环素类抗生素残留，包括二甲胺四环素，土霉素及其差向异构体，四环素及其差向异构体，金霉素及其差向异构体，去甲基金霉素，甲烯土霉素，多西环素。 样品前处理 提取步骤 1. 称5g牛奶样品(准确至0.01g)， 然后放入50mL比色管 2. 加入0.1 M Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液， 定容至50mL 3. 蜗旋震荡1min 4. 在冰水混合液中超声10 min， 然后专移至50mL聚丙烯离心管中. 5. 冷令至0~4°C. 6.在15°C下，5000 r/min 离心10 min，然后滤纸过滤净化 1. 取10mL提取液(相当于1g样品)， 转移至安捷伦 SampliQ 固相萃取柱顶端，速度为每秒一滴。 2. 然后分别用5mL水、和5mL甲醇和水淋洗固相萃取柱 3. 弃去淋洗液 4. 在2.0 kPa 的负压下干固相萃取柱5 min 5. 用10mL 的10 mmol乙二酸甲醇溶液洗脱 6. 收集洗脱液，在40°℃下氮气吹干 7. 用1mL的初始流动相回溶，0.45 pm 过滤，准备进样 仪器参数 MRM 参数设定 化合物 碎裂电压 母离子 子离子 CE 保留时间 (min) 二甲胺四环素 120 458 352 35 8.58 441 20 差向土霉素 120 445 410 20 8.60 427 10 差向四环素 120 461 426 20 9.47 444 15 四环素 120 445 410 20 9.90 427 15 土霉素 120 461 426 20 9.95 443 10 去甲基金霉素 120 465 430 25 11.25 448 15 差向金霉素 120 479 444 22 11.59 462 15 金霉素 120 479 444 22 12.95 462 15 甲烯土霉素 120 443 381 25 13.98 426 15 多西环素 120 445 154 30 14.08 428 15 结果 标准溶液* 牛奶基质中标样* LOQ LOD LOD (S/N=20) (S/N=3) (S/N=3) 化合物名称 R2 柱上进样量， pg 柱上进样量， pg R2 柱上进样量， pg 二甲胺四环素 0.999 41.5 6.2 0.990 16.3 差向土霉素 0.991 10.8 1.6 0.994 8.7 差向四环素 0.996 14.7 2.2 0.996 12.8 四环素 0.998 9.4 1.4 0.994 10.2 土霉素 0.996 10.7 1.6 0.991 8.6 去甲基金霉素 0.999 22.8 3.4 0.993 8.1 差向金霉素 0.986 38.2 5.7 0.987 11.9 金霉素 0.986 8.1 1.2 0.994 7.6 甲烯土霉素 0.999 20.8 3.1 0.994 12.3 多西环素 0.999 32.2 4.8 0.995 11.2 订货信息 描述 部件号 Agilent LC/MS/MS G6410BA或 G6460AA Agilent ZORBAX RX-C8， 2.1x150 mm， 5 pm 883700-906 SampliQ OPT SPE Cartridge 3mL 60 mg 5982-3036 参考文献 安捷伦应用文摘5990-3816EN，"安捷伦6410A 串极四极杆液联联用仪用于牛奶中的四环素及其代谢物多残留的检测 附录 样品前处理方法参考 硝基呋喃及其代谢物 1. 称2g肉样品， 加入5mL0.2N的盐酸溶液，500pL浓度为50mM的2-硝基苯乙醛二甲亚砜溶液 2涡旋震荡1 min3337°℃下水浴中，反应16小时，注意避光4 将溶液冷却至室温，加入0.3 M Na，P0并搅拌 5.用1M的氢氧化钠将 pH值调至7.4 6.用5mL乙酸乙酯提取样品 7.涡旋震荡10 min， 4000转下离心 3 min 8.第6和7步重复两次 9.并将乙酸乙酯溶溶合并，然后40°℃氮气吹干， 1.0 mL的起始流动相回溶10.过滤，准备进样 ●氯霉素 1. 称10g样品加50mL乙酸乙酯萃取两次 2.收集上清液，40°℃下氮气吹至近干 3.加2mL甲醇和50mL4%的氯化钠水溶液 4.用20mL正己烷萃取两次，弃去正己烷层 5.用20mL乙酸乙酯萃取两次 6.合并乙酸乙酯萃取液，在40℃下旋转蒸发至干 7.用5mL水溶解 8.依次用5mL甲醇， 5mL 氯仿， 5mL甲醇， 以及 10 mL 水对 ZORBAX C18 SPE 固相萃取柱进行活化 9.取5mL样品转移至固相萃取柱顶端 10.用5mL乙腈/水(5：95，V/V)和3mL乙腈依次洗脱固相萃取柱 11.收集洗脱液，40℃下氮气吹干 12. 1 mL 初始流动相回溶，过滤后进样分析 糖皮质激素 1. 称3g样品 加入15mL乙酸乙酯 涡旋震荡15 min， 16，000 rmp 下离心5 min 4上述步骤重复两次，合并乙酸乙酯馏提取液56789 40°℃下气吹至近干 66mL正己烷活化硅胶固相萃取柱 上样 6mL正己烷淋洗 6mL正己烷/丙酮(6：4)洗脱 10.40°C下气气吹干， 1mL初始流动相回溶，准备进样 www.agilent.com/chem/cn 安捷伦对由于设备，性能或使用这种材料而造成的偶然或必然的损害或者错误不承担任何责任。 本文中的信息，描述和性能指标如有更改，恕不另行通知。 ◎安捷伦科技公司，2009 中国印刷 2009年4月9日 5990-3677CHCN Agilent Technologies 利用液相色谱/大气压光电离/质谱法建立了鱼中的氯霉素的检测方法。本应用指南涵盖了液质技术用于食品中兽药残留检测的应用，液质包括单四极杆液质，串联四极杆液质，飞行时间质谱液质和四极杆-飞行时间串联质谱。本指南可以作为兽药残留检测方法建立的起始工具。应用举例包括详细的色谱和质谱条件，质谱的性能数据以及代表性的总离子流色谱图。附录包括通用的样品前处理步骤。