银杏叶提取物中银杏叶提取物指纹图谱检测方案(液相色谱仪)

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SSL-CA19-096Excellence in Science Excellence in ScienceLC-178 岛津企业管理(中国)有限公司分析中心Shimadzu(China)CO.，LTD. Analytical Applications Centerhttp：//www.shimadzu.com.cn上海市徐汇区宜州路180号B2栋咨询电话：021-34193996Hotline： 021-34193996 岛津 Nexera LC-40 应用于银杏叶提取物指纹图谱的分析 LC-178 摘要：本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱系统，建立了银杏叶提取物指纹图谱的测定方法。该方法分析时间短，供试品和银杏叶对照提取物中17个主色谱峰分离效果良好。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算供试品和对照提取物的指纹图谱相似度，全峰相似度在0.927以上，满足药典中不低于0.90 的规定。连续6针进样，17个目标峰保留时间和峰面积的RSD 分别在 0.106%~0.636%和0.152%~2.601%之间，表明仪器精密度良好。 关键词： Nexera LC-40 高效液相色谱仪银杏叶提取物指纹图谱 银杏作为我国特有的珍稀树种，在国内种植范围广泛。银杏叶提取物(EGb)则是一种治疗心脑血管疾病的有效物质，可以扩张冠状动脉血管、改善脑循环，主要的活性成分包含黄酮醇苷和萜类内酯。指纹图谱分析手段是中药分析领域进行宏观监测的有效措施，在国际范围内被认为是控制中药或天然药物质量最有效的手段之一。它可以全面的反应化合物所含的化学成分种类、数量以及相互之间比例关系， 从而有效表征其内在质量。银杏叶提取物中各化合物的监测目前也采用指纹图谱的方式，但由于其成分较多，所以采用常规液相分析耗时较长。 本实验使用 Nexera LC-40 高效液相色谱系统对银杏叶提取物指纹图谱进行研究，该方法分析时间短，精密度高，指纹图谱相似度满足药典中不低于0.90的规定，能够为各类银杏叶提取物制剂质量控制提供帮助。 I实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40 液相色谱仪，包括 CBM-40A Lite系统充制器， DGU-405脱气机，LC-40BXR输送泵，SIL-40CXR自动进样器， CTO-40S柱温箱， SPD-M40检测器，LabSolutions Ver. 5.97色谱工作站。 图1岛津Nexera LC-40 高效液相色谱仪 1.2分析条件 色谱柱： UHPLC C18色谱柱(2.1mmI.D.×100 mmL， 1.8 um) 流动相：A：0.4%磷酸水溶液； B：乙腈 流速：0.4mL/min柱温：35℃ 检测波长：360nm 进样体积：1p 洗脱方式：梯度洗脱，B相起始浓度为16.6%，时间程序如表1所示。 表1梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 2.30 Pumps Pump B Conc. 16.6 4.60 Pumps Pump B Conc. 19.7 7.30 Pumps Pump B Conc. 24.0 8.00 Pumps Pump B Conc. 27.0 10.00 Pumps Pump B Conc. 30.0 12.00 Pumps Pump B Conc. 40.0 12.01 Pumps Pump B Conc. 80.0 13.00 Pumps Pump B Conc. 80.0 13.01 Pumps Pump B Conc. 16.6 17.50 Controller Stop |样品前处理 参照物溶液的制备：精密称取芦丁对照品适量，加80%甲醇制成每1mL含30ug的溶液，即得。(参照药典) 对照品溶液制备：精密称取银杏叶对照提取物40mg， 精密加入80%甲醇20mL，超声处理10分钟，滤过，取续滤液，即得。 (参照药典) 供试品溶液制备：精密称取本品40 mg， 同对照提取物溶液的制备方法制得供试品溶液。 (参照药典) 结果与讨论 3.1银杏叶对照提取物指纹图谱 按照1.2中色谱分析条件，对银杏叶对照提取物溶液和参照物溶液分别进行上机分析，空白溶剂色谱图如图2，目标物出峰处无干扰。对照提取物和参照物色谱图见图3、4所示，其中6号峰保留时间为3.892 min， 与参照物芦丁出峰时间一致。其余17个主峰与药典规定一致。 图2空白溶剂色谱峰 mAU 图3参照物芦丁色谱峰 mAU 图4银杏叶对照提取物指纹图谱 Nexera LC-40 液相色谱系统采用更加节约空间的二元输液泵一体化设计，最大耐压70 MPa， 可轻松实现延时短且精度高的高压梯度，流量精确度的误差在0.06%。此外， SIL-40C XR 自动进样器可以在5秒内完成进样，进样速度较之前产品提升一倍，有效缩短多样品分析进程时间。因此，与常规液相色谱系统分析相比(图5) Nexera LC-40 液相色谱系统缩短了分析时间，提高分析效率。 mAU 图5常规液相色谱系统银杏叶对照提取物指纹图谱(岛津常规液相采集图谱) 3.2供试品和对照提取物相似度评价 选市售某厂家银杏叶提取物片按2中方法处理得到供试品溶液，并按1.2中色谱分析条件上机分析。结果表明，供试品溶液指纹图谱与对照提取物溶液指纹图谱相似。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版计算供试品和对照提取物溶液的指纹图谱相似度，全峰相似度在0.927以上，满足药典中不低于0.90的规定，指纹图谱相似度比较结果如图6所示。 图6供共品和对照提取物指纹图谱相似度比较 (S1：对照品S2：供试品) 表2供试品和对照提取物指纹图谱相似度计算结果 S1 S2 Sl 1.000 0.927 S2 0.927 1.000 3.3精密度实验 将方法2中配制的银杏叶对照提取物溶液连续进样6次，考察仪器精密度。17个主峰的保留时间和面积RSD值分别在0.106%~0.636%和0.152%~2.601%之间，表明仪器精密度良好，详见图7和表3。 图7银杏叶提取物对照品溶液6针重复性色谱图 表3银杏叶提取物对照品溶液重复性结果((n=6) 峰号 RSD% (2mg/mL) 保留时间 峰面积 0.283 0.643 2 0.317 2.011 3 0.516 1.875 4 0.592 0.234 5 0.635 0.435 6 0.280 0.152 7 0.234 0.905 8 0.284 0.482 9 0.262 0.338 10 0.282 0.393 11 0.253 0.596 12 0.229 0.526 13 0.209 0.905 14 0.169 1.326 15 0.173 0.781 16 0.115 0.212 17 0.106 2.601 I结论 本文采用岛津 Nexera LC-40 高效液相色谱系统，建立了银杏叶提取物指纹图谱的测定方法。该方法分析时间短，供试品和银杏叶对照提取物中17个主色谱峰分离效果良好。采用中药色谱指纹图谱相似度度价系统计算供试品和对照提取物的指纹图谱相似度，全峰相似度在0.927以上，满足药典中不低于0.90的规定。连续6针进样，17个目标峰保留时间和峰面积的RSD 分别在0.106%~0.636% 和0.152%~2.601%之间，表明仪器精密度良好。因此，该方法可为银杏叶提取物的制剂质量控制提供帮助。 Building B2， No.180 Yizhou Road， Shanghai 本文采用岛津Nexera LC-40高效液相色谱系统，建立了银杏叶提取物指纹图谱的测定方法。该方法分析时间短，供试品和银杏叶对照提取物中17个主色谱峰分离效果良好。采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算供试品和对照提取物的指纹图谱相似度，全峰相似度在0.927以上，满足药典中不低于0.90的规定。连续6针进样，17个目标峰保留时间和峰面积的RSD分别在0.106%~0.636%和0.152%~2.601%之间，表明仪器精密度良好。