陈皮配方颗粒中特征图谱检测方案(液相色谱仪)

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SSL-CA20-219Excellence in Science Excellence in ScienceLC-217 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.- Analytical Applications CenterTel： 86(21)34193996Email： sshzyan@shimadzu.com.cnhttp：//www.shimadzu.com.cn 使用岛津 Nexera LC-40 XS 进行陈皮配方颗粒特征图谱分析 LC-217 摘要：本文采用岛津 Nexera LC-40 XS 高效液相色谱仪，参考国家药典委员会公示的《陈皮配方颗粒》质量标准中的色谱条件，对陈皮配方颗粒特征图谱进行了分析。实验结果显示：在本系统下，橙皮苷色谱峰的理论塔板数大于15000，符合系统适用性要求；空白溶液在5个特征峰位置处无明显色谱峰，不干扰特征图谱分析；供试品溶液连续进样6次，各特征峰保留时间和峰面积的 RSD 分别在0.010%~0.067%和1.718%~1.947%之间，仪器精密度良好；待测样品特征图谱中呈现与参照物特征图谱对应的特征峰，各特征峰的相对保留时间均在规定值的±10%之内， 峰1、4、5的相对峰面积均符合标准规定。 关键词： NEXERA LC-40 XS高效液相色谱仪陈皮 配方颗粒 特征图谱 陈皮为芸香科植物橘Citrus reticulata Blanco 及其栽培变种的干燥成熟果皮。陈皮性温，味苦、辛，具有理气健脾、燥湿化痰的功效，主要用于治疗脘腹胀满、食少吐泻、咳嗽痰多。 国家药典委员会发布了《关于中药配方颗粒品种试点统一标准的公示》，160个中药配方颗粒品种拥有了试点统一标准，为中药配方颗粒的质量控制提供了依据。 中药配方颗粒也称“单味中药浓缩颗粒”、、“中药新型颗粒饮片”、 “免煎饮片”等，是以符合炮制规范的中药饮片为原料，经现代工艺提取、浓缩、干燥、制粒精制而成的纯中药产品系列。2019年11月8日， 本实验采用 Nexera LC-40 XS 高效液相色谱仪对标准中的陈皮配方颗粒进行了特征图谱分析，该系统稳定性好，重复性高，特征图谱满足药典委员会公示的陈皮配方颗粒质量标准的要求，能够为陈皮配方颗粒的质量控制提供帮助。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 Nexera LC-40 XS 液相色谱仪，包括LC-40 系统控制器， LC-40D XS 输送泵， LC-40C XS自动进样器， CTO-40S 柱温箱， SPD-40 紫外检测器，LabSolutions Ver. 5.97 色谱工作站。 图1 Nexera LC-40 XS 高效液相色谱仪 1.2分析条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(100mm×2.1mml.D.，2.2 um) 流动相：A：0.5%冰醋酸溶液；B：乙腈 流速：0.4mL/min 柱温：25℃ 检测波长：283nm 进样体积：1uL 洗脱方式：梯度洗脱，B相起始浓度为13%，时间程序如表1所示。 表1 梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 15 Pumps Pump B Conc. 20 25 Pumps Pump B Conc. 34 44 Pumps Pump B Conc. 42 45 Pumps Pump B Conc. 95 50 Pumps Pump B Conc 95 50.1 Pumps Pump B Conc 13 55 Controller Stop 样品前处理 对照药材参照物溶液的制备：取陈皮对照药材1.0g，置具塞锥形瓶中，加甲醇100mL，密塞，超声处理(功率600W，频率40kHz) 60分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 对照品参照物溶液的制备：取柚皮芸香苷、橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含100 ug的混合溶液，即得。 供试品溶液的制备：取陈皮配方颗粒适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率600W， 频率40 kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 结果与讨论 3.1色谱图 按照1.2中色谱分析条件，对空白溶剂、对照药材参照物溶液、对照品参照物溶液和供试品溶液分别上机分析，空白溶剂色谱图如图2，目标物出峰处无干扰。对照品参照物、对照药材参照物和供试品色谱图见图3-5，其中峰1为柚皮芸香苷、峰2(S)为橙皮苷。 图23空白溶剂色谱图 检测器A283nm 图3对照品参照物溶液色谱图 图4对照药材参照物溶液色谱图 图5供试品溶液色谱图 3.2系统适用性考察结果 对照品参照物溶液、对照药材参照物及供试品溶液中橙皮苷特征峰的系统适用性结果如下表所示： 表2系统适用性结果 名称 对照药材参照物溶液 对照品参照物溶液 供试品溶液 理论塔板数 38，552 42，553 36，532 各样品溶液中橙皮苷的理论塔板数均不低于15000，本实验结果符合标准规定。 3.3供试品和对照特征图谱对比结果 参考《陈皮配方颗粒》特征图谱项的对照特征图谱可知，供试品和对照药材参照物色谱图中呈现了5个特征峰，5个特征图谱的保留时间结果如表3所示。以橙皮苷参照物相应对的峰为S峰，计算各特征峰与Ｓ峰的相对保留时间和相对峰面积，结果如表4所示。 表3 供试品和对照药材参照物色谱图中特征峰的保留时间(min) 名称 峰1 峰2(S) 峰3 峰4 峰5 对照药材参照物 10.634 13.195 20.645 30.774 35.457 供试品 10.628 13.195 20.656 30.796 35.473 表4供试品特征图谱结果 (min) 名称 峰1 峰3 峰4 峰5 实测值 -- 1.57 2.33 2.69 相对保留时间 规定值 1.60 2.42 2.79 偏差 -1.88% -3.72% -3.58% 标准允许偏差 ±10% ±10% ±10% 相对峰面积 实测值 0.19 0.53 0.22 规定值 0.03~0.92 --- 0.03~0.58 0.02~0.30 与对照药材参照物色谱中5个特征峰的保留时间相对应，各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积均符合质量标准规定。 3.4精密度实验 取供试品溶液连续进样6次，考察仪器精密度。5个特征峰保留时间和峰面积的 RSD 分别在 0.010%~0.067%和1.718%~1.947%之间，表明仪器精密度良好，详见图6和表5。 图6供试品溶液精密度测试色谱图(n=6) 表5 供试品溶液精密度测试结果(n=6) 峰号 峰1 峰2(S) 峰3 峰4 峰4 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 保留时间 峰面积 (min) (min) (min) (min) (min) 1 10.628 12227 13.195 65401 20.656 2608 30.796 34413 35.473 14593 2 10.631 12385 13.197 63013 20.65 2548 30.794 33064 35.48 13920 3 10.645 12843 13.208 66427 20.655 2653 30.801 34764 35.489 14723 4 10.64 12286 13.207 65060 20.654 2627 30.797 33909 35.479 14404 5 10.642 12267 13.219 65100 20.655 2603 30.788 34146 35.477 14499 6 10.637 12609 13.208 64695 20.655 2526 30.793 33784 35.476 14424 RSD(%) 0.062 1.947 0.067 1.719 0.010 1.855 0.014 1.718 0.016 1.905 结论 本文采用岛津 NEXERA LC-40 XS 高效液相色谱仪，对陈皮配方颗粒的特征图谱进行了分析。实验结果显示：在本色谱系统下，橙皮苷参照物色谱峰的理论塔板数为42，553，符合系统适用性要求；空白溶液在5个特征峰位置无明显色谱峰，不干扰分析测定；供试品溶液连续6次进样，各特征峰保留时间和峰面积的 RSD 分别在 0.010%~0.067%和1.718%~1.947%之间，仪器精密度良好；对陈皮配方颗粒供试品溶液进行测定，供试品色谱图中5个特征峰保留时间与对照药材参照物色谱中5个特征峰的保留时间相对应，各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积均符合质量标准规定。本系统满足陈皮配方颗粒的特征图谱分析要求。 岛津应用云 本文采用岛津Nexera LC-40 XS高效液相色谱仪，参考国家药典委员会公示的《陈皮配方颗粒》质量标准中的色谱条件，对陈皮配方颗粒特征图谱进行了分析。实验结果显示：在本系统下，橙皮苷色谱峰的理论塔板数大于15000，符合系统适用性要求；空白溶液在5个特征峰位置处无明显色谱峰，不干扰特征图谱分析；供试品溶液连续进样6次，各特征峰保留时间和峰面积的RSD分别在0.010%~0.067%和1.718%~1.947%之间，仪器精密度良好；待测样品特征图谱中呈现与参照物特征图谱对应的特征峰，各特征峰的相对保留时间均在规定值的±10%之内，峰1、4、5的相对峰面积均符合标准规定。