维生素片中水溶性维生素检测方案(液相色谱仪)

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30化学分析计量2010年，第19卷，第1期 盛灵慧，等：液相色谱法测定多元维生素片中4种水溶性维生素31 液相色谱法测定多元维生素片中 c4种水溶性维生素 盛灵慧 赵正宜王 晶 黄 峥 (中国计量科学研究院，北京 100013) 摘要 采用高效液相色谱法测定多元维生素片中盐酸硫胺(B)、核黄素(Bz)、泛酸钙(B5)、盐酸吡哆醇(B。)的含量。重点考察了提取条件对于维生素测定的影响，4种维生素在确定的浓度范围内分别与色谱峰面积呈良好的线性关系，?≥0.9999，加标回收率为99.2%~101.4%。4种维生素的检出限分别为0. 30、019、0.45、0.11Hg/g(S/N>10)。该方法可作为实际测试标准方法使用。 关键词 维生素B维生素B， 维生素Bs维生素 B。6高效液相色谱 维生素(vitamin)又名维他命，是维持人体生命活动必需的一类有机物质，也是保持人体健康的重要活性物质。维生素在体内的含量很少，但在人体生长、发育过程中却发挥着重要的作用。目前，同时分析多种水溶性维生素的方法多有报道，主要为非离子对等度、梯度洗脱液相色谱法等，但在实际样品分析中目前已有的方法不能完全满足分离要求，难以消除基体干扰，使目标维生素不能获得理想的分离度。 笔者采用高效液相色谱法对复合维生素的分析方法进行了优化，考察了前处理过程中提取液的 pH值、提取液的体积、超声温度等条件对于测量结果的影响。 1实验部分 1主要仪器与试剂 高效液相色谱仪：Agilent1200型，配有 DAD紫外检测器，美国安捷伦公司； 恒温水浴槽：DK-8D型，上海一恒科技有限公司； 超声波清洗机：CQ25-12D型，宁波新芝生物科技有限公司； 电子天平：ME235s，d=0.01 mg，德国赛多利斯公司； 维生素标准物质：维生素 B， (BW 3600)、维生素 B (BW 3601)、维生素 B， (BW 3602)、维生素B， (BW 3220)，自制； 维生素药片样品：惠氏维生素银片、复合维生素B片，购自金象大药房； 三氟乙酸：99.8%，HPLC级，美国 Sigma公司； 己烷磺酸钠：98%，HPLC级，美国 Fisher公司；甲醇：HPLC级，美国 Fisher公司； 实验用水为 M illipore超纯水。 1.2色谱条件 色谱柱：Waters A tantis T3 柱(250 mm ×4.6mm， 5lm)；流动相：乙乙(A)- 15 mmol/L 己烷磺酸钠和50HL/L三氟乙酸混合溶液(B)，流速为1mL/m in；检皮波长：210 nm；梯度洗脱，洗脱程序如表1所示。 表1洗脱程序 时间/min A的体积分数/% B的体积分数/% 0 15 15 20 8585 80 8 20 1.3样品前处理 准确称取 150mg复合维生素样品于 50mL离心管中，加入45mL盐酸水溶液(pH6.0)震荡摇匀，随后将离心管置于30℃水浴中超声提取30m in，静置，取上清液过滤，上机测定。 2结果与讨论 21水浴温度 在维生素片剂的测定过程中，维生素B，的溶解度很小，通常为了增加维生素B，的测试准确度，需要在一定的水浴温度下进行超声。超声是一种能量的释放过程，在超声的同时会带来水温的增加，在实验中发现，随着水温的变化，维生素片剂中维生素B的测定结果具有显著性的差异。维生素含量随温度的变化曲线如图1所示。 对图1进行分析发现，随着水温的升高维生素B，的含量有所增加，增加幅度为4.1%，在30℃以后变化趋于平稳；而随着温度的升高维生素B的含量急下降。综合比较之后实验选定30℃作为超声的初始温度，在超声过程中，确保水浴温度在30~40℃之间变化，为了增加维生素B的溶出，实 m-Bl：·B2； ▲-B5；v-B6 图1维生素含量-温度曲线图 验中提高了水的体积，通过多次实验并参考了 PeiChen等发表的论文确定样品与水的配比为150mg/(45mL)。 22线性方程和检出限 采用百万分之一天平精密称取维生素B维生素Bz、维生素 B，、维生素 B6，分别加水溶解配制浓度为0.573、0.400、0.834、0.734mg/g标准储备溶液，之后依次稀释获得标准溶液，在选定的条件下进行液相色谱测试，以色谱峰面积(Y)对样品浓度(X)进行线性回归，4种维生素的回归方程、线性相关系数、线性范围和检出限(S/N>10)如表2所示。 表2线性方程、线性范围和检出限 维生素 回归方程 相关系数(?) 线性范围/Hg g1 检出限/Hg g-1 B：B2B5B6 Y=13244X-3.0174Y=12208X-19792Y=4069. 1X-0. 1393Y=34343X-11.783 0.9999111 1.5~~1002.1~1404.4~~2801.9~120 0.30 0.19 0.45 0.11 23回收试验 准确称取维生素B维生素B、维生素B维生素B、复合维生素各087、050、3.07、1. 08、150mg于 50mL离心管中，加水溶解后，定容至45mL，30℃水浴超声 30 min，取上清液过滤，按1.2色谱条件进行测试。测定结果及平均回收率如表3所示。 表351回收试验结果(n=6) 维生素 加标量/mg 测得量/mg 回收率/% RSD/% B：B，B5B6 0.870.503.071.08 0.860. 503.121.07 99.2100.0101.499.3 1.13 1.16 71.07 10.97 2.4 日间稳定性试验 维生素样品的稳定性受环境条件影响较为明显，为了保证测试结果的准确性，进行了方法的稳定性试验。因为整个分析过程从样品的前处理到液相色谱测试完成不超过 24 h，所以只进行了日间稳定性考察。稳定性测试结果列于表4. 维生素 起始质量分数 24h后质量分数 差值 B B2 B5 B。 1.02 1.23 8.62 1.76 1.00 1.21 8.65 1.77 0.02 0.02 - 0. 03 0.01 从表4测定结果可以得出复合维生素在日间的稳定性良好，4种维生素含量在24 h之内没有发生显著性的变化。 2.5样品测试 根据实验中确定的前处理条件和液相色谱条件，对购买的两种复合维生素片剂中4种维生素的含量进行了测试，测试结果见表4.图2为4种维生素标准物质混合溶液色谱图，图3为惠氏维生素样品色谱图。 表5样品测试结果 mg/g 样品 维生素B 维生素 B， 维生素 Bs 维生素B 惠氏维生素银片 复合维生素B片 1.02 1.98 1.28 1.05 8.911.25 1.87 0.21 图24种维生素标准物质混合溶液色谱图 图3惠氏维生素样品色谱图 4种维生素均为水溶性维生素，极性较大，在普通的C柱上保留较弱，通过加入离子对试剂改变了其保留特性，延长了保留时间。从谱图3中可以看到4种目标维生素能够在所选择的液相色谱条件下得到基线分离，消除了维生素片剂中其它组分的干扰，满足定量要求。 3结语 所建立的液相色谱法具有较强的实用性，有效地避免了基体干扰等问题，测定过程简单，方法准确、可靠，重现性好，可用于实际样品中维生素含量 的检测。 ( 参考文献 ) ( [1] Pei Chen， W ayne R Wolf LC/U V MS-MRM for t h e s imultane- ous detemination of water- sol u ble vit a m ins in mu l ti- vit a m in di- e tary supplment s [J] . A nal B ioanal Chem ， 2007 ， 387： 2 441 ) ( . 2 4 48. ) ( [2] Pei Chen， M ustafa Ozcan， W ayne R W o l f Con t ents of selected B vitam ins in N IST SRM 3 280 multivitam in /multielement t ablets by liquid chromatography i s otope d i lution m a ss sp e c trometry [J ].Anal B ioanal Chem，2007 ， 389 ： 343- 3 47. ) DETERM INATDNOF SEL ECTED WATER- SOLUBLE VITAM INS IN TABL ETS BY HPL C Sheng Linghui， Zhao Zhengyi， W ang jing， Huang Zheng (National Institute ofMetiology China， Beijing 100013， China) ABSTRACT The HPLC method for detemm ination of thiam ine， riboflavin， calcium pantothenate， pyridoxine in multielementtablets was established The extraction process was op tim ized In the fixed range of concentration， the method exhibited excellent line-arity， ≥0 9999. The recovery was 99.2% -101. 4%. The lim its of quantifications (LOQ) of thiam ine， riboflavin， calcium panto-thenate， pyridoxine were 0. 30， 0 19， 0 45， 0 11 Hg /g (S/N>10)， respectively：TThe method can be used as standard method inroutine testing KEYWORD S vitam in B， vitam in B2， vitam in B5， vitam in B6， HPLC 美国《科学》杂志公布2009十大科学突破 美国《科学》志公布了2009年十大科学突破，其中对迄今最古老原始人“阿尔迪”(A rdip ithecus ram idus)的化石研究位居首位，另外9项重大科学突破名单如下： 费米望远镜探测到脉冲星：美宇航局费米伽马射线太空望远镜帮助确认了过去未知的脉冲星，并对它们所发射出的独特伽马射线有所理解。脉冲星是具有高度磁性并快速旋转的中子星。 雷帕霉素：研究人员发现，常用免疫抑制药物雷帕霉素能让实验鼠延年益寿。这是科学家在哺乳动物身上第一次取得这种结果。这一发现之所以重要，是因为对实验鼠的治疗是在它们步入中年后才开始的。 石墨烯：在一连串快速进展中，科学家对石墨烯的特性进行了探究，并开始将该材料制作成实验性电子装置。石墨烯是已知强度最高的材料，具有高度导电性的硅原子层。 植物ABA受体：搞清帮助植物在干旱时期存活的某一关键分子的结构，或能帮助科学家找到保护作物不受长期干旱影响的新技术，从而在世界范围内提高作物产量，帮助边缘土地上的生物燃油生产。 世界首个X射射激光：斯坦福直线加速器中心(SLAC)国家加速器实验室揭开了世界上第一个X射线激光的神秘面纱。这是一种强大的研究工具，能够拍下进行中的化学反应的照片，改变材料的电子结构，实施涉及诸多科学领域的一系列其它实验。 基因疗法复苏：欧洲和美国研究人员提出了涉及基因疗法的新战略，从而在治疗致命性脑病、遗传性失明和免疫系统失调疾病等方面取得了进展。 单极子：在一次实验中，对自旋冰(奇特的水晶质材料)进行研究的物理学家创制了可模仿“磁单极子'预测行为的磁涟波 (magnetic ripple)。磁单极子是只有一个磁极的基本 粒子 LCROSS探测器在月球上发现水：今年10月，美宇航局航天器上的传感器在一个燃料耗尽的火箭级残骸中发现了水蒸气和冰。研究人员用这个火箭级故意撞击月球的南极附近地区以寻找水。 在轨修复“哈勃望远镜：今年5月，美宇航局发射航天飞机对“哈勃太空望远镜进行最后一次修复，这次任务几乎完镁无暇，令这台望远镜的观测能力更强，赋予其新的生命，最终拍下一组迄今最为壮观的太空照片。 此外，科学》杂志还对2010年科学热点话题进行了展望，指出了值得关注的科学领域，包括癌细胞代谢、阿尔法磁谱仪、外显子组测序与疾病、多能干细胞治疗神经精神性疾病以及载人航天飞行的未来。 (李超) 工信部要求食品企业建立产品召回制度 不久前的“农夫山泉”“统一事件再次给市场敲响了食品安全的警钟，对此，工信部日前发布通知要求，要求企业建立原(辅)料查验制度，严格食品添加剂使用登记和存放保管，确保食品安全。 工信部表示，当前食品质量安全事故还时有发生，质量安全风险依然存在，质量安全形势仍很严峻。 对此，通知要求，企业必须进一步加强食品生产质量安全管理。措施包括加强企业全员质量教育，提高生产者责任意识；建立生产过程质量安全控制制度。定期对厂区内环境、生产场所和生产设备等清洁卫生状况进行自查，并保存相关记录；规范产品进出库管理制度。实行库房产品定置存放管理，严格库存产品标识管理；建立产品出厂检验记录和食品召回制度。对出现质量安全问题的产品实施食品召回和无害化处理，严禁不合格产品出厂；要建立企业产品安全自查自纠制度。通过制度建设，及时堵塞管理漏洞，化解质量安全风险，把食品安全隐患消灭在企业自身环节。 C China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net 采用高效液相色谱法测定多元维生素片中盐酸硫胺 (B1 )、核黄素 (B2）、泛酸钙 (B2) 、盐酸吡哆醇 (B6)的含量 。 重点考察了提取条件对千维生素测定的影响 ，4种维生素在确定的浓度范围内分别与色谱峰面积呈良好的线性关系 ， R2≥0.9999, 加标回收率为 99. 2% -101. 4%。 4种维生素的检出限分别为 0.30、 0.19、 0.45、 0.11µg/g(S/N＞1O) 。 该方法可作为实际测试标准方法使用。