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SSL-CA20-267Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-496 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co., LTD.- Analytical Applications CenterTel:86(21)34193996Email: sshzyan@shimadzu.com.cnhttp://www.shimadzu.com.cn LCMS-8050 测定血浆中利福平浓度 LCMSMS-496 摘要:本文建立了一种使用岛津 LCMS-8050三重四极杆液质联用仪测定血浆中利福平的方法。实验采用该系统在 6.0 min 内完成利福平的检测,采用同位素内标法定量,定量下限0.1 ug/mL,线性范围为 0.1~10 ug/mL,相关系数0.9997。定量下限与低、中、高三水平质控浓度的批内、批间精密度 RSD 均小于10.26%,各浓度水平质控样品的准确度均符合生物样本分析要求,提取回收率、基质效应等结果均符合生物样品分析要求。该方法具有分析速度快、专属性强、灵敏度高的特点,可用于人体内利福平血药浓度的测定。 关键词:三重四极杆液质联用仪 血浆 利福平 利福平是抗结核治疗的一线用药,在临床上应用较长时间,但是其个体差异大,尤其是对于一些特殊的用药群体例如儿童,合适的用药剂量仍然存在问题,用量过大容易导致肝损伤等系列不良反应,剂量不足又容易诱发耐药。 本文采用岛岛超高效液相色谱仪 LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用,建立了血浆中利福平的检测方法,该方法分析速度快、选择性强、灵敏度高,可供相关检测人员参考。 实验部分 1.1仪器 本实验采用岛津 LCMS-8050超高效液相色谱三重四极杆质谱联用系统,具体配置为: 系统控制器: CBM-20A脱气机: DGU-20A5R输液泵:LC-30AD×2自动进样器: SIL-30AC柱温箱:CTO-20AC质谱仪: LCMS-8050 色谱工作站: LabSolutions Ver. 5.98 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱: Shim-pack GIST C18(100 mm L.×2.1mml.D.,2.0 um, 岛津(上海)实验器材有限公司,PN: 227-30001-04)) 流动相:A相-5mM甲酸铵溶液,B相-乙腈 流速:0.3mL/min 进样体积:2uL 柱温:40℃ 洗脱方式:梯度洗脱,B相初始浓度为20%,时间程序见表1。 表1 时间程序 Time(min) Module Command Value 0.50 Pumps Pump B Conc. 20 2.50 Pumps Pump B Conc. 90 3.50 Pumps Pump B Conc. 90 3.51 Pumps Pump B Conc. 20 6.00 Controller Stop 质谱条件: 分析仪器:LCMS-8050 碰撞气:氩气 离子源:ESI(+) 脱溶剂管温度:250℃ 接口电压:4.0kV 加热模块温度:400℃ 雾化气:氮气3.0 L/min 接口温度:300℃ 干燥气:氮气10 L/min 扫描模式:MRM 加热气:空气10 L/min MRM参数:见表2 表2MRM 参数 化合物名称 前体离子 产物离子 1 Pre (V) CE Q3 Pre (V) 利福平 823.40 399.20 -30.0 -26.0 -26.0 利福平 -D3 826.40 402.20 -30.0 -26.0 -26.0 1.3标准品与质控样品的配制 分别精密称取两份利福平适量,用甲醇溶解配制两份 1.0 mg/mL福福平储备液。取其中一份储备液用甲醇逐级稀释成浓度为500、250、100、50、25、10、5 ug/mL的标准工作曲线;另一份储备液用甲醇分别稀释成浓度为375、50、7.5 ug/mL的质控溶液。分别取标准工作曲线中各浓度点 20 uL 加入 980 pL人空白血浆中,依次配制成标准曲线0.1、0.2、0.5、1、2、5、10 ug/mL;分别取三个不同浓度质控溶液 20 uL加入980 uL人空白血浆中,依次配制成0.15、1、7.5 ug/mL 质控样品。 精密称取利福平-D3适量,用甲醇溶解配制为 1.0 mg/mL储备液。将配制好的利福平-D3储备液用甲醇稀释为 1.0 ug/mL内标溶液,待用。 1.4血浆样品前处理方法 取 10 uL血浆样品,加入90uL水,加入10 uL内标溶液,加入390uL乙腈,涡旋振荡1分钟,11200C转/分钟离心5分钟,取100uL上清液,加900uL水,涡旋混匀后进样分析,进样体积2uL。 结果与结论 2.1方法选择性 取空白血浆,制备空白血浆样品 (double blank)、只添加内标的空白样品(blank) 、0.1 ug/mL 血浆基质加标样品,按照1.4方法处理并测定, MRM 色谱图见图1。结果表明,空白血浆中的内源物质无干扰,同时同位素内标对目标化合物的通道没有影响,方法具有较强的选择性。 ISTD 826.40>402.20(+) 2.90e1 A B E F 图1.利福平与利福平-D3色谱图(A、B: double blank 样品;C、D: blank样品; E、F: 0.1ug/mL血浆基质加标样品) 2.2线性范围 按照1.3中的条件制备0.1、0.2、0.5、1、2、5、10 ug/mL 的血浆加标样品,按1.4中的前处理条件处理样品,按照1.3中的仪器条件进行测定,同位素内标法进行定量。所得校准曲线如图2所示,线性方程及相关系数见表3,其中y值代表利福平峰面积与利福平-D3 峰面积的比值,x值代表血浆中利福平浓度。结果表明该方法利福平在 0.1~10 ug/mL的浓度范围内线性关系良好,方法定量下限为0.1 ug/mL. Area Ratio 图2.利福平校准曲线 表 33校准曲线参数(线性回归,权重为1/C) 编号 名称 线性方程 相关系数 准确度(%) 利福平 Y=(0.498350)X+(0.00402801) 0.10~10.00 97.3~105.8 0.9997 2.3方法精密度与准确度 取已配制好的0.15、1.00、7.50 ug/mL质控样品以及定量下限 0.10 ug/mL样品,按照1.4方法制备,每个浓度的人血浆样品在1天内制备6份平行样品分析,连续测定3天,每日随行标准曲线,用测得的质控样品中利福平浓度计算批内及批间精密度,结果见表4。结果显示,各浓度水平精密度、准确度均符合生物样本分析要求。 表47方法批内批间精密度和准确度结果 理论浓度(ug/mL) 批内精密度 RSD% 批间精密度 RSD% 准确度% 0.10 7.86 10.26 84.5~116.9 0.15 8.43 9.46 83.8~112.6 1.00 2.90 4.49 95.9~113.2 7.50 1.17 4.44 89.0~104.1 2.4方法回收率考察 考察三个浓度质控样品(每个浓度重复6次)的回收率,结果如表5所示,各浓度水平利福平的回收率均大于85%。 表5方法回收率结果 浓度水平 理论浓度(ug/mL) 平均回收率% LQC 0.15 91.2 MQC 1.00 89.9 HQC 7.50 87.9 2.5基质效应考察 基质效应考察三个浓度水平质控样品(每个浓度重复6次),分别计算各浓度水平的基质效应及内标归一化基质效应,结果见表6,各浓度水平基质效应因子及内标归一化基质效应因子均在85%~115%之间。 表6 基质效应考察结果 浓度水平 理论浓度 (ug/mL) 基质效应因子 内标归一化基质效应因子 LQC 0.15 101.1% 98.3% MQC 1.00 95.9% 93.2% HQC 7.50 96.2%. 93.5% 内标基质效应因子 102.9% 结论 本文使用岛津LCMS-8050 三重四极杆液质联用仪建立了血浆中利福平的测定方法。该方法在6.0 min 内快速完成利福平的检测,采用同位素内标法定量,定量下限0.1 ug/mL,线性范围为 0.1~10 ug/mL, 相关系数为0.9997。定量下限与低中高三水平质控浓度的批内、批间精密度及准确度均满足检测需求,回收率及基质效应等结果均符合生物样品分析要求。该方法快速简单、选择性强、灵敏度高,可用于血浆中利福平的定量分析。 岛津应用云 利福平是抗结核治疗的一线用药,在临床上应用较长时间,但是其个体差异大,尤其是对于一些特殊的用药群体例如儿童,合适的用药剂量仍然存在问题,用量过大容易导致肝损伤等系列不良反应,剂量不足又容易诱发耐药。本文采用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用,建立了血浆中利福平的检测方法,该方法分析速度快、选择性强、灵敏度高,可供相关检测人员参考。
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岛津企业管理(中国)有限公司为您提供《血浆中利福平检测方案(液质联用仪)》,该方案主要用于全血/血清/血浆中生化检验检测,参考标准《暂无》,《血浆中利福平检测方案(液质联用仪)》用到的仪器有岛津三重四极杆液质谱联用仪LCMS-8050。
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