心可舒胶囊中人参皂苷Rb3检测方案(液质联用仪)

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SSL-CA20-749Excellence in Science Excellence in ScienceLCMSMS-596 岛津企业管理(中国)有限公司-分析中心Shimadzu (China) Co.， LTD.-Analytical Applications CenterEmail： sshzyan@shimadzu.com.cn Tel：86(21)34193996http：//www.shimadzu.com.cn LC-MSMS 法检测心可舒胶囊中人参皂苷Rb3的含量 LCMSMS-596 摘要：本文参考国家药监局发布发心可舒胶囊补充检验方法第58号公告之检测方法(BJY201905)，建立一种使用岛津超高效液相色谱仪-三重四极杆质谱仪检测心可舒胶囊中人参皂苷Rb3 含量的方法。该方法采用外标法定量，线性良好，相关系数为 0.9996；灵敏度高，仪器检出限义 0.4 ng/mL， 低于检测方法 (BJY201905)的判定浓度点(4.0 ng/mL)；在精密度上，三个浓度下保留时间和峰面积的相对标准偏差 RSD 值分别在0.03~0.04%和2.30~3.94%之间，仪器精密度良好；在判定浓度点的加标回收率为67.5%。该方法灵敏可靠，可为心可舒胶囊中 Rb3含量的检测提供参考。 关键词：三重四极杆质谱仪儿心可舒胶囊人参皂苷Rb3 心可舒胶囊由丹参、葛根、三七、木香与山楂这5味药组成，药方中三七活血通脉为臣药。，三七为临床常用的贵细中药材，入药部位为根及根茎，但因其价格因素，部分不良企业存在以三七茎叶掺入甚至替代三七投料的现象，但依据心可舒胶囊的现行法定标准，无法区分制剂中所投药材为三七根茎还是三七茎叶。为打击此种行为，依据三七茎叶与三七根茎中所含皂苷类成分种类、比例的差异，特别是三七茎叶中人参皂苷Rb3含量较高，而三七根茎中不含或极少含有人参皂苷Rb3，因此可以人参皂苷 Rb3的含量作为依据判定药方是否有非法添加，对药物的真伪进行鉴定。 在2015版中国药典中，人参皂苷Rb3的测定方法分别有高效液相色谱方法(通则0512)和三重四极杆质谱法(通则0431)，由于通常测试的样品中Rb3含量相对较低，且质谱法的灵敏度也更高，目前更多采用质谱法进行测试。2019年7月22日，国家药监局发布了关于心可舒胶囊等药品的补充检验方法第58号公告，在该公告中发布的检测方法 (BJY201905)正是采用三重四极杆液相质谱法。 本文参考该公告中的检测方法(BJY201905)，使用岛津超高效液相色谱仪-三重四极杆质谱仪建立心可舒胶囊中人参皂苷Rb3含量的检测方法，供相关检测人员参考。 本实验采用岛津超高效液相色谱仪 LC-30A 与三重四极杆质谱仪 LCMS-8045 联用系统。具体配置为： 系统控制器： CBM-20A月气机： DGU-20A，输液泵：LC-30AD×2自动进样器： SIL-30AC柱温箱： CTO-20AC质谱仪：LCMS-8045 色谱工作站： LabSolutions Ver.5.99 1.2分析条件 液相色谱条件 色谱柱： Shim-pack Scepter C18-120100 mm x2.1 mm l.D.， 1.9 um；P/N：227-31012-05岛津(上海)实验器材有限公司 流动相：A-水；B-乙腈 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样体积：10uL 洗针液：甲醇/水=1/1(v/v) 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为27%，时间程序见表1。 表1.1梯度洗脱时间程序 Time(min) Module Command Value 12.00 Pumps Pump B Conc. 34 15.50 Pumps Pump B Conc. 40 16.00 Pumps Pump B Conc. 95 17.00 Pumps Pump B Conc. 95 17.10 Pumps Pump B Conc. 27 20.00 Controller Stop 质谱条件 离子化模式：ESI-雾化气流速： 3L/min加热模块温度：400℃接口温度：350℃ DL 温度：250℃ 表2MRM 参数表 No. 中文名称 英文名称 CAS# 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bias(V) CE(V) Q3 Pre Bias(V) 1 人参皂苷Rb3 Ginseno- 68406-26-8 1077.25 783.25* 32 46 30 side-Rb3 945.35 30 41 22 *代表定量离子对。 1.3标准溶液配制 参照检测方法BJY201905，精密称取一定量人参皂苷Rb3粉末，溶解于甲醇溶剂，获得100 mg/L储备溶液，在此基础上用20%甲醇溶液稀释获得线性校准溶液，浓度分别为2.0、4.0、10.0、20.0和40.0 ng/mL， 其中4.0ng/mL为方法检出限值的判定浓度。 1.4样品前处理 取10粒心可舒胶囊的内容物，研细，取约1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50mL， 密塞，称定重量，置80℃水浴中加热回流2小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀过滤，取1mL 置100 mL容量瓶中，加20%乙腈溶液稀释至刻度，摇匀过滤即得。 结果与讨论 2.1标准溶液MRM谱图 人参皂苷 Rb3 MRM 色谱图见图1。 图1人参皂苷Rb3 MRM 色谱图 (4.0ng/mL) 图2人参皂苷标准曲线 2.2线性关系 按照1.2中的分析条件对校准溶液进行测定，，以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标，外外法绘制标准曲线。人参皂苷 Rb3的标准曲线见图2，线性方程、相关系数和定量限见表3. 表33线性关系和仪器定量限(权重： 1/C) 名称 校准曲线 线性范围(ng/mL) 准确度(%) 相关系数r 仪器定量限(ng/mL) 人参皂苷Rb3 Y=(5309.87)X+(585.710) 2.0~40 95.4~105.1 0.9996 0.40 2.3精密度实验 对三个浓度的标准溶液连续6次进样，考察仪器的精密度，保留时间和峰面积的精密度结果如表4所示。三个浓度下人参皂苷 Rb3 的保留时间和峰面积的 RSD 值分别在0.03~0.04%和2.30~3.94%之间，仪器精密度良好。 表41精密度结果(n=6) 名称 RSD% (4 ng/mL) RSD%(10 ng/mL) RSD% (20 ng/mL) R.T. Area R.T. Area R.T. Area 人参皂苷Rb3 0.03 3.94 0.03 2.53 0.04 2.30 2.4样品测试和加标回收实验 使用本方法检测了某品牌心可舒胶囊中人参皂苷Rb3含量，测试结果低于检出限(图3)。以此样品进行3个平行浓度的加标回收率测试，加标浓度为判定浓度即 4.0 ng/mL，按照1.4方法处理后上机分析，加标回收结果见表5。该浓度下的平均加标回收率为67.50%，方法可靠。 图3某品牌心可舒胶囊人参皂苷Rb3色谱图 图4加加标回收测试人参皂苷Rb3 色谱图 表5；加标回收率 化合物名称 测试浓度 (ng/mL) 回收率/% 平均回收率/% 2.53 63.25 人参皂苷Rb3 2.81 70.25 67.50 2.76 69.00 结论 本文建立一种使用岛津超高效液相色谱仪-三重四极杆质谱仪普测心可舒胶囊中人参皂苷Rb3 含量的方法。该方法线性良好，相关系数0.9996， 同时灵敏度高，仪器检出限为 0.4 ng/mL， 低于检测方法的判定浓度点(4.0ng/mL)；在精密度上，三个浓度下保留时间和峰面积的相对标准偏差 RSD 值分别在 0.03~0.04%和2.30~3.94%之间，仪器精密度良好；在判定浓度点(4.0ng/mL) 加标回收率为67.5%。该方法灵敏可靠， 可为相关行业人员提供方法参考。 岛津应用云 本文建立一种使用岛津超高效液相色谱仪-三重四极杆质谱仪检测心可舒胶囊中人参皂苷Rb3含量的方法。该方法线性良好，相关系数0.9996，同时灵敏度高，仪器检出限为0.4 ng/mL，低于检测方法的判定浓度点（4.0 ng/mL）；在精密度上，三个浓度下保留时间和峰面积的相对标准偏差RSD值分别在0.03~0.04%和2.30~3.94%之间，仪器精密度良好；在判定浓度点（4.0 ng/mL）加标回收率为67.5%。该方法灵敏可靠，可为相关行业人员提供方法参考。