花椒中麻味物质（不饱和脂肪酸酰胺）检测方案(液相色谱仪)

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【仪电分析】花椒中麻味物质的测定-高效液相色谱法 花椒既是一种常用的食品调味料，被誉为“八大调味品”之一，又是一味传统中药，具有抑菌、麻醉和兴奋等作用。花椒和泥在古时用于涂抹在墙壁上，取温暖、芳香、多子之义，所以名为“椒房”，主指古代皇后所居住的宫殿。花椒中的不饱和脂肪酸酰胺是重要的活性成分，也是呈麻味的主要成分。 一、方法原理 通过高效液相色谱测试已知麻度花椒的峰面积，利用单点法测试供试品的峰面积后计算出供试品麻度(杂峰较少所以有一定的可行性)。 二、主要仪器及试剂 a.高效液相色谱仪：LC220； b. C18反向柱； c.水浴锅； d.超声波清洗仪； e.甲醇。 三、实验方法 3.1参考色谱条件 流动相：水一甲醇； 进样量： 20uL； 流速：0.8mL/min； 检测波长：254nm。 梯度洗脱条件： 时间 min 甲醇V% 水V% 0—0.1 50 50 0.1一15 70 30 15—25 70 30 25—26 50 50 26—35 50 50 3.2样品测试 3.2.1与已知浓度样品做对照(方法一) 准确吸取 0.5 mL 成品花椒油，置于具塞三角瓶中，用分析纯甲醇稀释到150mL，于40℃—50C水浴中，期间每10—15 min 摇晃几次使甲醇充分浸提出待测成分，持续1h，然后拿出静止23h待溶液清澈即可或用离心机离心5 min 加快分层去除乳化，处理结束用针头过滤器过滤待测。 已知其中样品1麻度，测得样品1峰面积及样品2峰面积可得样品2麻度，如下式所示： 式中： m麻度， S-峰面积。 3.2.2与花椒做对照(方法二) a.对照品配制 花椒麻味物质对照品贮备液(100 ug/mL的甲醇溶液)：准确称取100 mg 花椒麻味物质对照品，在容量瓶中用甲醇定容至1000mL。-10℃以下，可保存2年。 花椒麻味物质对照品使用液：分别吸取花椒麻味物质对照品贮备液1.0mL、2.0mL、 3.0mL、4.0mL、5.0mL，用甲醇溶解并定容至10mL， 配制成分别相当于10 ug/mL、20ug/mL、30 ug/mL、40 ug/mL、50ug/mL 浓度的花椒麻味物质对照品使用溶液。 b.供式品制备 准确称取样品 0.5g一1g(精确到0.01g)， 置于具塞三角瓶中，用150mL 的分析纯甲醇醇40C—50℃水浴中振荡浸提30 min 后，再将其转移到分液漏斗中，振摇2 min，静置分层后，收集甲醇萃取液。甲醇不溶部分再用少量甲醇萃取2次一3次，合并甲醇萃取液，定容至500mL， 并用0.45 u.m 孔径滤膜过滤，滤液待测。 四、实验结果 4.1对照品谱图 已知麻度的对照品谱图如图1所示： 图1已知麻度的对照品谱图 4.2结果计算 样品中花椒麻味物质的含量(x)以毫克每克(mg/g)表示，按下式计算： 式中： x-待测液中花椒麻味物质的含量(mg/g)； c--在工作曲线上查出或回归方程求出的花椒麻味物质的含量(ug/mL)； m-样品的质量(g)； V-待测液的定容体积(mL)； 1号样品峰面积为904万，2号样品峰面积538万，3号样品峰面积510万。 2号样品按麻度3度计， 3号样品麻度为：510/538×3=2.84 1号麻度为：904/538×3=5.04 2.84X+5.04(1-X)=3， X=92.7%，即92.7%体积的样品1加7.3%体积的样品3可制得样品2的麻度。 【仪电分析】花椒中麻味物质的测定-高效液相色谱法花椒既是一种常用的食品调味料，被誉为“八大调味品”之一，又是一味传统中药，具有抑菌、麻醉和兴奋等作用。花椒和泥在古时用于涂抹在墙壁上，取温暖、芳香、多子之义，所以名为“椒房”，主指古代皇后所居住的宫殿。花椒中的不饱和脂肪酸酰胺是重要的活性成分，也是呈麻味的主要成分。一、方法原理通过高效液相色谱测试已知麻度花椒的峰面积，利用单点法测试供试品的峰面积后计算出供试品麻度（杂峰较少所以有一定的可行性）。二、主要仪器及试剂a.高效液相色谱仪：LC220；b. C18反向柱；c. 水浴锅；d. 超声波清洗仪；e. 甲醇。三、实验方法3.1 参考色谱条件流动相：水—甲醇；进样量：20 μL；流速：0.8 mL/min；检测波长：254 nm。梯度洗脱条件：时间min甲醇V%水V%0—0.150500.1—15703015—25703025—26505026—3550503.2 样品测试3.2.1与已知浓度样品做对照（方法一）准确吸取0.5 mL成品花椒油，置于具塞三角瓶中，用分析纯甲醇稀释到150 mL，于40 ℃—50 ℃水浴中，期间每10—15 min摇晃几次使甲醇充分浸提出待测成分，持续1 h，然后拿出静止2—3 h待溶液清澈即可或用离心机离心5 min加快分层去除乳化，处理结束用针头过滤器过滤待测。已知其中样品1麻度，测得样品1峰面积及样品2峰面积可得样品2麻度，如下式所示：式中：m—麻度，S—峰面积。3.2.2 与花椒做对照（方法二）a. 对照品配制花椒麻味物质对照品贮备液（100 μg/mL的甲醇溶液）：准确称取100 mg花椒麻味物质对照品，在容量瓶中用甲醇定容至1000mL。-10 ℃以下，可保存2年。花椒麻味物质对照品使用液：分别吸取花椒麻味物质对照品贮备液1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL，用甲醇溶解并定容至 10 mL，配制成分别相当于10 μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL浓度的花椒麻味物质对照品使用溶液。b. 供试品制备准确称取样品0.5 g—1 g（精确到0.01 g），置于具塞三角瓶中，用150 mL 的分析纯甲醇于40 ℃—50 ℃水浴中振荡浸提30 min后，再将其转移到分液漏斗中，振摇2 min，静置分层后，收集甲醇萃取液。甲醇不溶部分再用少量甲醇萃取2次—3次，合并甲醇萃取液，定容至500 mL，并用0.45 μm孔径滤膜过滤，滤液待测。四、实验结果4.1 对照品谱图已知麻度的对照品谱图如图1所示： 图1 已知麻度的对照品谱图4.2 结果计算样品中花椒麻味物质的含量（x）以毫克每克（mg/g）表示，按下式计算：式中：x—待测液中花椒麻味物质的含量（mg/g）；c—在工作曲线上查出或回归方程求出的花椒麻味物质的含量（μg/mL）；m—样品的质量（g）；V—待测液的定容体积（mL）； 1号样品峰面积为904万，2号样品峰面积538万，3号样品峰面积510万。2号样品按麻度3度计，3号样品麻度为：510/538×3=2.841号麻度为：904/538×3=5.042.84X+5.04(1-X)=3，X=92.7%，即92.7%体积的样品1加7.3%体积的样品3可制得样品2的麻度。