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单克隆抗体带电变体中分离分析检测方案(二手分析仪器)

检测样品治疗类生物药品

检测项目含量测定

方案详情文

离子交换是温和条件下分离蛋白质混合物的一个非常有用的技术，最常见的是应用增加盐浓度的缓梯度溶液进行洗脱。pH 梯度洗脱使用频率较低（除专属应用外，例如色谱聚焦），并且需要复杂的缓冲液体系。尽管如此，如今的四元液相色谱系统完全能够利用常规缓冲盐实现 pH 梯度洗脱。本篇应用报告中，我们展示了 pH 梯度洗脱在分离单克隆抗体带电异构体时的优势。本文的工作使用了 Agilent Bio mAb 色谱柱、安捷伦 1260 Infinity生物惰性四元液相色谱系统和安捷伦缓冲液顾问软件。

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蛋白质是复杂的生物分子，含有无数的带有酸性和碱性侧链官能团的氨基酸。这些官能团的范围从羧酸类（天冬氨酸和谷氨酸）和酚类（酪氨酸）到胺类（赖氨酸和组氨酸）和胍类（精氨酸），还包括其他中性或疏水性残基。在给定的 pH 条件下，蛋白质将带有一定电荷（除了等电点处净电荷为 0 外），并且可以与带有相反电荷的吸附剂发生作用。因此，碱性蛋白质将在阳离子交换色谱柱上获得保留。常规的离子交换方法使用增加离子强度（盐浓度）的方法进行洗脱，从而盐离子与蛋白质和吸附剂进行竞争吸附并最终使蛋白质分子从色谱柱上洗脱下来。然而，pH 梯度也可用于该类洗脱。对于阳离子交换色谱，增加 pH 使得蛋白质变成中性或带上负电荷，从而可以从色谱柱上洗脱下来。随着更多复杂的蛋白质被用于研究和分析，这种方法开始受到更多的重视，复杂蛋白质如单克隆抗体，生物制备过程细微的变化即可能导致带电变体的产生。这些细微差异包括 C 端赖氨酸的丢失、脱酰胺基作用和唾液酸化作用（使分子酸性更强）、或者形成琥珀酰亚胺和羧酸侧链的酰胺化（使分子碱性更强）等，如图 1 所示。本文中我们展示了用于分离单克隆抗体带电变体的 pH 梯度方法，该分离用传统的缓冲盐梯度洗脱时难以达到分离的效果。

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