治疗性蛋白中批次间纯化分析检测方案(液相色谱仪)

智能文字提取功能测试中

作者 Ravindra Gudihal 和 SureshBabu C.V. 安捷伦科技(印度)有限公司 印度班加罗尔 Madhavi H.N. 和Uma Maheswari S. GangaGen 生物科技有限公司 印度班加罗尔 应用 Agilent MassHunter Easy Access软件对模式治疗性蛋白进行批次间纯化分析 应用简报 摘要 本应用简报介绍了如何像生物分析科学家在典型生物药理学环境下进行纯度分析那样，使用 Agilent Easy Access 软件来分析模式治疗性蛋白的批次间纯度。分析模式治疗性蛋白的批次间纯度时， 将 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统与 Agilent 6530 精确质量Q-TOF LC/MS 联用， 并通过 Agilent Easy Access 软件进行数据分析。LC/MS 平台拥有卓越的色谱分离度和质量精度，结合强大的数据处理能力，可简便、快速地分析批次间的蛋白纯度。本应用简化了工作流程，使用者可以快速做出决策，以作进一步的下游处理。该软件可用于比较蛋白谱图，从而确保监管机构要求的批次一致性。此外，该软件还有助于了解工艺放大或生产过程中纯化后蛋白的杂质谱图。该数据可帮助开发生物仿制药的公司在产品上市前评估其产品与原始药物的相似度，重要性不言而喻。 蛋白质是公认的具有重要医学应用的生物治疗分子，产品在上市之前必须经过严格的测试。尽管治疗性蛋白的生产过程已经非常规范，但还是可能引入一些与产品或工艺有关的杂质。生产过程之中小的调整，例如培养基中 pH、温度和组分的改变，均会影响最终产品的质量。生产过程中批次间的差异也会导致产品的微异质性。因此，对生产过程中实施的所有变更进行分析非常重要。该应用简报介绍了使用液相色谱仪和高分辨率Q-TOF 分析模式治疗性蛋白在批次间的差异。Easy Access 软件可帮助不熟悉质谱分析的人员使用 LC/MS系统，提高生产率和分析效率。它还提供了一种简便的蛋白纯度分析方法，必要时能帮助分析人员确定样品进一步处理的最佳方法。 实验部分质谱系统配备安捷伦喷射流离子聚焦技术的 Agilent样品6530精确质量 Q-TOF LC/MS 系统不同批次的模式治疗性蛋白，购自印度班加罗尔的 GangaGen 生物科技有限公司。分析软件MassHunter Easy Access 软件(B.05.00)仪器方法参数在表1中列出。液相色谱系统 Agilent 1290 Infinity 液相色谱仪 表1.实验参数 参数 Agilent 1290 LC 色谱柱 Agilent Poroshell 300SB-C18色谱柱， 2.1×75 mm， 5 pm 粒径(部件号660750-902) 柱温 60°C 样品恒温箱 5°C 流动相A 0.1%甲酸的水溶液 流动相B 0.1%甲酸的90%乙腈水溶液 梯度 0分钟20%B 0-15分钟85% B 15-16分钟20%B 停止时间 16分钟 流速 0.5 mL/min 离子模式 正离子模式， ESI(Profile) 干燥气温度 350°C 干燥气体流速 8 L/min 鞘气温度 350 °C 鞘气流速 11 L/min 雾化器压力 35 psi 毛细管电压 3800V 喷嘴电压 1000 V 数据分析 LC/MS 的数据采用 Agilent MassHunter Qualitative Analysis 软件 B.05 及 Agilent 根据生物制药行业监管机构的要求，需要例行监测药物的化学一致性及纯度。这需要高灵敏度的分析技术来检测工艺变化对药物特性、强度、质量、纯度和效力的影响，因为这些参数与最终产品的安全性和有效性有关。随着高效液相色谱 (HPLC)、质谱 (MS)、核磁共振(NMR)和毛细管电泳等高灵敏分析技术的不断发展，我们可以采用更准确的方法来评估工艺变化对药物的影响。图1显示了由不熟悉质谱分析的生物分析人员操作Agilent MassHunter Easy Access 测定蛋白产品纯度的工作流程。LC/MS 方法经过开发和优化，采用 Easy Access 软件进行数据分析。 图2显示了 Easy Access 软件牛“管理员”窗口中的“方法”选项卡。该选项卡中输入的优化方法参数如表1所示。使用 Agilent1290 Infinity 液相色谱和 Agilent 6530 精确质量 Q-TOF LC/MS 系统， 并使用这些仪器条件对每个批次进行分析。优化和保存方法后，后续操作顺序如图1所示。本研究分析了三个不同批次(临床前、非 GMP和 GMP)的模式治疗性蛋白的纯度。 图1.用于批次间蛋白分析的 Easy Access 工作流程 图 2. MassHunter Easy Access 管理员窗口的方法选项卡 将样品放入自动进样器后，分析人员在 EasyAccess 窗口中输入样品详细信息、样品位置、产品样本序号以及所研究蛋白的分析方法(图3)，然后开始分析。系统经过配置，可在分析结束后将报告和数据以电子邮件方式发送给用户。 图4显示了一份根据一次样品分析的结果及其匹配序列而定制的示例报告，其用于鉴定临床前样品中的蛋白。定制的报告包含数据文件名称、样品名称、样品位置以及采集和数据分析的方法。报告还包含两个表格，个列出了所匹配的蛋白序列，另一个是化合物表格，列出了不同分子形式的蛋白质(完整蛋白或加合物)及其相对丰度。报告还可能包括所鉴定化合物的总离子流图 (TIC)及总化合物流色谱图 (TCC)。最后，图4中的报告还包括与蛋白的完整质量或任何已知蛋白修饰均不匹配的杂质，其表明样品中存在一些与工艺有关的杂质。 图3. MassHunter Easy Access 用户窗口，显示了样品位置、产品样本序号及方法 Counts vs. Acquisition Time (min) 一End Of Report- 图4.定制报告，显示了预测修饰/完整蛋白及杂质的实体使用的样品信息、样品位置及方法 此类报告可帮助研究人员优化纯化及其他处理方法，有助于确定是否需要对工艺进行必要调整，以便在之后批次中去除产品杂质。如表2所示，临床前样品之后分析的非GMP 及 GMP 批次具有 100%的纯度。 结论 本应用简报表明 Agilent MassHunter EasyAccess 软件的应用在批次间纯化方法分析中显示出一致性。Easy Access 软件经证实是一种适合不熟悉 LC/MS技术的分析人员进行 LC/MS 数据分析的简便方法。它能最大限度缩短分析运行时间和提高实验室工作效率。正如该分析中的数据所示， Agilent1290 Infinity 液相色谱与 Agilent 6530 精确质量 Q-TOF LC/MS 联用可提供卓越的分离度和质量准确度。该数据可用于批次间一致性分析，并有助于确定是否有必要进行工艺调整。最后， Agilent MassHunter BioConfirm软件可实现自动化的数据提取、解卷积和蛋 白确认。 表2.所分析批次的蛋白纯度 批次名称 纯度*(%) 临床前 92 非GMP 100 GMP 100 *蛋白纯度包括分析报告中给出的所有分子形式的蛋白(完整蛋白和加合物) www.agilent.com/chem/cn 本文中的信息、说明和指标如有变更，恕不另行通知。 @安捷伦科技(中国)有限公司，2013 2013年12月11日，中国印刷 5991-3521CHCN Agilent Technologies 摘要本应用简报介绍了如何像生物分析科学家在典型生物药理学环境下进行纯度分析那样，使用 Agilent Easy Access 软件来分析模式治疗性蛋白的批次间纯度。分析模式治疗性蛋白的批次间纯度时，将 Agilent 1290 Infinity 液相色谱系统与 Agilent 6530 精确质量Q-TOF LC/MS 联用，并通过 Agilent Easy Access 软件进行数据分析。LC/MS 平台拥有卓越的色谱分离度和质量精度，结合强大的数据处理能力，可简便、快速地分析批次间的蛋白纯度。本应用简化了工作流程，使用者可以快速做出决策，以作进一步的下游处理。该软件可用于比较蛋白谱图，从而确保监管机构要求的批次一致性。此外，该软件还有助于了解工艺放大或生产过程中纯化后蛋白的杂质谱图。该数据可帮助开发生物仿制药的公司在产品上市前评估其产品与原始药物的相似度，重要性不言而喻。前言蛋白质是公认的具有重要医学应用的生物治疗分子，产品在上市之前必须经过严格的测试。尽管治疗性蛋白的生产过程已经非常规范，但还是可能引入一些与产品或工艺有关的杂质。生产过程之中小的调整，例如培养基中 pH、温度和组分的改变，均会影响最终产品的质量。生产过程中批次间的差异也会导致产品的微异质性。因此，对生产过程中实施的所有变更进行分析非常重要。该应用简报介绍了使用液相色谱仪和高分辨率Q-TOF 分析模式治疗性蛋白在批次间的差异。Easy Access 软件可帮助不熟悉质谱分析的人员使用 LC/MS 系统，提高生产率和分析效率。它还提供了一种简便的蛋白纯度分析方法，必要时能帮助分析人员确定样品进一步处理的最佳方法。结论本应用简报表明 Agilent MassHunter Easy Access 软件的应用在批次间纯化方法分析中显示出一致性。Easy Access 软件经证实是一种适合不熟悉 LC/MS 技术的分析人员进行 LC/MS 数据分析的简便方法。它能最大限度缩短分析运行时间和提高实验室工作效率。正如该分析中的数据所示，Agilent 1290 Infinity 液相色谱与 Agilent 6530 精确质量 Q-TOF LC/MS 联用可提供卓越的分离度和质量准确度。该数据可用于批次间一致性分析，并有助于确定是否有必要进行工艺调整。最后，Agilent MassHunter BioConfirm 软件可实现自动化的数据提取、解卷积和蛋白确认。