中药广藿香的33种农药残留测定分析

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本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法二和固相萃取法三，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。高效液相色谱-串联质谱法色谱条件色谱柱：ChromCore C18-MS Pesticides中药农残专用柱(2.1 ×100 mm，2.6 μm)流动相：A：0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）B：乙腈-0.1%甲酸水溶液（含有5mmol/L甲酸铵）=95:5流速: 0.3 mL/min柱温: 40 ℃进样量: 2 µL中药广藿香的33种农残测定分析 背景 广藿香为唇形科植物广藿香的干燥地上部分，含有大量色素类和挥发油类成分，这些成分极易造成GC-MS/MS 柱前端污染、目标物漂移等问题；；同样也会造成LC-MS/MS上目标物干扰，导致目标物响应变低等问题，其中地虫硫磷和甲拌磷砜被干扰较为明显。今天，我们来看看广藿香项目的前处理效果吧。 广藿香 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法二和固相萃取法三，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。 实验步骤 1 对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL， 置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每 1mL含 1.0mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL 含0.1ug的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液 1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40°℃水浴浓缩至约0.6mL， 分别加入混合对照品溶液 10pL、20uL、50uL、100pL、150pL、200uL，加乙腈稀释至1mL， 涡旋混匀，即得。 2 供试品溶液的制备 2.1提取(直接提取法) 精密称取 5g 样品(3号筛)，加氯化钠1g， 加入50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加50mL 乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3~5mL左右，加乙腈定容至 10mL，摇匀，待净化。 3 净化 GC/MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱 500mg/500mg/6mL 净化：取 SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱用乙腈：甲苯(3：：1)10mL活化，量取上述广藿香提取液2mL，置已活化的 SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱中，用乙腈：甲苯(3：1)20mL洗脱，收集全部样品液与洗脱液，40℃水浴减压回收至2mL，即得。 GC/MS/MS 测定： 基质加标配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1mL， 氮吹至0.6mL 加入混合对照溶液，乙腈定容至1mL， 再加入0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22u.m 尼龙针式过滤器，上机分析。 样品溶液配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液 1mL 加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22um尼龙针式过滤器，上机分析。 LC/MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore HLB 固相萃取柱 500mg/6mL 净化：量取上述广藿香提取液4mL， 过 SelectCore HLB 固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。 LC/MS/MS 测定： 基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液 1mL 氮吹至 0.6mL 加入混合对照品液，乙腈定容至1mL， 再加入0.3 mL水， 混匀，过0.22um 尼龙针式过滤器，上机分析。 样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液 1mL 加入 0.3mL水，混匀，过 0.22um尼龙针式过滤器，，上机分析。 4 气相色谱-串联质谱法(岛津 GC-MS -TQ8040 NX) 色谱条件 色谱柱： NanoChrom BP-50+MS 气相柱， 30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃，保持 1min； 以 10℃/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230℃，最后以15℃/min 升温至300℃，保持6min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：不分流进样； 恒压模式：：146kPa： 进样量：11uL。 质谱条件 电离方式：：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：70Ev； 接口温度：：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：10.0min。 5 高效液相色谱-串联质谱法(岛津 LC-MS8045) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1×100 mm， 2.6 um)流动相： A： 0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L甲酸铵) B： 乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有 5mmol/L甲酸铵)=95：5 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：2uL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源 (Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：多反应监测 (Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：：氮气3.0L/min 加热气： 干燥空气 10.0L/min DL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 干燥气： N2 10 L/min 6 注意事项 GC-MS/MS：久效磷参考LC-MS/MS分析结果；内吸磷参考LC-MS/MS分析结果；杀虫脒参考LC-MS/MS分析结果； LC-MS/MS：如遇甲拌磷砜和地虫硫磷响应过低可采用 GC-MS/MS 来分析此化合物(检测条件见下表)，由于使用33种农残混标定位甲拌磷砜在GC-MS/MS上出峰时间时使用以下4组离子对在甲拌磷砜相邻时间 段内有多个化合物均有响应，为避免定位不准确务必使用甲拌磷砜单标对照品来定位；水胺硫磷参考GC-MS/MS 分析结果；如遇个别目标物回收率低于60%可将上柱净化量增加到5mL。 目标物 监测离子对 电压(CE) 地虫硫磷(GC-MS/MS) 245.9>109.0 15 136.9>109.0 5 108.9>80.9 5 245.9>137.0 5 甲拌磷砜 (GC-MS/MS) 153.00>97.0 10 124.9>96.9 5 199.00>143.00 10 199.00>96.90 15 备注：离子对条件参照2341第四法中的离子对信息 7 实验结果 1：为广藿香提取液原液 2： 为 SelectCore HLB 500mg/6mL 净化后的广藿香提取液 3： 为 SelectCore GCB/NH，-A 500mg/500mg/6mL 净化后的广藿香提取液 广藿香基质加标 GC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 时间 45.827 扫描号 14.060 强度 -15，477 柱温箱温度287.41 固相萃取法三处理广藿香基质 LOQ浓度点加标谱图 (GC-MS/MS 方法) 地虫硫磷 甲拌磷砜 甲基硫环磷 水胺硫磷 广藿香基质加标LC-MS/MS部分化合物分析结果谱图 固相萃取法二处理广藿香基质 LOQ浓度点加标谱图 (LC-MS/MS方法) 表1 广藿香中33种农药残留的测定添加回收结果(%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 72.5% 苯线磷亚砜 75.1% 3-羟基克百威 68.5% 甲基对硫磷 69.0% 地虫硫磷 77.3% 涕灭威 73.3% 对硫磷 79.5% 硫线磷 72.9% 涕灭威砜 76.5% 久效磷 78.8% 蝇毒磷 77.7% 涕灭威亚砜 72.2% 磷胺 70.2% 治螟磷 70.1% 灭线磷 68.8% α-六六六 73.0% 特丁硫磷 81.8% 氯唑磷 62.4% β-六六六 72.2% 特丁硫磷砜 73.5% 水胺硫磷 77.3% Y-六六六 70.5% 特丁硫磷亚砜 72.5% α-硫丹 68.0% 6-六六六 70.0% 甲基硫环磷 69.6% β-硫丹 67.6% 2，4'-滴滴涕 73.6% 甲磺隆 72.4% 硫丹硫酸酯 67.9% 4，4'-滴滴滴 72.5% 氯磺隆 65.4% 氟虫腈 79.6% 4，4'-滴滴涕 73.0% 胺苯磺隆 61.5% 氟虫腈砜 74.7% 4，4'-滴滴伊 73.4% 甲拌磷 72.7% 氟虫腈亚砜 75.3% 杀虫脒 72.9% 甲拌磷砜 89.8% 氟甲腈 72.5% 除草醚 77.4% 甲拌磷亚砜 74.2% o，p'-三氯杀螨醇 91.9% 艾氏剂 73.8% 甲基异柳磷 81.7% p，p'-三氯杀螨醇 106.4% 狄氏剂 76.5% 内吸磷 64.6% 硫环磷 73.9% 苯线磷 71.9% 苯线磷砜 76.1% 克百威 73.8% 8实验讨论 通过以上实验数据可以看出，广藿香使用 SelectCore GCB/NH2-A固相萃取柱处理对其色素类和挥发油类成分吸附良好，有效地减轻了样品中色素成分对 GC-MS/MS 柱前端的污染，基质加标中各目标物保留时间稳定； 使用 SelectCore HLB 500mg/6mL 固相萃取柱处理的广藿香 LC-MS/MS 基质加标液中化合物出峰良好，有效地减轻了由于样品中挥发油导致的目标物响应低的问题；搭配上述解决办法有效地解决了广藿香农残检测中存在的问题，提高了实验效率，为广藿香的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。 纳谱分析纳谱分析技术(苏州)有限公司Phone： E-mail： customerservice@nanochrom.com Web： www.nanochrom.com NanoChrom