【应用分享】中药石斛的33种农残测定分析

智能文字提取功能测试中

GC-MS/MS样品净化：SPE柱：SelectCore GCB/NH2-A固相萃取柱 500mg/500mg/6mL净化：取SelectCore GCB/NH2-A固相萃取柱，用乙腈：甲苯（3：1）10 mL活化，量取上述石斛提取液2 mL，置上述已活化的固相萃取柱中，用乙腈：甲苯（3：1）20 mL洗脱，收集全部样品液与洗脱液，40 ℃水浴减压回收至2 mL，即得。GC-MS/MS测定：基质加标配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL，氮吹至0.6 mL加入混合对照溶液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。样品溶液配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1 mL加入0.3 mL磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。LC- MS/ MS样品净化：SPE柱：SelectCore HLB固相萃取柱 200mg/6mL净化：量取上述石斛提取液3 mL，过SelectCore HLB固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。LC-MS/MS测定：基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL氮吹至0.6 mL加入混合对照品液，乙腈定容至1 mL，再加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL加入0.3 mL水，混匀，过0.22 μm尼龙针式过滤器，上机分析。实验结果表1 石斛中33种农药残留的测定添加回收结果（%）中药石斛的33种农残测定分析 背景 石斛为兰科植物金钗石斛、霍山石斛、鼓槌石斛、流苏石斛的栽培品及其同属植物近似种的新鲜或干燥茎，含有较多色素类成分，常规固3净化能力不够，需要用到纳谱分析净化能力更好的 GCB/NH2-A 产品。今天，我们来看看石斛项目的前处理效果吧(以下实验样品为“干流苏石斛”)。 石斛 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341第五法中的固相萃取法二和固相萃取法三，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的农残检测。 实验步骤 1 对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL， 置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用； 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸三苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每 1 mL 含 1.0 mg的溶液，即得。精密量取适量，加乙腈制成每1mL含0.1 ug的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40℃水浴浓缩至约0.6mL， 分别加入混合对照品溶液10 uL、20)uL、50uL、1000uL、150 uL、200uL，加乙腈稀释至1mL， 涡旋混匀，即得。 2 供试品溶液的制备 2.1粉碎 取干石斛样品用钡刀将其切成碎段，取碎段置粉碎机内粗粉碎，取出置开刀口的粉碎机或破壁粉碎机内细粉碎，取出过3号筛即得。 2.2提取(直接提取法) 精密称取2.5g样品(3号筛)，加氯化钠 1g， 加入50 mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上清液，残渣再加 50 mL 乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3mL 左右，加乙腈定容至5mL，摇匀，待净化。 3 净化 GC-MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱 500mg/500mg/6mL； 净化：取 SelectCore GCB/NH2-A固相萃取柱，用乙腈：甲苯(3：1)10mL 活化，量取上述石斛提取液2mL，置上述已活化的固相萃取柱中，用乙腈：甲苯(3：1)20mL洗脱，收集全部样品液与洗脱液，40℃水浴减压回收至2mL， 即得。 GC-MS/ MS测定： 基质加标配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1mL， 氮吹至 0.6 mL 加入混合对照溶液，乙腈定容至1mL， 再加入 0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22 um 尼龙针式过滤器，上机分析。 样品溶液配制：精密量取上述减压回收后的样品溶液1mL加入 0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22um 尼龙针式过滤器，上机分析。 LC-MS/ MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore HLB 固相萃取柱 200mg/6mL； 净化：量取上述石斛提取液3mL， 过 SelectCore HLB 固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。 LC- MS/ MS 测定： 基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1mL氮吹至 0.6 mL 加入混合对照品液，乙腈定容至1mL， 再加入 0.3 mL水，混匀，过 0.22 um 尼龙针式过滤器，上机分析。 样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1 mL 加入 0.3 mL水， 混匀，过 0.22 um 尼龙针式过滤器，上机分析。 4 气相色谱-串联质谱法(岛津GC-MS -TQ8040 NX) 色谱条件 色谱柱： NanoChrom BP-50+ MS 气相柱 30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃， 保持1 min； 以 10℃/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230℃，最后以 15℃/min 升温至300℃，保持6 min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：：不分流进样； 恒压模式：146kPa： 进样量：11 pL。 质谱条件 电离方式：：电子轰击电离源(EI)； 电离能量：：70 Ev： 接口温度：2250℃： 离子源温度：250℃； 监测方式：：多反应检测模式(MRM)； 溶剂延迟：：10.0 min。 5 高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS 8045) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱2.1×100mm， 2.6pm流动相： A： 0.1%甲酸水溶液(含有5mmol/L 甲酸铵) B： 乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有 5 mmol/L 甲酸铵)=95：5 流速： 0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：2uL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源：电喷雾离子源 (Electrospray ionization， ESI) 正离子扫描 监测方式：多反应监测 (Multiple Reaction Monitoring， MRM) 离子源接口电压：4.5kV 雾化气：氮气3.0 L/min 加热气： 干燥空气 10.0 L/min DL温度：250℃ 加热模块温度：400℃ 接口温度：300℃ 干燥气： N2 10 L/min 6注意事项 由于干石斛质地柔韧且纤维性较强，粉碎时间应适当延长以确保样品完全粉碎且能通过3号筛，粉碎时应注意粉碎机的温度，温度过高可能导致分析结果不准确。石斛粉碎后质地较为松泡，称取5g样品加入乙腈 50 mL 匀浆容易使样品成糊状，导致提取不完全，影响实验结果，故将样品称量减半称取 2.5g提取，最终定容至5mL。 GC-MS/MS： 杀虫脒参考LC-MS/MS 分析结果，久效磷参考LC-MS/MS 分析结果。 7 实验结果 1：为石斛提取液原液 2： 为 SelectCore HLB 净化后的石斛提取液 3： 为 SelectCore GCB/NH2-A 净化后的石斛提取液 石斛基质加标 GC-MS/ MS部分化合物分析结果谱图 固相萃取法三处理石斛基质 LOQ 浓度点加标谱图 ( GC-MS/MS方法) 氟虫腈 氟虫腈砜 氟虫腈亚砜 氟甲腈 石斛基质加标LC-MS/ MS 部分化合物分析结果谱图 Time Scan# Inten 固相萃取法二处理石斛基质 LOQ浓度点加标谱图 (LC-MS/MS方法) 3-羟基克百威 甲拌磷砜 表1 石斛中33种农药残留的测定添加回收结果(%)、 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 71.4% 苯线磷亚砜 88.7% 3-羟基克百威 81.7% 甲基对硫磷 85.5% 地虫硫磷 67.3% 涕灭威 83.7% 对硫磷 79.8% 硫线磷 88.4% 涕灭威砜 91.2% 久效磷 82.7% 蝇毒磷 88.5% 涕灭威亚砜 91.0% 磷胺 84.0% 治螟磷 86.1% 灭线磷 87.9% α-六六六 84.3% 特丁硫磷 85.6% 氯唑磷 84.9% β-六六六 84.1% 特丁硫磷砜 81.4% 水胺硫磷 81.5% y-六六六 84.7% 特丁硫磷亚砜 90.4% α-硫丹 81.7% 8-六六六 83.5% 甲基硫环磷 78.8% β-硫丹 78.6% 2，4'-滴滴涕 78.1% 甲磺隆 82.1% 硫丹硫酸酯 88.3% 4，4'-滴滴滴 79.1% 氯磺隆 79.0% 氟虫腈 93.7% 4，4'-滴滴涕 76.8% 胺苯磺隆 79.7% 氟虫腈砜 82.5% 4，4'-滴滴伊 78.8% 甲拌磷 82.5% 氟虫腈亚砜 85.2% 杀虫脒 85.8% 甲拌磷砜 90.5% 氟甲腈 87.7% 除草醚 80.2% 甲拌磷亚砜 79.9% o，p'-三氯杀螨醇 82.6% 艾氏剂 77.8% 甲基异柳磷 84.7% p，p'-三氯杀螨醇 80.6% 狄氏剂 80.5% 内吸磷-O 69.3% 硫环磷 83.7% 苯线磷 77.9% 内吸磷-S 77.8% 苯线磷砜 82.5% 克百威 89.6% 8实验讨论 通过以上实验数据可以看出，石斛使用 SelectCore GCB/NH2-A 固相萃取柱处理对其色素类成分吸附良好，有效地减轻了样品中色素成分对 GC-MS/MS 柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响；；另外使用SelectCore HLB 固相萃取柱处理的石斛LC-MS/MS 基质加标液中化合物出峰良好，搭配上述解决办法有效地解决了石斛中农残回收率偏低的问题，提高了实验效率，为石斛的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。