中药青蒿的33种农残测定分析

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通过以上实验数据可以看出，青蒿使用SelectCore HLB-C中药农残专用柱对其色素类成分、挥发油吸附良好，有效地减轻了样品中色素和挥发油成分对GC-MS/MS柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响；使用SelectCore HLB固相萃取柱对其挥发油吸附良好，LC-MS/MS基质加标液中化合物出峰良好，搭配上述解决办法有效地解决了青蒿中农残分析中存在的问题，提高了实验效率，为青蒿的农药残留实验数据的稳定性和可靠性提供了良好的帮助。中药青蒿的33种农残测定分析 背景 青蒿 别 名草 蒿、廪蒿、茵陈蒿、邪蒿等，为 菊科 植物 黄 花 蒿的干 燥 地上 部 分 ，含有 较 多色素类、挥发 油类 成分 。这 些 干扰 性成 分会造 成 GC -MS/MS 分析中目标 物保 留 时间 漂移、污 染 色谱 柱 等 问题 ，同 时也 会 引 起 LC -MS/MS分析中个 别 化 合物干扰大等 问题 。纳谱分 析推出的 HLB-C 中药 农 残专用 柱，特别适 用于重 色素 和 重 油脂 的中药 材 农 残 测 定 。今天，我们来看看青蒿项目的前处理效果吧。 青蒿 适用范围 本方法参考中国药典2020版2341 第五法中的固相萃取法 二 ，适用于含色素、挥发油类成分的中药材的 农残检测。 实验步骤 1.对照品溶液的制备 1.1混合对照品配制 精密量取禁用农药混合1mL， 置20mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，备用。 1.2气相色谱-串联质谱法分析用内标溶液的制备 取磷酸 三 苯酯对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并制成每1mL含1.0mg的溶液，即得。精密量取 适量，加乙腈制成每1 mL含 0.1 ug 的溶液。 1.3空白基质溶液的制备 取空白基质样品，同供试品溶液的制备方法处理制成空白基质溶液。 1.4基质混合对照溶液的制备 分别精密量取空白基质溶液 1.0mL(6份)，置氮吹仪上，40°℃水浴浓缩至约 0.6mL，分别加入混合 对照品溶液 10 uL、20uL、50uL、100 pL、150uL、200puL， 加乙腈稀释至1mL，涡旋混匀，即得。 2.供试品溶液的制备 2.1提取(直接提取法) 精密称取2.5g样品(过3号筛)，加氯化钠1g，加入50mL乙腈，匀浆处理2分钟，离心后分取上 清液，残渣再加50mL乙腈，匀浆处理1分钟，离心后，合并两次提取上清液，减压浓缩至3mL左右，加 乙腈定容至5 mL，摇匀，待净化。 3.净化 GC/MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore HLB-C 中药农残专用柱 500mg/6mL； 净化：取SelectCore HLB-C 固相萃取柱，加乙腈5mL活化，再取青蒿提取液2mL置已活化的 SelectCore HLB-C 固相萃取柱中，收集样品液，待所有样品液进入柱体填料后，取5 mL 乙腈洗脱，合并样品液与洗脱 液，氮吹至2mL 即得。 GC/MS/MS 测定： 基质加标配制：精密量取上述氮吹后的样品溶液1mL，氮吹至 0.6 mL 加入混合对照溶液，加乙腈定容至1mL， 再加入0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过0.22 um 尼龙针式过滤器，上机分析。 样品溶液配制：精密量取上述氮吹后的样品溶液1mL加入0.3 mL 磷酸三苯酯溶液，混匀，过 0.22 um 尼龙 针式过滤器，上机分析。 LC/MS/MS 样品净化： SPE 柱： SelectCore HLB 固相萃取柱 200mg/6mL； 净化：量取上述青蒿提取液 3 mL， 过 SelectCore HLB 固相萃取柱，收集全部净化液，混匀，即得。 LC/MS/MS 测定： 基质加标配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液 1 mL 氮吹至0.6 mL加入混合对照品液，加乙腈定容至1mL，再加入0.3 mL水，混匀，过 0.22 um 尼龙针式过滤器，，上机分析。 样品溶液配制：精密量取过固相萃取柱后的溶液1mL加入0.3 mL 水，混匀，过 0.22 um 尼龙针式过滤器，上机分析。 4.气相色谱-串联质谱法(岛津GC-MS-TQ8040 NX) 色谱条件 色谱柱： NanoChrom BP-50+MS 气相柱， 30mx0.25mm， 0.25um； 进样口温度：250℃； 升温程序：初始温度为60℃，保持1 min； 以 10°C/min 升温至160℃；再以2℃/min 升温至230℃，最后 以 15C/min 升温至300℃，保持6 min； 载气：高纯氦气(纯度>99.999%)； 进样方式：：不分流进样； 恒压模式：146 kPa； 进样量：1 质谱条件 电离方式：电子轰击电离源(E)； 电离能量：70 Ev； 接口温度：250℃； 离子源温度：250℃； 监测方式：多反应检测模式 (MRM)； 溶剂延迟：10.0 min。 5.高效液相色谱-串联质谱法(岛津LC-MS 8045) 色谱条件 色谱柱： ChromCore C18-MS Pesticides 中药农残专用柱(2.1×100mm， 2.6 um)流动相： A： 0.1%甲酸水溶液(含有5 mmol/L 甲酸铵) B： 乙腈-0.1%甲酸水溶液(含有 5 mmol/L 甲酸铵)=95：5 流速：0.3mL/min 柱温：40℃ 进样量：：2uL 梯度： 时间(min) 流速(mL/min) 流动相A(%) 流动相B(%) 0 0.3 70 30 1 0.3 70 30 12 0.3 0 100 14 0.3 0 100 14.1 0.3 70 30 16 0.3 70 30 质谱条件 离子源： 电喷雾离子源(ESI) 正离子扫描； 监测方式：多反应监测(MRM)； 离子源接口电压：4.5kV； 雾化气：氮气3.0 L/min； 加热气： 干燥空气 10.0 L/min； DL温度：250℃； 加热模块温度：400℃； 接口温度：300℃； 干燥气：氮气10 L/min。 6.注意事项 由于青蒿样品质地松泡，称取5g样品加入乙腈 50mL匀浆容易使样品成糊状，导致提取不完全，影响实验 结果，故将样品称量减半称取2.5g提取，最终定容至 5mL。 GC-MS/MS：久效磷参考 LC-MS/MS分析结果，水胺硫磷参考 LC-MS/MS分析结果。 7.实验结果 1：为青 蒿 提取液原液 2： 为 SelectCore HLB 200mg/6mL 净化后的青蒿提取液 3： 为 SelectCore HLB-C 500mg/6mL 净化后的青 蒿 提取液 青蒿基质加标 GC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 固相萃取法二处理青蒿基质 LOQ 浓度点加标谱图 (GC-MS/MS 方法) 对硫磷 甲基硫环磷 灭线磷 杀虫脒 青蒿基质加标 LC-MS/MS 部分化合物分析结果谱图 固相萃取法 二 处理青蒿基质 LOQ 浓度点加标谱图 (LC-MS/MS 方法) 甲拌磷砜 磷胺 水胺硫磷 涕灭威砜 表1 青蒿中33种农药残留的测定添加回收结果 (%) 农残成分 回收率 农残成分 回收率 农残成分 回收率 甲胺磷 73.8% 苯线磷亚砜 77.5% 3-羟基克百威 103.2% 甲基对硫磷 88.0% 地虫硫磷 77.6% 涕灭威 80.7% 对硫磷 69.5% 硫线磷 72.5% 涕灭威砜 77.4% 久效磷 80.5% 蝇毒磷 73.0% 涕灭威亚砜 76.5% 磷胺 79.6% 治螟磷 82.3% 灭线磷 82.6% α-六六六 85.7% 特丁硫磷 85.7% 氯唑磷 77.1% β-六六六 86.0% 特丁硫磷砜 70.2% 水胺硫磷 78.8% y-六六六 86.0% 特丁硫磷亚砜 82.1% α-硫丹 86.1% 8-六六六 85.3% 甲基硫环磷 78.5% β-硫丹 93.2% 2，4'-滴滴涕 83.5% 甲磺隆 78.5% 硫丹硫酸酯 85.5% 4，4'-滴滴滴 86.2% 氯磺隆 79.1% 氟虫腈 78.6% 4，4'-滴滴涕 83.4% 胺苯磺隆 72.5% 氟虫腈砜 83.9% 4，4'-滴滴伊 82.0% 甲拌磷 80.6% 氟虫腈亚砜 84.2% 杀虫脒 76.3% 甲拌磷砜 76.3% 氟甲腈 87.0% 除草醚 84.3% 甲拌磷亚砜 78.6% o，p'-三氯杀螨醇 98.7% 艾氏剂 83.9% 甲基异柳磷 89.7% p，p'-三氯杀螨醇 113.8% 狄氏剂 86.8% 内吸磷-O 84.4% 硫环磷 76.7% 苯线磷 73.4% 内吸磷-S 88.7% 苯线磷砜 84.5% 克百威 79.9% 8.实验讨论 通过以上实验数据可以看出，青 蒿使用 SelectCore HLB-C 中药农残专用柱对其色素类成分、挥发油吸附良好，有效地减轻了样品中色素和挥发油成分对 GC-MS/MS 柱前端的污染和基质中干扰物对目标物的影响；使用 SelectCore HLB 固相萃取柱对其挥发油吸附良好， LC-MS/MS 基质加标液中化合物出峰良好，搭配上述解 决办法有效地解决了青蒿中农残分析中存在的问题，提高了实验效率，为青蒿的农药残留实验数据的稳定 性和可靠性提供了良好的帮助。