采用TSKgel G3000SWXL色谱柱测定注射用乌司他丁中乌司他丁的含量

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乌司他丁是肝脏分泌的一种具有广谱蛋白酶抑制作用的酶蛋白。属于人体内源性抗炎物质，能够抑制胰蛋白酶、α-糜蛋白酶和粒细胞弹性蛋白酶等多种蛋白水解酶的活性，促进酶的降解。注射用乌司他丁是从新鲜人尿中分离纯化的尿胰蛋白酶抑制药，为糖蛋白，含有143个氨基酸，相对分子质量约67000，是一种典型的Kuniz型的蛋白酶抑制药，目前临床上广泛应用于急慢性胰腺炎，各种休克及各种大手术时的脏器功能保护。注射用乌司他丁在水溶液中稳定性差，为了确保药品的质量，本应用中作者采用东曹尺寸排阻色谱柱TSKgel G3000SWXL建立了测定注射用乌司他丁中乌司他丁的含量的方法。采用 TSKgel G3000SWXL 色谱柱测定注射用乌司他丁中乌司他丁的含量 注射用乌司他丁 (Ulinastatin for Injection) 【基本信息】 乌司他丁是肝脏分泌的一种具有广谱蛋白酶抑制作用的糖蛋白。属于人体内源性抗炎物质，能够抑制胰蛋白酶、α-糜蛋白酶和粒细胞弹性蛋白酶等多种蛋白水解酶的活性，促进酶的降解。注射用乌司他丁是从新鲜人尿中分离纯化的尿胰蛋白酶抑制药，为糖蛋白，含有 143个氨基酸，相对分子质量约 67000，是一种典型的 Kuniz 型的蛋白酶抑制药，目前临床上广泛应用于急慢 性胰腺炎，各种休克及各种大手术时的脏器功能保护。注射用乌司他丁在水溶液中稳定性差，为了确保药品的质量，这里采用 TSKgel G3000SWXL 色谱柱建立了 测定注射用乌司他丁中乌司 他丁的含量的方法。 【分析条件】 色谱柱： TSKgel G3000SWXL （7.8 mm I.D.×30 cm ） 流动相： [0.001 mol/L 磷酸二氢钠 -0.001 mol/L 磷酸氢二钠（39:61）]-乙腈 （90:10） 流 速： 0.7 mL/min 进样体积：20 μL 柱 温：25 ℃ 检测器：UV @280 nm 【溶液配制】 标准品溶液的制备：取乌司他丁标准品 1瓶 ( 100000 U) ，置 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，避光、室温下保存。 供试品溶液的制备：模拟临床使用方法实际常用浓度配制，取注射用乌司他丁 1瓶 (100000 U)加入 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为母液。再取母液 2 mL 置 100 mL 量瓶中，加流动相稀 释至刻度，摇匀，得浓度为 200 U·mL －1的供试品溶液。 【分析结果】 图 1乌司他丁 HPLC 图 （A ）标准品；（B ）样品 【结果与讨论】 采用 TSKgel G3000SWXL 色谱柱建立测定注射用乌司他丁含量的方法，分析谱图见图 1。考察 线性关系，结果表明：乌司他丁在 0.78125~ 50.00 U 范围内与其峰面积有良好的线性关系，制备高、中、低浓度的乌司他丁标准品溶液 ( 1250，625，312.5 U·mL-1 )各 3份，同日测定并连续测定 5 d ，日内、日间精密度 RSD 均在 1%以下。3次加样回收率控制在 100.21±0.08%以内。以上结果说明该 方法适合注射用乌司他丁中乌司他丁含量的测定。 【参考资料】 1.甘惠贞，林淑瑜，潘丹婷，杨昌云，高效液相凝胶过滤色谱法测定注射用乌司他丁中乌司他丁的 含量医药导报 . 2015,34(6)：814-12