speleers 2008/05/04
热电集团高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]－串联质谱联用(Finnigan TSQ Quantum)测定鳗鱼中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量 摘要 利用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]串联质谱（LC/MS/MS）方法快速、准确的同时测定鳗鱼中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量。鳗鱼样品经乙腈-乙酸铵缓冲溶液提取，液液分配到二氯甲烷层，MCX阳离子固相萃取小柱净化，浓缩定容。以甲醇和甲酸缓冲溶液为流动相，经C18柱分离后，并用串联质谱在电喷雾（ESI+）-选择反应监测离子（SRM）的模式下，进行质谱定性和定量，无需采用传统PbO2氧化柱，氘代隐性孔雀石绿为内标。该方法检测限（LOD）为0.2 μg/Kg，定量下限为0.5 μg/Kg，完全可以达到出口欧盟和日本残留限量要求。 [img]https://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=87845]测定鳗鱼中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量[/url]
92052617 2008/04/18
看看这个资料怎么样？ [img]https://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=85731]水产品中的孔雀石绿的分布及检测[/url]
mjsheng 2008/05/04
看看这个方法或许有帮助。孔雀石绿的检测关键是前处理麻烦，， [img]https://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=87766]鱼肉中孔雀石绿的分析方法[/url] [img]https://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=87767]日本孔雀石绿检测方法[/url] 另外国家水产品行业标准SC/T 3021-2004 和国家标准 GB/T 19857-2005：水产品中孔雀石绿和无色孔雀石绿残留量的测定。其中提取的关键步骤，略述如下（尤其避免产生乳化现象）： 1.提取：称取5.00 g 样品于50 mL离心管内，加入5.0 mL乙酸胺缓冲溶液（0.1mol/L），1 mL25%的盐酸羟胺(HAH)溶液、0.1 mL 1.0 mol/L的对-甲苯磺酸（p-TSA）溶液，旋涡混合30s，加入25mL乙腈，充分旋涡混匀30s，再加5-6g酸性氧化铝（至少5g），以10 000 r/min的速度匀浆均质30 s，4000rpm离心5分钟。把上清液转移至装有50 mL 水和2 mL 二甘醇（DEG）的250 mL分液漏斗中。然后在50 mL离心管的固体物中加入25 mL乙腈，重复上述操作，合并上清液于分液漏斗中，并加入25mL二氯甲烷，振摇使分层后（若发生乳化现象或有机相进入上层，应再加20mL水或10-15mL二氯甲烷，并重新振摇使分层），把下层有机相过无水硫酸钠于蒸发瓶中，35℃蒸发至干。2mL乙腈溶解定容，高速离心待上机。 2.上机测定。要连接柱后氧化柱，柱后氧化柱主要作用是将无色孔雀石绿氧化成孔雀石绿，在可见光波长588nm处有最大吸收，此方法满足国家标准方法测定。
山人 2008/04/16
美国Doerge, Daniel R. 等人(National Center for Toxicological Research, Jefferson, AR 72079, USA) 1998年采用同位素内标稀释建立了检测鱼体中孔雀石绿（MG）及其代谢物隐性孔雀石绿(LMG)的LC-APCI/MS法,同位素 13C6代 MG 和d5代LMG 为内标进行质谱定量鱼肉中的MG和 LMG[4]。 芬兰Halme K, Lindfors E等人(National Veterinary and Food Research Institute (EELA), Department of Chemistry, Helsinki, Finland) 2004年分别用LC和LC/MS法检测红鳟鱼鱼肉中孔雀石绿及其主要代谢产物隐性孔雀石绿，检出限（LOD）分别为0.8和0.6μg／Kg。用乙腈-醋酸盐缓冲溶液提取，二氯甲烷分离，氧化铝和丙基璜酸自动固相萃取柱净化。以乙腈-醋酸盐缓冲溶液为流动相，经Chromspher 5B柱进行孔雀石绿和隐性孔雀石绿的分离。隐性孔雀石绿经氧化转化为孔雀石绿。在样品浓度范围2-50μg／Kg时，孔雀石绿和隐性孔雀石绿的平均回收率为65% (范围63.4-65.9%, 相对标准偏差3.9-16.1%) 和74% (范围58.3-82.6%,相对标准偏差3.3-11.4%)。用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-串联质谱法定量测定，孔雀石绿和隐性孔雀石绿的定量检测限分别为2.5和1μg／Kg[5]。 美国Allen JL等人(U.S. Fish and Wildlife Service, National Fisheries Research Center, La Crosse, WI 54602-0818) 1994年采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url](LC)方法同时测定红鳟鱼卵、鱼苗、成熟鱼肉中孔雀石绿和隐性孔雀石绿。均匀混合的样品用 [14C]内标的孔雀石绿氯化物强化， 并用1% (v/v)醋酸-乙腈（或甲醇）提取。提取物经氯仿分离、干燥、流动相再溶解，再用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]进行分析（隐性孔雀石绿经氧化转化为孔雀石绿）。以内标孔雀石绿浓度为0.5 和1.00μg /g强化的红鳟鱼卵，总[14C] 孔雀石绿氯化物残留的回收率分别为 85和98%; 以内标孔雀石绿浓度为0.65μg /g强化的红鳟鱼鱼苗，总[14C] 孔雀石绿氯化物残留的回收率为68%; 以内标孔雀石绿浓度1.00μg /g强化的红鳟鱼鱼肉，总[14C] 孔雀石绿氯化物残留的?厥章饰?66%[6]。 加拿大van de Riet JM等人（Canadian Food Inspection Agency, Dartmouth Laboratory, PO Box 1060, Dartmouth, B3B 1Y9 Canada.）2005年利用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]串联质谱(LC/MS/MS)方法快速、准确的同时测定水产品（如鲑鱼、鲶鱼、罗非鱼和虾等）中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量。样品经高氯酸-乙腈溶液提取 ，离心分离，浓缩，C18柱分离等。LMG回收率81%，MG回收率 98% 。MG和LMG的检测限都是 0.1 ng/g[7]。 美国Doerge DR等人（National Center for Toxicological Research, U.S. Food and Drug Administration, Jefferson, AR 72079, USA）1998年用同位素内标稀释[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-大气压化学离子质谱法（LC/MS）快速、准确的同时测定食用鱼中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量。食用鱼中LMG浓度总是超过MG浓度[8]。 智利Valle,-L（Correspondence (Reprint) address, P. Richter, Cent. de Estudios para el Desarrollo de la Qumica (CEPEDEQ), Fac. de Ciencias Quimicasy Farmaceuticas, Univ. de Chile, Olivos 1007, Independencia, PO Box 233, Santiago, Chile）等人2005年利用LC 大气压化学电离法测定孔雀石绿和隐性孔雀石绿在鲑鱼中的残留量。检测限为 0.15 μg /kg 。样品浓度2μg /kg时，孔雀石绿和隐性孔雀石绿的回收率分别为70 % (相对s.d. 3.1%) 和85 % (相对s.d. 1.3%)[9]。 荷兰Hajee, C. A. J.等人 (University of Utrecht, Faculty of Veterinary Medicine, Department of the Science of Food of Animal Origin, Section Chemistry, P.O. Box 80175, TD Utrecht NL-3508, Neth.) 1995年采用快速HPLC方法结合固相提取(SPE)测定鳗鱼血浆中孔雀石绿 (MG)和 隐性孔雀石绿(LMG)残留量。MG 和LMG用甲醇缓冲液提取，用氨气处理后从SPE柱上洗提。MG 和 LMG的平均回收率分别为82±1% 和83±1%。MG的定量限为 5.0g/L ，LMG的定量限为0.9g/L[10]。 澳大利亚Swarbrick, A.等人(Australian Government Analytical Laboratories, Pymble NSW 2073, Australia)1997 年用反相 HPLC结合 610 nm的吸收检测定量测定rainbow trout鱼肉中孔雀石绿和隐性孔雀石绿的残留量，分析样品经容积提取，用C18柱固相净化，将隐性孔雀石绿氧化成孔雀石绿。孔雀石绿检测限6 ng/g，隐性孔雀石绿检测限3 ng/g。在25-200 ng/g浓度范围, 孔雀石绿回收率73-87% ，而隐性孔雀石绿回收率89-98% [11]。 2005年11 月美国FDA的LIB4363规定了鱼和虾中孔雀石绿和隐性孔雀石绿的LC-VIS法和LC-MSn法。用醋酸胺缓冲液和乙腈提取，二氯甲烷分离。隐性孔雀石绿被氧化成孔雀石绿。样品经固相萃取净化。萃取物用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-可见光(LC-VIS)分析总MG 。该法的平均回收率鲶鱼为85.9 % (± 8.5 % RSD),鲑鱼为 87.8 % (± 5.1 % RSD), 罗非鱼为93.9 % (± 8.9 % RSD), basa为 90.8 % (± 11.0 % RSD),虎虾为89.9 % (± 8.4 % RSD)。用LC-质谱 (LC-MSn)法测定 MG是另一种测定鱼类中MG 残留量的方法。用LC-MSn测定的LMG的回收率高达75-116 %，相对标准偏差≤ 21 % 。而且测定结果与用LC-VIS 法高度一致。LC-VIS 法对孔雀石绿的检测限为1.0 ppb， LC-MSn法对孔雀石绿的检测限为0.25 ppb[12]。 2004年11月美国FDA的LIB4334规定了快速[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法测?儆阒锌兹甘毯鸵钥兹甘痰姆椒āＳ么姿岚坊撼逡汉鸵译嫣崛。燃淄榉掷搿Ｒ钥兹甘瘫谎趸煽兹甘獭Ｑ肪滔噍腿【换］腿∥镏蠱G用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-可见光(LC-VIS)分析总MG。平均回收率94.6 % ，RSD ± 10.7 %。该方法的定量检测限为1 ppb[13]。 2004年11月美国FDA的LIB4333规定了测定和确认鲑鱼中隐性孔雀石绿的LC-MS方法。利用无放电大气压化学电离(APCI)结合离子捕捉仪器产生离子光谱, 将LC-MS方法用于定量测定鱼类中萃取后转化为孔雀石绿(MG)的隐性孔雀石绿(LMG)的残留量。用于LC-VIS方法的萃取方法同样适用于LC-MS 分析。LMG回收率87-109 %, 相对标准偏差<10%[14]。
金水楼台先得月 2008/05/01
看看这个检测方法,不知道对你有帮助不? [img]https://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=87537]用于水产品中孔雀石绿的检测[/url]
山人
第5楼2008/04/16
新技术解决孔雀石绿检测难题
孔雀石绿是食品安全领域里继苏丹红以后在国际上引起轰动的又一高危物品，其具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，因此，食品中孔雀石绿的现场检测技术成为食品安全领域的重点和难点。近日，一种新型检测技术的问世，将有效解决此问题。
孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿，它既是杀真菌剂，又是染料，易溶于水，溶液呈蓝绿色，广泛用于真丝、羊毛、皮革、麻制品、陶瓷制品、棉布等的染色。孔雀石绿很早曾经作为杀菌剂、杀虫剂、消毒剂用于水产养殖业。长期以来，渔民都用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等，而且为了使鳞受损的鱼延长生命，在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿。鉴于孔雀石绿的危害性，许多国家都将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物（观赏鱼除外）。我国也于2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》中，禁止用于所有食品动物。
据了解，目前检测孔雀石绿的主要方法分别为肉眼辨别和液相色谱法。这两种方法存在明显的不足：肉眼检测，不够准确，缺乏执法依据；液相色谱法检测速度慢，检测成本高，技术要求必需是专业人员，特别是不能现场检测，严重的影响了国家职能部门的执法力度和效率。
山人
第6楼2008/04/16
美国Doerge, Daniel R. 等人(National Center for Toxicological Research, Jefferson, AR 72079, USA) 1998年采用同位素内标稀释建立了检测鱼体中孔雀石绿（MG）及其代谢物隐性孔雀石绿(LMG)的LC-APCI/MS法,同位素 13C6代 MG 和d5代LMG 为内标进行质谱定量鱼肉中的MG和 LMG[4]。
芬兰Halme K, Lindfors E等人(National Veterinary and Food Research Institute (EELA), Department of Chemistry, Helsinki, Finland) 2004年分别用LC和LC/MS法检测红鳟鱼鱼肉中孔雀石绿及其主要代谢产物隐性孔雀石绿，检出限（LOD）分别为0.8和0.6μg／Kg。用乙腈-醋酸盐缓冲溶液提取，二氯甲烷分离，氧化铝和丙基璜酸自动固相萃取柱净化。以乙腈-醋酸盐缓冲溶液为流动相，经Chromspher 5B柱进行孔雀石绿和隐性孔雀石绿的分离。隐性孔雀石绿经氧化转化为孔雀石绿。在样品浓度范围2-50μg／Kg时，孔雀石绿和隐性孔雀石绿的平均回收率为65% (范围63.4-65.9%, 相对标准偏差3.9-16.1%) 和74% (范围58.3-82.6%,相对标准偏差3.3-11.4%)。用液相色谱-串联质谱法定量测定，孔雀石绿和隐性孔雀石绿的定量检测限分别为2.5和1μg／Kg[5]。
美国Allen JL等人(U.S. Fish and Wildlife Service, National Fisheries Research Center, La Crosse, WI 54602-0818) 1994年采用液相色谱(LC)方法同时测定红鳟鱼卵、鱼苗、成熟鱼肉中孔雀石绿和隐性孔雀石绿。均匀混合的样品用 [14C]内标的孔雀石绿氯化物强化， 并用1% (v/v)醋酸-乙腈（或甲醇）提取。提取物经氯仿分离、干燥、流动相再溶解，再用液相色谱进行分析（隐性孔雀石绿经氧化转化为孔雀石绿）。以内标孔雀石绿浓度为0.5 和1.00μg /g强化的红鳟鱼卵，总[14C] 孔雀石绿氯化物残留的回收率分别为 85和98%; 以内标孔雀石绿浓度为0.65μg /g强化的红鳟鱼鱼苗，总[14C] 孔雀石绿氯化物残留的回收率为68%; 以内标孔雀石绿浓度1.00μg /g强化的红鳟鱼鱼肉，总[14C] 孔雀石绿氯化物残留的?厥章饰?66%[6]。
加拿大van de Riet JM等人（Canadian Food Inspection Agency, Dartmouth Laboratory, PO Box 1060, Dartmouth, B3B 1Y9 Canada.）2005年利用高效液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)方法快速、准确的同时测定水产品（如鲑鱼、鲶鱼、罗非鱼和虾等）中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量。样品经高氯酸-乙腈溶液提取 ，离心分离，浓缩，C18柱分离等。LMG回收率81%，MG回收率 98% 。MG和LMG的检测限都是 0.1 ng/g[7]。
美国Doerge DR等人（National Center for Toxicological Research, U.S. Food and Drug Administration, Jefferson, AR 72079, USA）1998年用同位素内标稀释液相色谱-大气压化学离子质谱法（LC/MS）快速、准确的同时测定食用鱼中孔雀石绿、隐性孔雀石绿残留量。食用鱼中LMG浓度总是超过MG浓度[8]。
智利Valle,-L（Correspondence (Reprint) address, P. Richter, Cent. de Estudios para el Desarrollo de la Qumica (CEPEDEQ), Fac. de Ciencias Quimicasy Farmaceuticas, Univ. de Chile, Olivos 1007, Independencia, PO Box 233, Santiago, Chile）等人2005年利用LC 大气压化学电离法测定孔雀石绿和隐性孔雀石绿在鲑鱼中的残留量。检测限为 0.15 μg /kg 。样品浓度2μg /kg时，孔雀石绿和隐性孔雀石绿的回收率分别为70 % (相对s.d. 3.1%) 和85 % (相对s.d. 1.3%)[9]。
荷兰Hajee, C. A. J.等人 (University of Utrecht, Faculty of Veterinary Medicine, Department of the Science of Food of Animal Origin, Section Chemistry, P.O. Box 80175, TD Utrecht NL-3508, Neth.) 1995年采用快速HPLC方法结合固相提取(SPE)测定鳗鱼血浆中孔雀石绿 (MG)和 隐性孔雀石绿(LMG)残留量。MG 和LMG用甲醇缓冲液提取，用氨气处理后从SPE柱上洗提。MG 和 LMG的平均回收率分别为82±1% 和83±1%。MG的定量限为 5.0g/L ，LMG的定量限为0.9g/L[10]。
澳大利亚Swarbrick, A.等人(Australian Government Analytical Laboratories, Pymble NSW 2073, Australia)1997 年用反相 HPLC结合 610 nm的吸收检测定量测定rainbow trout鱼肉中孔雀石绿和隐性孔雀石绿的残留量，分析样品经容积提取，用C18柱固相净化，将隐性孔雀石绿氧化成孔雀石绿。孔雀石绿检测限6 ng/g，隐性孔雀石绿检测限3 ng/g。在25-200 ng/g浓度范围, 孔雀石绿回收率73-87% ，而隐性孔雀石绿回收率89-98% [11]。
2005年11 月美国FDA的LIB4363规定了鱼和虾中孔雀石绿和隐性孔雀石绿的LC-VIS法和LC-MSn法。用醋酸胺缓冲液和乙腈提取，二氯甲烷分离。隐性孔雀石绿被氧化成孔雀石绿。样品经固相萃取净化。萃取物用液相色谱-可见光(LC-VIS)分析总MG 。该法的平均回收率鲶鱼为85.9 % (± 8.5 % RSD),鲑鱼为 87.8 % (± 5.1 % RSD), 罗非鱼为93.9 % (± 8.9 % RSD), basa为 90.8 % (± 11.0 % RSD),虎虾为89.9 % (± 8.4 % RSD)。用LC-质谱 (LC-MSn)法测定 MG是另一种测定鱼类中MG 残留量的方法。用LC-MSn测定的LMG的回收率高达75-116 %，相对标准偏差≤ 21 % 。而且测定结果与用LC-VIS 法高度一致。LC-VIS 法对孔雀石绿的检测限为1.0 ppb， LC-MSn法对孔雀石绿的检测限为0.25 ppb[12]。
2004年11月美国FDA的LIB4334规定了快速液相色谱法测?儆阒锌兹甘毯鸵钥兹甘痰姆椒āＳ么姿岚坊撼逡汉鸵译嫣崛。燃淄榉掷搿Ｒ钥兹甘瘫谎趸煽兹甘獭Ｑ肪滔噍腿【换］腿∥镏蠱G用液相色谱-可见光(LC-VIS)分析总MG。平均回收率94.6 % ，RSD ± 10.7 %。该方法的定量检测限为1 ppb[13]。
2004年11月美国FDA的LIB4333规定了测定和确认鲑鱼中隐性孔雀石绿的LC-MS方法。利用无放电大气压化学电离(APCI)结合离子捕捉仪器产生离子光谱, 将LC-MS方法用于定量测定鱼类中萃取后转化为孔雀石绿(MG)的隐性孔雀石绿(LMG)的残留量。用于LC-VIS方法的萃取方法同样适用于LC-MS 分析。LMG回收率87-109 %, 相对标准偏差<10%[14]。
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