【转帖】苯甲酸等59种防腐剂 高效薄层色谱法

H9
N-Trichlorometh-yl-thio-4-cyclo-hexene-1,2-dicarboximide
N-(三氯甲基硫代)环已-4-烯-1,2-二羟酰亚胺
4-19
0.5

H10
p-Chloro-m-cresol
4-氯-间-甲苯酚
4-55
0.2

H11
Tetrabromo-o-cresol
四-溴-邻-甲苯酚
4-31
0.3

H12
2,4-Dechloro-3,5-dimethylphenol
2,4-二氯-3,5-二甲苯酚
4-8
0.1

H13
3,4′,5-Tribomo-salicy-lanililde
三溴沙伦(3,4′,5-三溴水杨酰替苯胺)
3-8
1

H14
p-Chloro-m-xylenol
4-氯-3,5-二甲苯酚
4-56
0.5

H15
5-Chloro-2me-thyl-4-isothia-zoline-3-one 2-nethyl-4-isothiazoline-3-one magne-sium and calci-un chloride
KATHON CG
4-59
0.005

H16
1,6-di(N-p-chlorophenyl diguanido)hexane,diace-tate,diglu-conater,or dichlorohydrate
洗必泰
4-44
0.3

Ph1
4-Isopropyl-3-methylphenol
4-异丙基-3-甲苯酚
4-32
0.1

Ph2
0-Phenylphenol
邻-苯基苯酚
4-52
0.2(苯酚)

Ph3
8-Hydrox-yquenoline sul-fate
8-羟基喹啉硫酸盐
4-48
0.3

F1
5-Amino-bis-1,3-(2-ethylhexyl)-5-methyl per hy-dropyrinidine
海克替啶
4-26
0.2

F2
5-Bromo-5-ni-tro-1,3-dioxane
5-溴-5-硝基础-1,3-二恶烷
4-64
0.1

F3
2-Brono-2-ni-tro-propane-1,3-diol
溴硝丙醇
4-63
0.1

F4
N-Hydroxyme-thylchloroace-tamide
2-氯-N-(羟甲基)乙酰胺
4-57
0.3(氯乙酰胺计)

F5
1-(3-Chloroal-lyl)-3,5,7-tri-aza-1-azonia adamantane chloride
　
　
(0.2)

F6
p-Chlorophenyl glyceryl ether
　
　
(0.5)

F7
Hexamethylene tetramine
六亚甲基四胺(乌洛托品)
4-66
0.2(甲醛)

F8
1,3-(Dihydrox-y-methyl)-5-dimethyl hy-dantoin
1,3-双(羟甲基)-5,5-二甲基咪唑啉-2,4-二酮
4-28
0.2(甲醛)

F9
1-(Hydrox-ymethyl)-5-dimethyl hy-dantoin
1-羟甲基-5,5-二甲基-乙内酰脲
4-49
0.2(甲醛)

F10
Imidazo-lidinylurea
咪唑烷基脲
4-27
0.6
F11
Tri (β-hydrox-yethyl hexahy-drotriazine)
　
　
(0.3)

Py1
2-Hydroxypyri-dine N-oxide
1-氧代-2-羟基吡啶
4-45
0.2

Py2
Bis(N-oxopy-ridyl-2thio)aluminum cam-phosulfomate)
吡啶硫酮铝樟磺酸盐
4-35
0.2

Py3
2,2′-Dithio-bis-pyridine 1,1′-dioxide(ad-ditive compo-und with ma-gmesium sulfate trihydrate
2,2′-二硫代又(1-氧代吡啶)与三水合硫酸镁加合物
4-13
0.5

Py4
Sodium(2-pyridylthio)N-oxide
吡啶硫酮钠
4-34
0.5

Py5
Zenc bis(2-pyridylthio)N-oxide
吡啶硫酮锌
4-33
0.5

Am1
1,3-Di(4-amidino-2-bro-mophenoy)n-propane
二溴丙脒
4-11
0.1

Am2
1,6-Di(4-amidino-phe-noxy)n-hexane
已脒定
4-25
0.1

Q1
Alkyl(C8-C18) dimethylben-zylammonium chloride
　
　
(0.5)

Q2
Alkyl(C8-C18) dimethyl-benzy-lammo-nium saccharinate
　
　
(0.5)

Q3
Alkyl(C12-C22) trimethylben zylammonium bromide
西曲溴胺
4-51
0.1

Q4
2-[2-(3-Hep-tyl-4-methyl-2-thiazoline-2-yli-dene) methyne]-3-heptyl-4-methylthiazoli-nium ildide
磺化30庚基-2-(3-庚基-4-甲基-4-噻唑啉-2-亚基甲基)-4-甲基噻唑 啉(KANKOH SO 201)
4-43
0.002

Q5
Diisobutylphe-noxyethoxyethyl-dimethyl-ben-zyla
苄索氯铵
4-41
0.1

M1
Benzyl alcohol
本甲醇
4-40
1

M2
Dodecylguanidine acetate
1-十二烷基呱乙酸盐
4-3
0.5

0.1

M3
2-Phenyoxye-thanol
2-苯氧基乙醇
4-37
1

M4
1-Phe-noxypropane-2-ol
1-苯氧基丙烷-乙醇
4-38
1


*序号为化妆品标准（GB 7916-87）中表四的序号。

* * （）内为欧共体1982最大 允许用量，其他为我国标准（GB7916-87），有一个经上数字表示不同化妆品品种的用量不同详见标准（附录）
根据需要，按表2-3-25所示最大允许浓度称取适量标准，溶于95%乙醇中，但有以下例外：
表2-3-25 配制防腐剂标准溶液溶剂
防腐剂
溶剂
Aml，Am2，F5，F6，F7，F8，F9，Py3，Py4 M2，Ph2

Py5

Acl3，H4，H5，Py2
水

95%乙醇 水（1 1）

95%乙醇 1mol/LHCl（1 1）

氯仿


3.2 展开液
3.2.1 展开液1(MP1)(2):将甲苯、戍烷和99.9%的乙酸按40 60 15比例混合。
3.2.2 展开液2(MP2)(3):将甲苯、四氯化碳、乙酸乙酯和99.9%乙酸按40 30 20 5的比例混合。
3.2.3 展开液3(MP3)(4):将95%乙醇、二甲基甲酰胺和99.9%乙酸按70 15 15的比例混合。
3.2.4 展开液4(MP4)(5):将丙醇、水和99.9%乙酸按60 40 0.5比例混合。
3.3 显色剂(10)
3.3.1 显色剂R3(6):由A和B组成,A是1%2-氯-4-硝基苯二叠氮苯-2-磺酸盐(2-chloro-4-nitrobenzenediazonium napthalene-2-sulfonate,简称NNCO,Fluka公司,商品号74150,或等效物)水溶液,用中速滤纸过滤后使用。用前配制。薄层板经A喷布后，风干1min，然后喷布B。B是10%（W/V）碳酸钠水溶液。
3.3.2 显色剂R4（7）：由A、B二种溶液组成、A是0.1%（W/V）六氯铂酸的水溶液，B是1%（W/V）碘化钾水溶液。将A和B等量混合，此混合液可于暗处贮存一个月。在薄层板喷布显色剂R4后需立即观察。
3.3.3 显色剂R7(8)：由A和B组。A是2mol／L的氢氧化钠，B由0.2ml乙酰丙酮、0.3m1 99.9％乙酸、15g醋酸铵和50ml水组成，当天配制。薄层板喷布A后风干一分钟，喷布B，然后在100℃烘箱放置2min，于366nm下观察和记录。
3.3.4 显色剂R9(9),称取1g香草醛（Vanillin）溶于98％硫酸，加98％硫酸使体积为100ml。薄层板喷布R9后，在100℃烘箱放置10min，观查和记录。

4 仪器

4.1 层析缸：带盖玻璃缸，双槽，Camag 25254或等效物。

4.2 高效薄层板

4.2.1 硅胶板： 10×20cm， Merck 5642或等效物。

4.2.2 反相硅胶板RP18：5×20或10×20cm， Merck l3724或等效物。

4.3可调波长的紫外光灯装置：可提供254nm和366nm波长。

5 分析步骤

5.1 样品预处理(11)

5.1.1 含洒精的样品：可以直接用于测定。

5.1.2 气溶胶型样品：将样品喷入烧杯后，直接取样。

5.1.3 乳剂和膏霜类：称取2g样品分散在10ml 95％乙醇-水（50＋50）中，超声匀浆15min在5000r／min下离心10min，取上清液为待测样液。

5.1.4 凝胶类样品：同5.1.3，或取2g样品分散于10ml氯仿95％乙醇（50＋50）中，超声匀浆15min，5000r/min离心10min，取上清液为待测样液。

5.1.5 粉底霜：取2g样品分散于10ml无水乙醇中，其他步骤（匀浆、离心）同5.1.3。或则取lg样品与2g硅藻土545混合形成一松散的粉末，取内径为lcm的玻璃层析柱，底端用约10mg玻璃棉填塞，将样品粉装入柱内。每次约0.5g并用玻璃棒压紧。用25m1 95％乙醇-水（50＋50）洗脱，流速为1m1／min。必要时可在柱上加压。收集流出液于蒸发皿中，在水浴上蒸发至近干，加入5ml 95％乙醇。水（50＋50）溶解。

5.1.6 眼影和睫毛油：取2g样品溶于10ml无水乙醇中，其他步骤如匀浆、离心等同5.1.3。如效果不好，也可用硅藻土（见5.1.4）或95％乙醇-水（50＋50）（见5.1.3）浸提。
5.1.7 粉类样品：同5.1.5或5.1.4。

5.1.8 含腊质的捧状样品取2g样品溶于10ml氯仿，置于50℃水浴中并振摇，以保证溶解完全。

5.1.9 皂类：取2g的已粉碎皂类样品，分散于10ml无水乙醇中，其余匀浆等步骤同5.1.3。

5.2 防腐剂初筛

5.2.1 点样：用微量注射器或定量毛细管吸取5.0μ1待测样液，分次点样于硅胶薄层板（4.2.1）上，每次约1μ1。样点位置距底边lcm。两个样点相隔1.5cm。每个待测样同时制备4块板。

5.2.2 展开：分别向四个层析缸内的液槽注入20ml展开剂MP1、MP2、MP3、MP4（3.2），立即将已点样的薄层板放入液槽内，盖好缸盖(12)。，控制温度在20±1℃和相对湿度70％。当展开剂前沿前进约6cm后，取出薄层板，风干3Omin。

5.2.3 辨认

5.2.3.1 分别检查用展开剂MP1、MP2、MP3和MP4展开的薄板，用笔勾出显现的斑点轮廓，计算Rf 值并记录颜色特征。

5.2.3.2 将用MP1、MP2、MPs和MP4展开的薄层板，分别在254nm(13)和366nm(14)下检查。标出并计算斑点的 Rf ，记录荧光特征。

5.2.3.3 分别用R9、R3、R7和R4处理MP1、MP2、MP3和MP4展开的薄层板，计算色斑的Rf 值，记录颜色特征。

5.2.3.4 根据4块板上各斑点的Rf 值及显色前斑点颜色、254nm和366nm下荧光特征及显色斑点特征，对照表2-3-26所列各防腐剂的Rf 和色斑特征，可以初筛出存在于化妆品中防腐剂的种类(15)(16)。

表2-3-26各防腐剂在四种展开体系和显色剂中的Rf 值和斑点特征

防腐剂

代号①
初筛实验的Rf 值及斑点特征
确认时的班点

颜色②
MP1-R9
MP2-R3
MP3-R7
MP4-R4
Rf
颜色②
实验体系⑤

目测
254
356
Rf
颜色②
Rf
颜色②
Rf
颜色②
Rf
颜色②

AC1
-
V
-
0.60
-
0.57
-
0.98
-
0.93
-
-
-

AC2
-
V
-
0.25
-
0.50
OR
0.98
-
0.95
-
0.85
V
5.5.2

AC3
-
V
-
0.27
-
0.57
Y
0.98
-
0.95
-
0.70
V
5.5.2

AC4
-
V
-
0.30
-
0.57
Y
0.98
-
0.95
-
0.60
V
5.5.2

AC5
-
V
-
0.35
-
0.60
Y
0.98
-
0.95
0.50
V
5.5.2

AC6
-
V
-
0.40
-
0.60
-
0.98
-
0.95
-
0.40
V
5.5.2

AC7
-
V
-
0.40
-
0.60
-
0.98
-
0.95
-
0.40
V
5.5.2

AC8
-
V
-
0.35
-
0.60
Y
0.98
-
0.95
-
0.40
V
5.5.2

AC9
-
(V)④
-
0.55
-
0.60
(OR)
0.90
-
0.90
-
-
-

AC10
-
B
(F)
0.55
(P)
0.57
OR
0.95
(F)
0.90
-
-
-

AC11
-
V
-
0.60
V
0.60
(OR)
0.98
-
0.93
-
-
-

AC12
-
-
-
0.60
P-V
0.60
-
0.98
-
0.95
-
-
-

AC13
-
V
-
0.60
BU
0.60-
OR
0.98
-
0.95
-
-
-

0.75(t)

H1
-
(V)
-
0.60
-
0.77
OR
0.98
-
0.95
-
-
-

H2
-
-
-
0.50
G-B
0.55
-
0.98
-
0.95
-
0.25
G-B
5.5.3

H3
-
V
-
0.30
-
0.53
-
0.98
-
0.95
-
-
-

H4
-
V
-
0.30
-
0.53
(OR)
0.98
-
0.95
-
-
-

H5
(V)
-
0.60
-
0.60
-
0.73
-
0.98
-
0.95
-
-
　
-

H8
-
V
-
0.60
-
0.85
R-B
0.98
-
0.95
-
-
　
-


-
0.80
OR
0.98
-
0.95
-
-
-

H6
-
(V)
-
0.35
-
0.55
-
0.98
-
0.95
-
-
-

H7
-
(V)

H9
-
V
-
0.55
(P)
0.60
-
0.98
-
0.95
-
-
　
-

H10
-
V
-
0.30
(P)
0.65
OR
0.98
-
0.95
-
-
　
-

H11
-
(V)
-
0.70
-
0.85
(OR)
0.98
-
0.95
-
-
　
-

H12
-
(V)
-
0.60
-
0.67
OR
0.98
-
0.95
-
-
　
-

H13
-
(V)
-
0.55
-
0.90
OR
0.98
F
0.95
-
-
　
-

H14
-
V
-
0.50
(M)
0.60
OR
0.98
-
0.95
-
-
　
-

H15
-
(V)
-
0.30
-
0.35
-
0.90
-
0.85
-
-
　
-

　 　 　 　 0.05
　
0.10
　
　
-
0.80
-
-
　
-

H16
-
V
-
0
-
0
0.40-0.70(t)
-
0.80
-
-
-

Ph1
-
(V)
-
0.60
R
0.70
OR
0.98
-
0.95
-
-
　
-

Ph2
-
V
-
0.60
(Be)
0.75
B-O
0.98
-
0.95
-
-
　
-

Ph3
Be
V
F
0.05
-
0.10-0.30
V
0-0.80
V
0-0.80
Be
-
　
-

　 　 　 　
　
　
(t)③
　
(t)
　
　
　
　
　
　

F1
-
-
-
0
-
0
Y
0.90
F
0.85
M
0.10
F
5.3.1

F2
-
(V)
-
0.60
-
0.65
-
0.98
-
9,93
-
-
　
-

F3
-
-
-
0.10
-
0.30
(M)
0.98
F
0.90
-
-
　
-

F4
-
-
-
0.05
-
0.10
-
0.90
F
0.85
-
-
　
-

F5
-
-
-
0
-
0
-
0.25
F
0.20
B-V
-
　
-

F6
-
(V)
-
0.10
-
0.15
-
0.98
-
0.90
-
-
　
-

F7
-
-
-
0
M
0
Y
0.15
F
0.20
P
-
　
-

F8
-
-
-
0
-
0.05
-
0.90
F
0.85
-
0.30
F
5.3.1

F9
-
-
-
0
-
0.05
-
0.90
F
0.85
-
0.40
F
5.3.1

F10
-
-
-
0
(M)
0
-
0.80
F
0.75
-
-
　
-

F11
-
-
-
0
-
0
Y
0.35
(F)
0.40
-
-
　
-

Py1
(Y)
V
-
0.05
-
0.05
-
0.75
-
0.65
(OR)
-
　
-

Py2
M
V
-
0-0.15

(t)
-
0-0.20

(t)
-
0.80
-
0.85
W
-
-

Py3
-
V
-
0
-
0
-
0.60
-
0.60
W
-
　
-

Py4
M
V
-
0-0.05

(t)
-
0-0.20

(t)
-
0.80
-
0.85
W
-
-

Py5
M
V
-
0-0.05

(t)
-
0-0.20

(t)
-
0.80
-
0.85
W
-
-

Am1
-
V
-
0
-
0
-
0.30-0.60(t)
-
0.80
V-P
-
-
-

Am2
-
V
-
0
-
0
-
0.20-0.50(t)
-
0.80
V-P
-
　
-

Q1
-
(V)
-
0
-
0
-
0.70
-
0.85
B-V
-
　
-

Q2
-
(V)
-
0
-
0
-
0.70
-
0.85
B-V
-
　
-

Q3
-
-
-
0
-
0
-
0.20
-
0.70
B-V
-
　
-

Q4
(Y)
V
F
0
-
0
R
0.85
-
0.85
GR
-
-

Q5
-
-
-
0
P
0
-
0.30
-
0.80
BU
-
　
-

M1
-
-
-
0.45
CY
0.50
-
0.98
-
0.95
-
-
　
-

M2
-
-
-
0
-
0
-
0.90
-
0.85
BU
-
-

M3
-
(V)
-
0.40
P
0.50
-
0.98
-
0.95
-
-
　
-

M4
-
(V)
-
0.50
P
0.55
(W)
0.98
-
0.95
-
0.30
P
5.3.3

注:①见表2-3-24。
②F-荧光；V-紫色；GR-绿色；P-粉红；Y-黄色；OR-橙色；M-深红；Be-米色；BU-蓝色；B-V兰紫色；B-O棕橙色；W-白色；P-V粉紫色；R-红色；G-B灰蓝色；V-P紫粉色；R-B红棕色。
③拖尾。
④括号（）表示颜色很浅。
⑤实验体系见正文。
⑥展开剂（MP1～MP2）和显色剂（R3～R9）见正文。

5.3 防腐剂的确认

根据防腐剂初筛实验（5.2）选择以下5.3.1～5.3.4适宜的薄层板-展开剂-显色体系,将待测样液5μl(17)和初向下出的防腐剂的标准溶液1μl按5.2.1点样在同一块薄层板上.薄层板经懈开显色后,待测样液防腐剂的Rf 值及颜色牲与同块板上标准比较,即可确认。
5.3.1 防腐剂海克替啶(F1)、1，3-双（羟甲基）-5，5-二甲基咪唑啉-2，4-二酮（F10）和1-羟甲基，5，5-二甲基-乙内酰脲（F11）确认中使用的薄层板-展开液-显色液体系：

薄层板：同4.2.1。

展开液：将20ml甲苯、40ml氯仿、40ml丙酮和2ml90%甲酸混合。

显色液：将0.2ml乙酰丙酮、0.5ml99.9%乙酸、15g醋酸铵加至50ml水中，混匀。

将展形式风干的板喷经显色剂，在100℃烘箱中烘烤5min，然后在366nm下观察。

5.3.2 防腐剂苯甲酸酯类(Ac2～Ac8)的分离和确认:

薄层板:同4.2.2。

展开液:将80ml甲醇和20ml水混合。

展开后：将已风干的板于254nm下观察。

5.3.3 防腐剂3，4-氯苯甲醇（H2）或/和苯氧异丙醇 M4的确认：

薄层板：同4.2.1。 展开剂：氯仿。 显色液：R9（3.3.7）。 5.3.4其他防腐剂的确认：将点有待测样液和标准的薄层板，在初筛实验使用4种展开剂-显色剂体系中，选择最适宜的一种（或二种）进行重复实验。

6 防腐剂含量的评定

综合比较待测溶液及已知标准液斑点的呈色强度及面积。如待测溶液斑点大于标准斑点，表明了待测样品含该防腐剂的量超过卫生标准允许最大使用量(19)。必要时，可将斑点刮下，溶于相应的溶剂，在适宜波长下，测吸光度（或荧光强度）以进一步定量；或直接将薄层板在薄板扫描光度计上测量。