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【转帖】溴硝丙醇等25种防腐剂薄层色谱法

happy水中月

2008/03/01

薄层色谱（TLC）

1适用范围

本法可快速检测化妆品中溴硝丙醇等25种防腐剂。

2 原理
化妆品中防腐剂经有机溶剂萃取、过滤、蒸发、定容后，用薄层色谱分离、显色剂显示斑点，与已知标准进行比较定性。

3 试剂
3.1 展开剂
3.1.1 苯丙酮（8 2）。
3.1.2 氯仿甲醇（9 1）。
3.2 显色剂
3.2.1 乙酚丙酮（1）吸取0.2ml乙酷丙酮，加0.3ml冰醋酸及15.4g醋酸铵溶于100ml水中。
3.2.2 4-氨基安替吡啉。铁氰化钾（2）
喷显剂Ⅰ：2％的个氨基安替吡啉的酒精溶液。
喷显剂Ⅱ：8％铁氰化钾水溶液。
3.2.3铬变色酸试剂(3)：将1g铬变色酸钠（1，8-二羟基萘-3，6-二磺酸钠）溶于15ml水中，小心加入15ml硫酸。
3.2.4重氮化联苯胺(4)：（Ⅰ）联苯胺贮备液：将5g联苯胺及14ml 36％的盐酸加入到水中，并稀释至1L。（Ⅱ）亚硝酸盐溶液：10％的亚硝酸钠溶液，每日新配制。（Ⅲ）喷显剂；将20ml联苯胺溶液与20ml亚硝酸盐溶液在0℃下混合，并不停搅拌。此试剂可稳定2～3小时。
3.2.5 碘蒸气：将3～4粒碘晶体放入约2L的烧杯中，在蒸汽浴上加热。把TLC板放在烧杯上方，使硅胶表面与碘蒸气接触。
3.2.6 4-甲基-7-羟基香豆素(5)：将20mg4-甲基-7-羟基香豆素溶于35ml乙醇中并以水稀释至100ml
3.3防腐剂：商品级，按表2-3-23最大允许用量的1／5的浓度配制工作液(6)。
表2-3-23 防腐剂的Rf 值及其显色特征和最大允许用量
防腐剂(序号)*

　
Rf 值
检测方法
最大允许用量%

C6H6-ACETONE

(8 2)
CHCl3-MeOH

(9 1)
UV
I2
显色剂

溴硝丙醇(4-63)
0.47
0.57
　
　 (c),V;(a),Y
0.1

丁基羟基甲苯(3-10)
0.79
0.83
　
X
(d),Y
0.15

异丙基邻甲苯酚(4-32)
0.65
0.75
　
X
(b),p;(d),Y
0.1

洗必泰(4-44)
0.40
0.62
X 　　
0.3

4-氯3-甲苯酚(4-55)
0.59
0.65
　
X
　
0.2

4-氯3,5-二甲苯酚(4-56)
0.60
0.67
　
X
　
0.5

脱氢乙酸(4-62)
0.15
0.26
X
　
　
0.6

2,4-二氯3,5-二甲苯酚(4-8)
0.65
0.75
　
X
　
0.1
二氯酚(4-7)
0.50
0.62
X
X
　
0.2

二甲克生(4-9)
0.56
0.53
X
　
(b),p;(d),Y
0.2

咪唑烷基尿(4-27)
0.00
0.00
　
X
(f),p;(c),V;(a),Y
0.6

六氯酚(4-24)
0.14
0.41
X
X
(b),p;(d),Y
0.1

卤卡班(4-20)
0.53
0.67
X
　
　
0.3

三氯生(4-21)
0.74
0.81
　
X
　
0.3

羟甲基5,5-二甲基乙内酰尿(4-49)
0.23
0.59
　
　
(c),V;(a),Y
0.2

没食子酯辛酯
0.12
0.22
X
X
　
(0.1)

邻苯基苯酚(4-52)
0.88
0.79
X
X
　
0.2

对羟基苯甲酸丙酯(4-46)
0.56
0.65
X
X
　
0.4

间苯二酚(3-22)
0.39
0.34
X
X
　
水扬酰替苯胺
0.65
0.72
X
X
(b),p;(d),Y
　
四溴邻甲苯酚(4-31)
0.72
0.80
X
　
(b),G;(d),Y
0.3
三溴沙伦(3-8)
0.60
0.69
X
　
　
1
三氯卡班(4-18)
0.55
0.70
X
X
　
0.2
N-(三氯思虑在硫代)环已-4-烯-4-1,2-二羟基酰亚胺
0.70
0.83
　
　
(f),p
吡啶硫酮锌(4-33)
0.49
0.82
X
XX
　
0.5

* 化妆品卫生标准(GB7916-87)中表3或表4中出现时的序号,如(4-63)即表4序号63
4 仪器
4.1 薄层展开缸:玻璃缸25×6×4cm,带盖,用滤纸衬里。
4.2 薄层板用玻璃板:20×20cm。
4.3 硅胶:薄层层析用,内含产生荧光的物质或GF254硅胶。
4.4 紫外光灯:能发射254nm波长。

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happy水中月

第1楼2008/03/01

5 分析步骤

5.1 TLC板的制备

称取3gGF254硅胶用水混合均匀，涂布于玻璃板上（20×20cm），使其厚度为250μm。放在空气中干燥约15min后在100℃活化2小时，取出，放干燥器中保存。一般可保存2～3天，若放置时间较长，应再活化后使用。

5.2样品预处理

称取0.2g样品置于50ml烧杯中（如果防腐剂浓度很低需加大样品量），加入25ml乙醇并混匀，过滤除去不溶物，在蒸汽浴上吹气蒸发乙醇溶液至1.0ml，移于具塞试管中供点样用。

5.3 点样
在距薄层板下端3cm的基线上用微量注射器点样。每块板上样点距边缘和两点间距约为lcm，点直径约3mm，在同一板上滴加点的大小应一致，每点可滴加5～10μl，滴加时可用吹风机边点样边吹干。同时制备二块板。

5.4 TLC板展开

将薄层板分别放入预先放有展开剂3.1.1和展开剂3.1.2的层析缸中进行展开。当展开剂前沿移动约10cm后，取出，自然挥干。

5.5 样斑的呈色和确认

5.5.1 将两块薄层板分别在紫外光灯下观察，记录斑点位置。计算Rf 值。

Rf=起点至点中心距离/起点至溶剂前沿距离

5.5.2 将两块薄层板分别放人有饱合碘蒸气容器中。记录斑点位置，计算Rf 值。

5.5.3 根据5.5.1和5.5.2的Rf 值与表2-3-23所列各防腐剂的Rf 值比较，估测样品中含有的防腐剂的品种。参考表中该防腐剂与显色剂的显色反应，选用适宜的显色剂显色以进一步确定。如5.5.1和5.5.2处理后均无样斑出现，3.1.1展开的板用显色剂3.2.1喷布；用3.1.2展开剂展开的薄层板，用显色剂3.2.6喷布，以检查样液中是否有溴硝丙醇和吡啶硫酮锌。

5.6 样斑的确认和含量的估计

根据5.5识别的结果，按5.1另制二块薄层板。将样品液和初步识别的标准同时点样在薄层板上，按5.4展开和5.5进行显色。比较样品溶液和标准斑块的Rf 值和斑点面积及颜色的大小，以确认和估计含量(7)。

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happy水中月

第2楼2008/03/01

注解:

（1）在TLC板喷布3.2.1试剂需在110℃加热10min以后才完成显色程序。

（2）显色剂3.2.2中的Ⅰ和Ⅱ先后喷于TLC板上，然后将板置于25％氢氧化铵溶液的容器中，呈现红橙色到橙红色色斑表明含有苯酚。

（3）在喷有3.2.3试剂后TLC板应置于110℃～120℃，加热10～30min后便显色。

（4）在TLC上喷雾3.2.4溶液显色可能很快，也可能几小时之后才出现，这取决于酚的种类。

（5）在TLC板上喷雾3.2.6溶液后，将板放入含有25％。氢氧化胺溶液的容器中，在长波长紫外灯下检查TLC板，如有荧光斑点表明有氮杂环化合物。

（6）样品值与标准溶液的Rf 值相比较时，可鉴别是何种防腐剂。检出限范围在0.1～0.5μg。

（7）因配制的标准溶液浓度为化妆品卫生标准允许浓度的、1/5倍，当标准点样量同样品点样量，样品显色斑点面积/颜色强度大于标准，因样品液已稀释了5倍，故其含该防腐剂的量超过卫生标准最大允许使用量。

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