【转帖】液状油类样品中有机色素测定 薄层色谱法

4 分析步骤

4.1样品预处理(3)

取样品10～50ml于分液漏斗中，加3～5倍体积的石油醚，充分混合后加入N，N-二甲基甲酰胺10～50ml，充分振荡。静置分层后，分取下层的N，N-二甲基甲酰胺于另一分液漏斗中，石油醚仍有颜色时，再加N，N-二甲基甲酰胺5～30ml，充分振荡萃取出色素，反复萃取，直到N，N-二甲基甲酰胺无色为止。合并全部N，N-二甲基甲酰胺萃取液，加入其1／2体积的石油醚，充分振荡后弃去石油醚。此操作重复二次后，在二甲基甲酰胺溶液中加入同体积的水稀释，再加1／2体积的氯仿，充分振荡，静置分层。分取氯仿层于另一容器中。N，N-二甲基甲酰胺液仍有颜色时，反复萃取，直到氯仿层无色为止。合并全部氯仿液，加其1/2体积的水，充分振荡弃去水相，将氯仿萃取液移人另一干燥容器中，加无水硫酸钠脱水，过滤，以尽可能低的温度蒸发。残留物溶于少量的苯作为样品溶液。

层析柱（内径1cm、长30cm，一端有狭细部）保持垂直，其狭细部的上面塞上预先浸渍石油醚并除去气泡的脱脂棉。取硅胶8g于100ml烧杯中，加石油醚30ml充分搅拌除去空气，用湿法填充在层析柱中。硅胶全部沉降后，在硅胶上面盖上比玻璃管内径稍小的圆形滤纸。待柱上部残留的石油醚全部渗入拄内时（注意液面不可低于柱面），把样品溶液徐徐注入层析柱内，然后用苯层离，并将柱上已分离的色带溶出（溶液的流出速度lml／min）(4)，稀释成适当的浓度作为吸收光谱、滤纸层析及薄层层析用待测溶液A。

用苯溶出色素后，柱内仍残留着色带时，再用氯仿(4)将色带溶出。此溶出液作为吸收光谱测定、滤纸层析和薄层层析用待测溶液B。

4.2 测定

4.2.1 吸收光谱法：测定待测溶液A的可见吸收光谱，并与红色501号（药用腥红）(5)、红色505号（油红XO）(6)、橙色403号（橙SS）（7）、黄色404号（黄AB）（8）、黄色405号（黄OB）（9）、绿色202号（醌茜绿SS）（10）、蓝色403号（苏丹兰-B）（11）及油红OS（12）的吸收光谱比较和判定。
再测定待测溶液B的可见吸收光谱，并与黄色204号（喹啉黄SS）（13）的吸收光谱比较和判定（14）。


4.2.2 滤纸层析法：将待测溶液A及色素标准溶液3.6.1的各标液分别点在用液体石腊浸过的同一滤纸，距下端4cm的位置，二点之间隔lcm，用展开溶剂3.4.1，3.4.2或3.4.3展开20～25cm。

待测溶液B则用色素标准3.6.2与上述同样操作。

4.2.3 薄层层析法（15）：将薄层层析用待测溶液A及色素标准溶液3.6.1分别点于同一薄层上，用展开溶剂3.5.1，3.5.2，3.5.3或3.5.4展开。

待测溶液B，则用色素标准液3.6.2及薄层展开溶剂3.5.4与上述同样操作。

注解：

（1）展开溶剂3.4.3可分离红色501号（药用猩红），红色225号（苏丹Ⅲ）和油红OS。

（2）见一.混合焦油色素的注解(1)。

（3）样品预处理概要如图2-3-42所示，本试验以不含乙醇的样品为对象。

（4）也可以用二甲基甲酰胺萃取，但为了除去残留物中残存的油分，把滤纸色谱法难以分离的色素，事先经柱色谱分离。由于黄色204号难以用苯溶出，因此在用苯洗脱结束后，用氯仿继续洗脱。

（5）红色501号（药用猩红，Medical Scarlet），C.I. 26105。

暗褐色粉末，氯仿溶液呈红色，溶于氯仿、油脂，难溶于乙醇、丙酮，几乎不溶於水。硫酸溶液呈蓝绿色，用水稀释后由蓝、紫红色变为橙色。m.p.186℃。

（6）红色505号（油红XO），（Oil Red XO），C.I.12140。

橙褐色～赤褐色的结晶性粉末，四氯化碳溶液呈黄红色。溶于乙醇（约0.4％ 26℃），丙酮、苯、甲苯、油脂，不溶于水。H2S04溶液呈蓝红色，用水稀释生成橙色沉淀。氯仿溶液的最大吸收波长498nm。M.p.160～166℃。

（7）橙色403号（橙SS， Orange SS），C.I. 12100

橙色结晶性粉末，四氯化碳溶液呈橙色。溶于乙醇（约0.2％，21℃）、丙酮、甲苯、油脂（棉籽油中约4％，21℃）。不溶于水。硫酸溶液带紫红色，用水稀释生成橙红沉淀。氯仿溶液的最大吸收波长492nm，m.p. 128～132℃。

（8）黄色404号（黄AB， Yellow AB），C.I. 11380。

橙红色-暗橙红色的结晶粉未或粉末。溶于四氯化碳呈橙黄色。溶于乙醇（约1.6％，21℃）、丙酮、苯、甲苯、油脂（棉籽油约4％，21℃），难溶于甘油、丙二醇，不溶于水。硫酸溶液呈紫色，用水稀释变成红色，生成橙色沉淀。

氯仿溶液的最大吸收波长436nm。m.p.99～104℃。

（9）黄色405号（黄色OB） Yellow OB），C.I. 11390。

橙红～橙黄色结晶粉末或粉末，溶于四氯化碳呈橙黄色。溶于乙醇（约0.8％，21℃）、油脂（棉籽油中约4％、21℃），难溶于甘油、丙二醇，不溶于水。H2SO4，溶液呈紫色。加水稀释呈赤红色溶液，并生成橙褐色沉淀。本品的乙醇溶液（0.005～0.001％）1ml加入福尔马林溶液0.lml，H2SO4 0.lml，然后加水8.0ml呈黄。橙色（黄AB为红色）。

氯仿溶液的最大吸收波长438nm。m.p. 120～126 ℃。

（10）绿色202号（酮茜绿SS， Quinizarine Green SS），C.I. 61565
暗蓝绿色粉末，溶于苯、甲苯等有机溶剂，呈蓝绿色。不溶于水、甘油、醇类，难溶于乙醇。硫酸溶液蓝色，用水稀释生成蓝绿色沉淀。

苯溶液的最大吸收波长645lznm（610士2nm）。m.p. 219～219.5℃。

（l1）蓝色403号（苏丹蓝8，Sudan Blue B）

暗蓝紫色粉末，溶于乙醇、棉籽油、橄榄油、蓖麻油呈蓝紫色，几乎不溶于丙烯醇，不溶于水。此色素C.I.中无记载。

（12）参照“一、混合焦油色素的测定”中的待测溶液A（石油醚萃取液）项及注解11，

12，13）。

(l3）黄色204号（喹琳黄SS， Quinoline Yellow SS） C.I. 47000

黄色粉末，溶于丙酮、苯、甲苯呈黄色。稍溶于乙醇、脂肪酸、油脂、蜡，难溶于甘油醇类，不溶于水。H2SO4溶液呈黄褐色，用水稀释生成黄色沉淀。

氯仿、苯溶液的最大吸收波长420nm（444nm），超过160℃则升华。

（14）以上样品溶液A、8的吸收光谱测定的图谱如图2-3-43。各图的序号与注解序号同。