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薄层色谱(TLC)
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【资料】亲和色谱的载体选择
zhwaisw
2008/06/13
私聊
薄层色谱(TLC)
用于亲和色谱的理想载体应具有下列特性:⑴不溶性:不溶于水;⑵渗透性:疏松网状结构,容许大分子自由通过;⑶有一定硬度,最好为均一的珠状;⑷具有大量可供反应的化学基团,能与大量配基共价连接;⑸非特异性吸附能力极低;⑹能抗微生物和酶的侵蚀;⑺有较好的化学稳定性;⑻亲水性。选择配基根据对纯化大分子的特异性的全面认识。
选择也的配基有两条标准:第一是蛋白质和配基之间必须有强的亲和力,解离常数在5mM以上不是好配基; 相反亲和力太高也是有害的,因为在解离蛋白质──配基复合物时所需的条件就要强烈,样可能使蛋白质变性。例如用抗生物素蛋白作配基纯化含生物素的羧化酶时,生物素──抗生物素蛋白复合物的解离常数达10-15M,解离时需要pH1.5,6M盐酸胍,在这种条件中。羧化酶数已经变性。选择配基的第二标准是,配基必须具有适当的化学基团,这种基团不参与配基与蛋白质之间特异结合,但可用于活化和载体相连接,同时又不影响配基与蛋白质之间的亲和力。
琼脂糖凝胶亲水性强,理化性质稳定 (商品名:Sepharose);聚丙烯酰胺凝胶理化性质稳定,耐有机溶剂及去污剂, 抗微生物能力强,特别适应用配基与提取物亲和力比较弱的物质。葡聚糖凝胶: 有良好的化学及物理性质,孔经小。 纤维素非特易吸附严重,廉价,易得。
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