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【求助】怎么不同样品保留时间一样???

  • ninghan21222
    2008/06/14
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 我今天用安捷伦1100做有机酸分析,柱子是kromasil C18,紫外215nm检测,流动相是0.01M KH2PO4,刚开始还正常,4种不同有机酸都能分离开,换了一瓶新配的流动相后就发现4种有机酸单标和混标保留时间都在1.7min左右,昨天也发生过这种情况,后来晚上先用5%甲醇1ml/min冲1h,100%甲醇0.1ml/min冲12h后今天用就正常了,请问大家这是什么原因呢??
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  • wuaixuexi

    第1楼2008/06/14

    有可能是样品有残留,使你分析变得不可依性,重新冲洗了柱子就好了,我觉得应该就是这个问题@!

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  • 阿du

    第2楼2008/06/15

    你用的纯水相么?一般的C18柱子在纯水相里长时间会导致C18链(因为疏水性)的倒伏,从而导致组分没有有效的保留,柱子不具备分离能力。经过有机相(甲醇)的活化(再生),C18链重新舒展开来,能与样品相互作用,根据相互作用的不同使不同组分在不同的时间流出,达到分离的目的。
    建议:适当增加有机相的比例,以保持柱子的分离能力,工作结束后,用溶剂冲洗再浸泡过夜。
    另外,215nm,甲醇应该有一定吸收了吧?能否增大波长?或者改用乙腈可减小流动相的吸收。

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  • 风烟

    第3楼2008/06/15

    谢谢du老师,学习了……

    duliuhui 发表:你用的纯水相么?一般的C18柱子在纯水相里长时间会导致C18链(因为疏水性)的倒伏,从而导致组分没有有效的保留,柱子不具备分离能力。经过有机相(甲醇)的活化(再生),C18链重新舒展开来,能与样品相互作用,根据相互作用的不同使不同组分在不同的时间流出,达到分离的目的。
    建议:适当增加有机相的比例,以保持柱子的分离能力,工作结束后,用溶剂冲洗再浸泡过夜。
    另外,215nm,甲醇应该有一定吸收了吧?能否增大波长?或者改用乙腈可减小流动相的吸收。

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  • xingbo0304

    第4楼2008/06/15

    du老师真是经验丰富啊,很有收获

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  • vickey-gxy

    第6楼2008/06/15

    谢谢du老师,学习了……[/quote]

    duliuhui 发表:你用的纯水相么?一般的C18柱子在纯水相里长时间会导致C18链(因为疏水性)的倒伏,从而导致组分没有有效的保留,柱子不具备分离能力。经过有机相(甲醇)的活化(再生),C18链重新舒展开来,能与样品相互作用,根据相互作用的不同使不同组分在不同的时间流出,达到分离的目的。
    建议:适当增加有机相的比例,以保持柱子的分离能力,工作结束后,用溶剂冲洗再浸泡过夜。
    另外,215nm,甲醇应该有一定吸收了吧?能否增大波长?或者改用乙腈可减小流动相的吸收。

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  • ninghan21222

    第7楼2008/06/15

    我流动相用的是0.01M的KH2PO4 PH:2.65(磷酸调节),那这样岂不是不能用纯硫酸盐作为流动相了,但是我看很多论文都用了啊

    duliuhui 发表:你用的纯水相么?一般的C18柱子在纯水相里长时间会导致C18链(因为疏水性)的倒伏,从而导致组分没有有效的保留,柱子不具备分离能力。经过有机相(甲醇)的活化(再生),C18链重新舒展开来,能与样品相互作用,根据相互作用的不同使不同组分在不同的时间流出,达到分离的目的。
    建议:适当增加有机相的比例,以保持柱子的分离能力,工作结束后,用溶剂冲洗再浸泡过夜。
    另外,215nm,甲醇应该有一定吸收了吧?能否增大波长?或者改用乙腈可减小流动相的吸收。

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  • nnsss

    第8楼2008/06/15

    有专业的水相柱可以试一下

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  • honghao81_2007

    第9楼2008/06/15

    谢谢!真的收益不少,一直不知道为什么不能用水做流动相,茅塞顿开!谢谢。

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  • Easy-Boy

    第10楼2008/06/16

    柱子发生塌陷,柱效为o,样品不能在色谱柱上得到保留。需要再生(如你晚上的冲洗)

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