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【求助】高效液相荧光检测氨基酸遇到的问题

  • wudaotianshi17
    2008/07/15
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 我用安捷伦1200做氨基酸的柱前衍生,用的衍生液为OPA,要测量Asp,Glu,Gly,Tau,GABA五种氨基酸。这几天在调整增益的时候发现样品位置换为纯水,加衍生液反应时在氨基酸保留时间处仍然会出峰,和要测量的氨基酸重合性很好,怀疑是污染,但是清洗了系统,换了新的水和衍生液后仍然有峰,单进衍生液也可以出峰,都是在氨基酸保留时间处,但纯水没有峰出现,请问大家还有什么可能原因?困惑中
    我的流动相:A:乙酸钠:甲醇:四氢呋喃(400:95:4)
    B:乙酸钠:甲醇(120:380)均为体积比
    梯度:0min: 0%B
    0-10min:63%B
    10-12min:63%B
    12-12.01min:100%B
    12.01-17min:100%B
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  • cjf123

    第1楼2008/07/15

    可能原因:1、每次进样完是否有洗针,可能进样针会殘留有样品。
    2、你的纯水的质量有问题。
    3、操作中的问题,人的汉水、唾沫等当中都含有氨基酸的。
    所以每次进完样后多洗下针、换水、注意操作。

0
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  • Ty

    第2楼2008/07/16

    应该是你的衍生液被污染了,纯水有没有被污染不好说,因为单进纯水而不加衍生液的话肯定是不会出峰的

    wudaotianshi17 发表:我用安捷伦1200做氨基酸的柱前衍生,用的衍生液为OPA,要测量Asp,Glu,Gly,Tau,GABA五种氨基酸。这几天在调整增益的时候发现样品位置换为纯水,加衍生液反应时在氨基酸保留时间处仍然会出峰,和要测量的氨基酸重合性很好,怀疑是污染,但是清洗了系统,换了新的水和衍生液后仍然有峰,单进衍生液也可以出峰,都是在氨基酸保留时间处,但纯水没有峰出现,请问大家还有什么可能原因?困惑中
    我的流动相:A:乙酸钠:甲醇:四氢呋喃(400:95:4)
    B:乙酸钠:甲醇(120:380)均为体积比
    梯度:0min: 0%B
    0-10min:63%B
    10-12min:63%B
    12-12.01min:100%B
    12.01-17min:100%B

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  • wenyu689

    第3楼2008/07/18

    楼主说清洗系统,是怎么清洗的?
    阀和针都洗了吗?
    根据我的经验,高灵敏度检测方法(荧光法属于高灵敏度)换样品时,需要把针和阀好好清洗。
    要判断是阀还是针污染,只要不进样,空转阀看看有没有峰出来。如果有,就是阀污染,否则针污染。

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  • 风烟

    第4楼2008/07/18

    我们也检测氨基酸,也用OPA衍生,但就是柱后衍生。
    我感觉您的衍生液有问题,您检查一下衍生液所用的水啊什么的吧……
    欢迎以后常来……我还是第一次遇到与我们检测相同物质的呢,希望您的问题早日解决……

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  • wudaotianshi17

    第5楼2008/07/18

    谢谢楼上几位的帮助!我清洗系统就是用进样程序进水,后来进的水和异丙醇,最后进的是水和甲醇的混合液,直接进过空气,在后运行时间出了峰。纯水是所里的制水机制的,质谱也用这个水,据他们比较说水比屈臣氏和娃哈哈的都好,但不知道对氨基酸检测会不会有影响。楼上说OPA柱后衍生是怎么做的,稳定吗?我也是头一次接触液相,对测氨基酸更是知道的不多,请大家多帮忙啊!谢谢谢谢!

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  • 风烟

    第6楼2008/07/19

    就是在柱子后面加个反应装置,把衍生剂(OPA)按过量输送进去,与分离开的氨基酸反应,再一起流过检测器。我们这个方法用了有十多年了,还算稳定。

    wudaotianshi17 发表:谢谢楼上几位的帮助!我清洗系统就是用进样程序进水,后来进的水和异丙醇,最后进的是水和甲醇的混合液,直接进过空气,在后运行时间出了峰。纯水是所里的制水机制的,质谱也用这个水,据他们比较说水比屈臣氏和娃哈哈的都好,但不知道对氨基酸检测会不会有影响。楼上说OPA柱后衍生是怎么做的,稳定吗?我也是头一次接触液相,对测氨基酸更是知道的不多,请大家多帮忙啊!谢谢谢谢!

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