【求助】SOS——请教关于液相转液质时方法建立的问题

1. 关于建立LC-MS/MS方法学中内标的选择问题
在我所查到的文献中，所选择的内标，基本上都是待测药物结构类似物（仅某几个官能团的区别），或者是待测药物的放射性标记产物，想请教下，是否在做LC-MS/MS时，内标选择必须如此？这二者对我而言都不太易获得，可否继续用我在做HPLC时选择的内标？尽管此内标与待测药物结构很不一样，不过在液相条件下保留时间接近，而且在样品处理过程中是很稳定的。不知这样是否可行？
原则上选择结构相近的或是同位素标记的，如果实在不易得，别的化合物也可以，但是液相上的内标一定使用于质谱，这个还要在质谱上试一下，如果行，那也是可以的。

2. 关于样品处理方面的问题
LC-MS/MS是否要求样品很干净？我做的是血样，处理方法是用甲基叔丁基醚萃取吹干重溶，是否需要求萃取剂是色谱纯（色谱纯和分析纯价格差别还是蛮大的）
我们用过分析纯的，如果不放心，可以把试剂重蒸一下再拿来提取，这样就可以不买色谱纯的了，但是就是自己麻烦一些。

3. 关于色谱柱选择的问题
原液相使用的是C18，200mm长，流速1.0，一个样大概跑12分钟左右，但是LC-MS/MS要求流速最好小于0.3，这样一个样的时间是原来的三倍多，是不是要换短点的柱子？（文献上用的都只有50mm左右）对分离度是不是会有影响？
如果不换柱子，可以采取柱后分流的方法。如果换柱子，要用内径小，粒径也小些的柱子。

4. 关于流动相的问题
公共实验平台仪器收费比较高，老师建议我最初摸条件还是在液相上（之前流动相内有磷酸盐，所以不能用），我想请教下，究竟要在液相上分成个什么样算是条件摸好了，因为听说如果不是分得很开也不要紧？是指药物和内标？或者出峰时间内有杂质也可以？
如果一定要用缓冲液，那么要用挥发性的盐，如醋酸铵等，不知道你要测几个成分，其实现在液相上摸不是不可以，只是效果不一定会很好，因为每个液相系统不同，这台液相上摸好了，那台液相的出峰时间等可能不一样，液相上摸个大概就行了，看看峰形不拖尾、前沿，时间差不多就可以了。质谱上的峰尽量在2－3分钟以后出峰，因为血浆中的很多成分在这个时间段出峰，可能会有基质效应。样品峰也尽量不要同时出峰，因为可能会有共流成分之间的抑制作用，影响你样品的信号。

5. 关于进样体积的问题
因为是自动进样，是否有要求每个样品的体积不小于多少？
看你的柱子，如果是你原来液相的柱子，就合你液相进的量差不多，一般也就20uL左右吧，如果是小内径的柱子，那就要少一些，一般5－10uL。