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【求助】荧光检测，血标曲线高浓度点保留时间不断提前，怎么办？

llx0919

2008/11/27

分子荧光光谱

大家好,我在做体内样品测定时用waters荧光检测，遇到四个问题先后顺序如下：
1. 用甲醇溶标准品，同一浓度样品多次进样，保留时间和峰面积都不断变化.同一样品曾出现峰面积33万，90万，80万，70万；今天上午重新测定同一来源样品：第一针tR=3.183 A=33万；第二针tR=5.391 A=71万；第三针tR=6.525 A=90万；第四针 tR=6.533 A=100万
2.血浆标准曲线也曾出现过类似问题，共7个浓度点，低浓度3个点保留时间基本没变，从第四个浓度点开始，即中浓度点保留时间开始提前，且内标和标准品峰形变差，内标峰像“馒头峰”。后四个浓度保留时间提前0.5-1分钟不等，且峰面积减小。
血浆标准曲线做过几遍，并非每遍都出现此问题，有出现过保留时间没变化的情况。
3.本实验到现在共做过4周，第1-2周中浓度标准品峰形良好（C18新色谱柱），第3周此中浓度标准品出现前沿，但此前沿不像柱效不好的前沿，即像柱分叉，又像主峰中包含了未分离出的峰。进的是标准品，应该不含杂质峰！第4周，峰形无缘无故变好，但所有色谱条件没改变过。
4.血浆提取溶剂选择乙醚或乙醚与二氯甲烷的混合溶剂。用乙醚提取，吹干后试管壁挂油脂样物质（已排除提取时提取到下层蛋白层），流动相复溶后，样品浑浊，离心后未改善。用乙醚与二氯甲烷（3：2）混合液做提取溶剂，提取回收率不稳（没乙醚高），同一模拟血浆样品中标准品峰面积出现过1万和14万的差距，但内标峰面积变化不大。
敬请各位高手指点迷津，帮我度过这个难关！在这里再次向大家表示感谢！！！！！！！！！

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