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【转帖】免疫组化常用溶液的配制！

平凡人

2009/01/30

免疫组化常用溶液的配制　
1、 PBS：
取PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在7.2~7.4之间，若偏离此范围，请用0.1N的HCL或NaOH调整。
2、 TBS：
　　2.1 Tris 缓冲液配方：(0.5M pH7.6)
　　Tris (三羟甲基氨基甲烷) 60.57g　　　1N HCL 约420ml　　双蒸水加至1000ml
　　Tris缓冲液配制方法：
　　先以少量双蒸水 (300~500ml)溶解Tris，加入HC1后，用HC1(1N)或NaOH(1N)将pH调至7.6，最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液，4℃冰箱中保存。
　　2.2 TBS配方：
　　Tris-HCI 缓冲液(0.5M pH7.6) 100ml
　　NaCI 8.5~9g(0.15mol/L)
　　双蒸水加至1000ml
TBS配制方法：
　　先以少量双蒸水溶解NaC1，再加入Tris-HC1缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。
3、枸橼酸盐缓冲液 (Citrate buffer)：
　　3.1 储存液：
　　A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g枸橼酸 (C6H8O7·H20) 溶于1000ml蒸馏水中。
　　B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g枸橼酸钠 (C6H5Na3·2H20)溶于1000ml蒸馏水中。
　　3.2 工作液：
　　取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中，溶液pH 值应为6.0±0.1
4、胰酶 (Trypsin)：
　　4.1 胰蛋白酶消化液：
　　常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶浓缩液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合(1:3稀释)，则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05% (1:10稀释)至0.25% (1:1稀释)。
　　4.2 胰蛋白酶：
取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。
5、胃酶 (Pepsin)：
　　0.4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。
6、 DAB (3.3-二氨基联苯胺)：
　　6.1 DAB Kit：
使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1ml DAB工作液，简单易用。
　　6.2 DAB：
6mgDAB溶于10mlTBS (0.05M pH7.6)，再加入0.1ml浓度为3%的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。
7、 AEC：
4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液(pH5.2)，然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。
8、 Triton X-100 (聚乙二醇辛基苯基醚)
　　免疫细胞化学中，Triton X-100常用浓度为1%和0.3%，但通常是先配制成30%的Triton X-100储存液，临用时稀释至所需浓度。
　　8.1 30%Triton X-100的配制：
　　Triton X-100 28.2ml
　　0.1M PBS (pH7.3) 或 0.05M TBS (pH7.4) 72.8ml
双蒸水加至1000ml
配制方法：
取Triton X-100 及PBS(或TBS)混合，置37~40℃水浴中2~3小时，使其充分溶解混匀。用前取该储备液稀释至所需浓度
　8.2 Triton X-100 工作液的配制：
Triton X-100是一种非离子型表面活性剂(或称清洁剂)，分子量为646.86 (C34H62O11)。它能溶解脂质，以增强抗体对细胞膜的通透性。1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本，0.3%的Triton X-100则常用于稀释血清，配制BSA等。
9、甲醇-H2O2溶液
吸取30%的H2O2 0.1ml，加入100ml纯甲醇中，充分混匀即可，使H2O2终浓度为0.3%。

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anyliveyou

第1楼2009/07/28

直接用试剂盒了,我用过一步法试剂盒,速度只要传统的1/4,操作简单.有兴趣的短联我.

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